清喉咽合劑中連翹苷的含量測定

李會勤

清喉咽合劑為《中國藥典》2005年版一部收載品種,主要由地黃，麥冬，玄參，連翹，黃芩等組成，其中連翹為君藥，其主要成份為連翹苷，經多年臨床應用證明,該方具有養陰清肺，利咽解毒。用于陰虛燥熱、火毒內蘊所致的咽部腫痛、咽干少津、咽部白腐有苔膜、喉核腫大；局限性的咽白喉、輕度中毒型白喉、急性扁桃體炎、咽峽炎等[1]。清喉咽合劑在現行藥典的質量標準中采用高效液相色譜法對黃岑苷的含量測定，為了提高該產品的質量，保證臨床用藥的安全有效，本文采用高效液相色譜法對清喉咽合劑中連翹苷的含量進行了測定，結果比較滿意，現報告如下：

1 儀器與試劑

島津LC-10ATvp高效液相色譜儀,SPD-10Avp紫外檢測器（日本島津）；萬分之一分析天平（FA2004A）；連翹苷對照品（中國藥品生物制品檢定所,批號12311-0507）；清喉咽合劑（批號：20090812；20091203；20090904，北京龍泰基藥業有限責任公司），甲醇、乙腈均為色譜純,水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

表1 回收率實驗結果（n=6）

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：ODS C18柱（250mm×4.6mm 5μm），流動相：乙睛：水（21：78）；檢測波長為230nm，流速1.0ml/min，柱溫25℃，進樣量：25μL，理論塔板數按連翹苷峰計算不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 樣品的制備工藝 五味藥品粉碎成粗粉，用57％乙醇浸漬24小時后，過濾得濾液6000ml，減壓回收乙醇并濃縮至約1400ml，加水800mL，煮沸30分鐘，靜置48小時，濾過，濾渣用少量水洗滌，洗液并入濾液中，減壓濃縮至約1000ml，加苯甲酸鈉3g，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液轉移至1000mL錐形瓶中，水補充至相應的刻度，搖勻。

2.2.2 供試品溶液的配置 精密取同一批清喉咽合劑（批號：20090812）100mL，離心過濾，轉移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振搖萃取3次，合并乙酸乙酯液，濃縮，過中性氧化鋁柱，75％乙醇洗脫，除去雜質，洗脫液濃縮，冷凍干燥，殘渣甲醇溶解，濾過，過0.45μm微孔濾膜,并轉移至10mL容量瓶中，甲醇補充至相應刻度，即得，搖勻，供試品溶液即得。

2.2.3 對照品溶液的配置 精密稱取連翹苷對照品1.0mg，加入甲醇適量，超聲波催溶，轉移至10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得對照品貯備液，備用。

2.2.4 陰性對照溶液 按照清喉咽合劑的制備工藝制備不含連翹的樣品,按樣品的制備方法制成陰性對照溶液。

2.3 標準曲線的繪制 精密吸取連翹苷對照品溶液1mL、2mL、4mL、6mL、10mL于10mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度,搖勻，按照上述方法進樣20μL，按上述色譜條件進行含量測定,以峰面積（S）對濃度（C）作二元一次線性回歸,得回歸方程S=87956X+36571（r=0.9998）。結果表明連翹苷在0.01mg/ml～0.1mg/ml范圍內呈現良好的線性關系。

2.4 專屬性考察 取供試品、對照品、及陰性對照溶液各25μL按上述色譜條件進行測定,連翹苷和供試品中其他組分色譜峰可達到基線分離,陰性對照溶液對連翹苷的測定無干擾,本法專屬性較好。

2.5 穩定性試驗 精密取同一供試品溶液，分別在2、5、10、20、24h進樣250μL,按照上述色譜條件測定連翹苷的含量，計算得平均RSD值為1.07％，表明連翹苷在24h內基本穩定。

2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液25μl連續注入5次,按照色譜條件測定連翹苷的含量,計算得平均RSD值為1.21％，精密度良好。

2.7 重現性試驗 精密取同一批清喉咽合劑,按供試品溶液制備方法平行制備5份供試品溶液,按照色譜條件測定連翹苷含量,計算連翹苷含量為0.1917mg/mL,平均RSD值1.21％，表明重現性良好。

2.8 加樣回收率試驗 取已測含量的樣品（批號：20090812）5mL于20mL量瓶中，加入連翹苷適量，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液,甲醇補至相應的刻度，照上述色譜條件進行測定,計算回收率，結果見表1。

2.9 樣品測定 取不同批號（批號：20090812；20091203；20090904）的樣品，按照供試品溶液制備方法制備供試液,按外標法測定含量,每個樣品平行測定3次，計算出樣品中連翹苷的含量，結果所測定含量分別為（0.1919、0.1935、0.1923）mg/mL。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 應用二極管陣列檢測器在190～400nm對連翹苷對照品溶液進行掃描,在波長230nm有最大吸收,且樣品中其它成分在此波長處對測定無干擾，故測定波長選定為230nm。

3.2 流動相的選擇 在該實驗中,曾選用不同的流動相，包括乙腈-水（28∶72）作為流動相[2],乙睛-水（23∶77）[3],通過調節不同比例的流動相實驗,結果表明,以乙腈-水（21∶78）為流動相分離效果明顯,沒有拖尾而且保留時間適宜。

本文建立的清喉咽合劑中連翹苷的含量測定方法。簡便可靠、精密度高、快速、分離度好，可用于對清喉咽合劑的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（1部）[M].北京：化學工業出版社,2005：622.

[2]宋世才,周亞球.高效液相色譜法測定抗病毒膠囊中連翹苷的含量[J].時珍國醫國藥,2007；（18）：94-95.

[3]余積飛,馬麗芬,何琴.維C銀翹片中連翹苷的質量控制方法研究[J].大理學院,2008,7（10）：5-7.