肺鱗癌中Bcl-2、Bax蛋白的表達與細胞凋亡的臨床意義

于振剛 王炳轍 孫開宇

Bcl-2基因，即B細胞淋巴瘤/白血病基因-2（B-cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）是一種重要的凋亡調控基因，近年倍受關注，其在惡性腫瘤發生、發展方面起重要的作用。Bax基因，即B細胞淋巴瘤/白血病基因-2相關蛋白X（Bcl-2 associated X protein，Bax）是Bcl-2家族中的促凋亡成員，Bcl-2和Bax通過阻斷凋亡信號通路中的最后共同通道而抑制細胞凋亡[1]。本實驗通過檢測肺鱗癌中Bcl-2、Bax蛋白的表達及細胞凋亡，進一步明確Bcl-2在鱗癌的發生、發展及預后方面的價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機選擇我院50例鱗癌手術切除標本，術前未行放、化療為試驗組；選30例癌旁5cm的鏡下正常組織為對照組。試驗組中，男性37例，女性13例，年齡為44～79歲，平均年齡為58.5歲；吸煙者43例，非吸煙者7例；按解剖類型分：中央型41例，周圍型9例；按腫瘤的最大直徑分：≤3cm者18例，＞3cm者32例；按組織分化程度分：高分化16例，中分化21例，低分化13例；按TNM分期[2]：Ⅰ期13例，Ⅱ期21例，Ⅲa期16例；按淋巴結是否轉移分：無轉移組21例，轉移組29例。對照組中，男性23例，女性7例，年齡42～77歲，平均年齡為56.2歲。

1.2 Bcl-2、Bax的免疫組化PV-9000法檢測

陽性染色以質膜和胞漿中出現明顯棕黃色或深棕黃色顆粒為準。參照文獻[3]，據陽性細胞所占比例和陽性細胞的染色程度，對陽性細胞進行積分。試劑盒均購自北京中山公司，PBS代替I抗作為陰性對照。

1.3 細胞凋亡檢測

陽性細胞胞核或胞核與胞漿同時為棕黃色，散在分布[4]。在400高倍鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數200個癌細胞，依據凋亡指數（Apoptosis Index，AI）=（凋亡細胞數/總細胞數）×100％，計算出每張切片的AI。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 試驗組中Bcl-2、Bax的表達均高于正常組織（P＜0.05），見表1。

2.2 Bcl-2、Bax在性別組、解剖類型組、不同直徑組差異無統計學意義（P＞0.05），Bcl-2、Bax在不同分化程度、TNM分期、淋巴結轉移組差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

2.3 試驗組細胞凋亡指數高于正常組織（P＜0.05），見表3。

表1 Bcl-2、Bax在鱗癌組及對照組中的表達

表2 Bcl-2、Bax與鱗癌臨床病理因素的關系

表3 試驗組與對照組細胞凋亡的比較

表4 鱗癌細胞凋亡與臨床病理因素的關系

2.4 試驗組中AI在性別組、解剖類型組差異無統計學意義（P＞0.05），在不同直徑組、分化程度、TNM分期及淋巴結轉移組差異有統計學意義（P＜0.05），見表4。

2.5 鱗癌中Bcl-2積分與AI成負相關（r=-0.73,P＜0.05）（見圖1）。

2.6 鱗癌中Bax積分與AI成正相關（r=0.78,P＜0.05）（見圖2）。

3 討論

3.1 Bcl-2基因是最早在造血系統中發現的一個原癌基因，定位于人染色體18q21.3，正常組織中低表達，其發生染色體易位時細胞凋亡受抑，參與多種腫瘤的發生[4]。Bcl-2基因及其表達Bcl-2蛋白可以抑制多種組織細胞凋亡，延長細胞壽命。蛋白二聚體化是該家族成員之間功能實現或功能調節的重要形式。Bax與Bcl-2形成異源二聚體，抑制Bcl-2，發揮促細胞凋亡作用，Bax本身具有促細胞凋亡作用[5]。

3.2 臨床上在小細胞和非小細胞肺癌的活檢標本中均已檢測到Bcl-2、Bax蛋白的表達。在鱗癌中Bcl-2、Bax蛋白的表達水平低于小細胞肺癌[3-4]。

3.3 Bcl-2、Bax蛋白的表達與細胞凋亡的關系

Bcl-2、Bax蛋白在腫瘤中的表達高于正常組織，與患者性別、年齡及腫瘤原發部位無關。不同文獻[6-9]分歧主要集中在Bcl-2、Bax蛋白的表達與肺癌TNM分期及淋巴結轉移上。本試驗發現鱗癌細胞Bcl-2、Bax蛋白的表達均高于正常組織，且表達于胞漿；隨著分化程度的降低、TNM分期的升高及腫瘤組織發生淋巴結轉移，Bcl-2蛋白的表達逐漸降低，而Bax蛋白表達逐漸增高。有學者[10]發現非小細胞肺癌中的非鱗癌促凋亡Bax蛋白表達越低提示較差的預后。

有學者[7]發現，鱗癌的細胞凋亡與腫瘤分化程度有關，分化越低，細胞凋亡越高，隨著肺癌TNM分期的升高及淋巴結的轉移而增高。本試驗應用TUNEL法檢測細胞凋亡，發現鱗癌的凋亡水平高于正常組織。隨著腫瘤體積的減小、分化程度的降低、TNM分期的增加及發生淋巴結轉移，細胞凋亡逐漸升高。本試驗還發現，鱗癌中Bcl-2蛋白的表達與細胞凋亡呈負相關，而Bax蛋白的表達與細胞凋亡呈正相關，提示在肺鱗癌初期Bcl-2作為凋亡調控基因，抑制了細胞凋亡，Bax與進展中癌細胞凋亡水平的升高有關。

本試驗結果表明，肺鱗癌初期細胞凋亡受抑可能參與了鱗癌的發生、發展，結果與程哲等[8-9]結果一致，但與王允等[6]結果相反，分析可能的原因如下：一方面，機體通過細胞凋亡清除癌變的細胞，隨著腫瘤的發生、發展，細胞凋亡水平逐漸升高，較多的癌變細胞被清除，是機體免疫系統對腫瘤發生的必然反應。另一方面，腫瘤組織的高速生長、增殖與轉移是腫瘤早期細胞凋亡受抑，從而保持惡性腫瘤無限生長、侵襲及轉移的特征。通過對Bcl-2、Bax基因及其表達蛋白與肺鱗癌關系的研究，在臨床上可以用選擇性誘導癌細胞凋亡的方法，增強肺鱗癌對放化療及其它治療的敏感性，以更有效治療肺鱗癌。

[1]Berrieman HK,Smith L,O'Kane SL,et al.The expression of Bcl-2 family proteins differs between nonsmall cell lung carcinoma subtypes[J]. Cancer,2005,103（7）：1415-1419.

[2]萬德森.臨床腫瘤學[M].2版.北京：科學出版社,2005：284-285．

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[6]王允,周清華,黃頤,等.人肺癌中細胞增殖、凋亡水平與預后的關系[J].腫瘤防治研究,2001,28（5）：339-341．

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[8]程哲,王靜,張慶亮,等.Bax,Bcl-2在非小細胞肺癌中的表達相關性研究[J].中原醫刊,2006,13（9）：6-7．

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