系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)自身抗體檢測(cè)及臨床意義

施新萍 浙江省立同德醫(yī)院檢驗(yàn)科 杭州310012

陳益明 杭州市余杭區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科

婁域峰 浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科

系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)自身抗體檢測(cè)及臨床意義

施新萍 浙江省立同德醫(yī)院檢驗(yàn)科 杭州310012

陳益明 杭州市余杭區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科

婁域峰 浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科

目的:評(píng)價(jià)抗核抗體(ANA)、抗Sm抗體、抗dsDNA抗體、抗核小體抗體(AnuA)等相關(guān)自身抗體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的診斷價(jià)值。方法:采用間接免疫熒光法(IIF)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和免疫印跡法(LIA)測(cè)定1 409例SLE患者(SLE組)和1 058例其他結(jié)締組織病患者(非SLE組)血清中ANA、抗dsDNA抗體、抗Sm抗體、AnuA等相關(guān)自身抗體含量。結(jié)果:除抗CENPB抗體、抗Jo-1抗體和抗Scl-70抗體在兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)外，其余自身抗體在兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01);ANA陽(yáng)性率79.1%，遠(yuǎn)高于非SLE組的34.7%(P＜0.01);SLE組患者除ANA抗體、抗SSA抗體和抗nRNP/Sm抗體性別間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)外，其它自身抗體在性別間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);SLE患者以女性發(fā)病最多，占90.8%(1 280/1 409)，發(fā)病年齡以20～39歲最高，占49.3%，其次為40～59歲，占37.0%。在ANA抗體陰性時(shí)，抗SSA抗體的陽(yáng)性檢出率較高。結(jié)論:SLE患者血清中可出現(xiàn)大量的自身抗體，聯(lián)合檢測(cè)靈敏度高、結(jié)果可靠、方法簡(jiǎn)便，對(duì)SLE的鑒別診斷和治療有重要意義。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡 自身抗體 檢測(cè) 臨床意義

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種自身免疫性結(jié)締組織病，臨床表現(xiàn)復(fù)雜，其發(fā)病機(jī)制主要為免疫平衡紊亂，自身抗體形成與免疫復(fù)合物的沉積導(dǎo)致組織損傷，近年研究表明，抗dsDNA抗體、抗Sm抗體和AnuA是診斷SLE較特異的自身抗體［1］，被認(rèn)為是SLE的標(biāo)記性抗體，但其敏感性各家報(bào)道不一。筆者應(yīng)用IIF、ELISA和LIA檢測(cè)1 409例SLE患者血清中的13種自身抗體，探討特異性自身抗體聯(lián)合檢測(cè)在SLE診斷中的意義及臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2006年1月—2010年9月在浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院確診的SLE患者1 409例，其中男129例，年齡11～77歲，平均(40.2± 15.3)歲;女1 280例，年齡8～82歲，平均(37.3± 13.2)歲。疾病對(duì)照組為結(jié)締組織病(CTD)患者1 058例，其中類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎552例，原發(fā)性干燥綜合征155例，肌炎/皮肌炎138例，自身免疫性肝炎28例，ASD 8例，原發(fā)性膽汁性肝硬化17例，強(qiáng)直性脊柱炎52例，其它疾病108例。1 058例中，男248例，年齡6～87歲，平均(52.2±18.1)歲;女810例，年齡3～85歲，平均(50.4±14.2)歲。診斷均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)［2］。另選60名體檢正常者血清作為健康對(duì)照組，男8名，女52名，年齡23～48歲，平均(38.3±10.1)歲。

1.2 標(biāo)本采集 抽取待檢者清晨空腹靜脈血3mL，離心分離血清，不能及時(shí)檢測(cè)的標(biāo)本吸取血清，分裝保存-20℃冰箱，分批檢測(cè)。

1.3 ANA檢測(cè) 用德國(guó)歐蒙公司提供的ANA(馬賽克)IIF試劑盒，在第一次溫育時(shí)，固定在載片反應(yīng)區(qū)上的生物薄片中的HEp-2細(xì)胞和靈長(zhǎng)類肝臟冰凍組織切片與稀釋后的血清反應(yīng)。如果標(biāo)本陽(yáng)性，IgG(也包括IgA和IgM)類特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合。在第二次溫育時(shí)，結(jié)合的抗體與熒光素標(biāo)記的抗人IgG反應(yīng)，然后用熒光顯微鏡觀察特異性的熒光模型，滴度≥1∶80判斷為陽(yáng)性。

1.4 ANA譜檢測(cè) 采用德國(guó)歐蒙公司提供的LIA，檢測(cè)項(xiàng)目含以下11種特異性抗體:抗nRNP/Sm、Sm、SS -A、SS-B、抗Scl-70、抗Jo-1、dsDNA、著絲點(diǎn)蛋白B抗體(CENP B)、AnuA、抗組蛋白抗體(AHA)、線粒體-M2抗體(AMA-M2)。該試劑盒實(shí)驗(yàn)?zāi)l上平行包被有經(jīng)親和層析純化的抗原。在第一次溫育時(shí)，已稀釋的待測(cè)標(biāo)本與實(shí)驗(yàn)?zāi)l反應(yīng)。如果是陽(yáng)性標(biāo)本，特異性的IgG(也包括IgA和IgM)抗體與相應(yīng)的抗原位點(diǎn)結(jié)合。清洗后再加入酶標(biāo)抗人IgG(酶結(jié)合物)進(jìn)行二次溫育，清洗后加入底物液，產(chǎn)生可觀察的顏色變化。結(jié)果判斷:有質(zhì)控線表明結(jié)果有效，相對(duì)應(yīng)的抗原出陽(yáng)性線表明相應(yīng)的抗體陽(yáng)性。

1.5 其他檢測(cè) 采用ELISA檢測(cè)抗心磷脂抗體(ACA)，以120、12、2RKU(相對(duì)單位)/L的3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)血清作曲線，對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析，并以12RKU/L的吸光度(A)值為定性分析臨界值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。組間自身抗體陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

健康對(duì)照組60名體檢正常者血清，均未檢出自身抗體。SLE組與非SLE組比較，除抗CENP B抗體、抗Jo-1抗體和抗Scl-70抗體在兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)外，其余10種自身抗體在兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩組血清自身抗體陽(yáng)性檢出率見表1。

表1 兩組血清自身抗體陽(yáng)性檢出率情況 例(%)

SLE患者ANA抗體、抗SSA抗體和抗nRNP/Sm抗體性別間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，抗dsDNA、Sm、SSB、ACA、AunA、AHA和AMA-M2抗體，在性別間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1 280 例女性SLE患者以20～39歲比例最高，占49.3%，其次為40～59歲，占37.0%，＜20歲和≥60歲分別占8.2%和5.6%，見表2。

表2 1 280例女性SLE患者血清標(biāo)本中自身抗體陽(yáng)性檢出率 例(%)

ANA陽(yáng)性標(biāo)本中除抗SSA抗體和抗SSB抗體 外，抗 dsDNA、nRNP/Sm、Sm、ACA、AunA、AHA和 AMA-M2抗體，均隨ANA滴度的升高而陽(yáng)性檢出率逐步提高。在ANA抗體陰性時(shí)，抗SSA抗體的陽(yáng)性檢出率較高，見表3。

表3 1 409例SLE患者不同ANA滴度血清標(biāo)本中自身抗體陽(yáng)性檢出率 例(%)

3 討論

SLE是一種系統(tǒng)性的自身免疫性疾病，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，早期表現(xiàn)常不典型，其發(fā)病機(jī)理與自身免疫有關(guān)，血清學(xué)的特點(diǎn)是具有多種自身抗體，因此，血清中自身抗體的檢測(cè)對(duì)SLE診斷有非常重要的意義。

本研究中，SLE患者ANA陽(yáng)性率79.1%，遠(yuǎn)高于非SLE患者組的34.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，低于周仁芳等報(bào)道的94.0%［3］，高于任淑子等報(bào)道的76.9%［4］。ANA屬非特異性自身抗體，敏感度高，但特異性差，可見于包括SLE在內(nèi)的多種結(jié)締組織病，被作為結(jié)締組織病的篩選試驗(yàn)。

抗Sm抗體是SLE的血清標(biāo)志性自身抗體，但敏感性低，其敏感性10.0%～40.0%，特異性97.0%～100.0%［5］。本研究顯示，SLE組抗Sm抗體的陽(yáng)性檢出率25.5%，遠(yuǎn)高于非SLE組的2.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。抗Sm抗體對(duì)早期、不典型的SLE或經(jīng)過治療緩解后SLE回顧性診斷有很大幫助。

有研究表明［5-7］，抗dsDNA抗體和抗AnuA抗體是SLE的血清特異性自身抗體，其敏感性19.0%～82.0%，特異性 90.0%～95.0%，是目前公認(rèn)的與SLE病情活動(dòng)有關(guān)的抗體。本研究顯示，SLE組抗dsDNA抗體和抗AnuA抗體的檢出率分別為26.8%和22.4%，高于非SLE組的1.4%和3.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。Villalta等［8］認(rèn)為，AnuA的敏感性高，特異性強(qiáng)，可能成為SLE診斷新的標(biāo)記性抗體。

抗SSA抗體和抗SSB抗體為SLE的血清相關(guān)性自身抗體，此類自身抗體與某種自身免疫性疾病密切相關(guān)，但在其他疾病也可出現(xiàn)，且有一定的敏感性，如原發(fā)性干燥綜合征(PSS)中的抗SSA抗體和抗SSB抗體，陽(yáng)性率分別為70.0%和40.0%，對(duì)PSS診斷意義較大，但也常出現(xiàn)于SLE中，陽(yáng)性率分別為50.0%和30.0%［9］。本組SLE患者中，抗SSA抗體和抗SSB抗體的檢出率分別為68.1%和30.4%，高檢出率可能與部分SLE患者出現(xiàn)繼發(fā)性干燥綜合征有關(guān)。本研究還顯示，在ANA陽(yáng)性標(biāo)本中，抗SSA抗體和抗SSB抗體的陽(yáng)性率是不隨ANA滴度的升高而升高，有別于其它自身抗體，值得臨床關(guān)注。

綜上所述，對(duì)自身抗體的聯(lián)合檢測(cè)可提高SLE診斷的敏感性，更有利于全面分析病情所處的階段，避免單項(xiàng)檢測(cè)出現(xiàn)的漏診情況，提高SLE的檢出率，對(duì)SLE病情的診斷、分型、治療、追蹤和預(yù)后判定有重要的臨床意義。

［1］Tikly M，Gould T，Wadee AA，et al.Clinical and serological correlates of antinucleosome antibodies in south africans with systemic lupus erythematosus［J］.Clin Rheumatol，2007，26(12):2121-2125.

［2］Hochberg MC.Updating the American College of Rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum，1997，40(9):1725.

［3］周仁芳，胡朝軍，張蜀瀾，等.臨床標(biāo)本抗核抗體102651例檢測(cè)結(jié)果回顧性分析［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32(12):1339-1343.

［4］任淑子，金春花，姜春善，等.延邊地區(qū)SLE患者ANA及ENA多肽抗體譜析［J］.中華實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2006，10(3): 284-285.

［5］劉燕鷹，劉霞，栗占國(guó)，等.自身抗體測(cè)定在風(fēng)濕病診斷中的意義及研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2008，20(10): 751-753.

［6］Dilzgtin N，Sahin M，Genc Y，et a1.Antinuclesome antibodies and systemic lupus erythematosus［J］.Ann N Y Acad Sci，2007，1109(8):421-428.

［7］Vila LM，Molina MJ，Mayor AM，et al.Clinical and prognostic value of autoantibodies in puerto ricans with systemic lupus erythematosus［J］.Lupus，2006，15(12):892-898.

［8］Villalta D，Tozzoli R，Bizzaro N，et a1.The relevance of autoantigen source and cutoff definition in antichromatin(nucleosome)antibody immunoassays［J］.Ann N Y Acad Sei，2005，1050(1):176-184.

［9］李永哲.自身抗體檢測(cè)技術(shù)臨床推廣應(yīng)用和質(zhì)量保證工作中應(yīng)重視的問題［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006(9)，29:769-772.

Detection and Diagnositc Value of Autoantibodies in Paitents with Systemic Lupus Erythematosus

SHI Xinping，CHEN Yiming，LOU Yufeng.Tongde Hospital of Zhejiang Province，Hangzhou(310012)，China

Objective:To evaluate the diagnostic value of autoantibodies in patients with systemic lupus erythematosus(SLE).MethodsThe serum content of autoantibodies in 1 409 SLE patients and 1 058 patients with other connective tissue disease(non-SLE group)were detected by using IIF，ELISA，and LIA methods.Comparison was carried out between the 2 groups.ResultsThe serum content of autoantibodies was significantly different between the 2 groups(P＜0.05 or P＜0.01)except for anti-CENP B antibody，anti-Jo-1 antibody，and anti-Scl-70 antibody(P＞0.05).The positive rate of ANA was markedly higher than that in the non-SLE group(79.1%vs 34.7，P＜0.01).In SLE patients，the content of autoantibodies did not differ between male and female patients except for ANA，anti-SSA antibody，and antinRNP/Sm antibody(P＜0.05);90.8%(1 280/1 409)of the SLE patients were female;49.3%of the patients aged from 20 to 39 years，followed by 37.0%of aging from 40 to 59 years.When ANA was negative，the positive rate of anti-SSA antibody was relatively high.ConclusionAutoantibodies can be detected in the sera of SLE patients.To detect the antibodies is easy and reliable to help diagnose SLE.

systemic lupus erythematosus antuantibody detection clinical value

浙江省中醫(yī)藥科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2008CB033)

陳益明，E-mail:cxy40344@163.com

2010-11-22