氯胺酮對(duì)小鼠肺泡上皮液體清除作用的研究

崔 湧，聶宏光，田阿勇，聶 狀

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)1.附屬第一醫(yī)院麻醉科、2.藥學(xué)院藥理學(xué)教研室，遼寧沈陽(yáng) 110001)

肺泡液體清除率(alveolar fluid clearance，AFC)對(duì)肺臟生理和病理狀態(tài)下的液體平衡，如肺水腫、急性肺損傷和成人呼吸窘迫癥，均起重要的調(diào)控作用。肺泡上皮細(xì)胞頂側(cè)膜的上皮鈉通道(epithelial sodium channel，ENaC)是影響AFC的主要決定因素［1］。氯胺酮是一種常用的靜脈麻醉藥，能抑制神經(jīng)元和骨骼肌的電壓門(mén)控性Na+通道［2］，其四聚體結(jié)構(gòu)與ENaC相似。因此我們推測(cè)氯胺酮可能通過(guò)抑制ENaC而降低AFC。目前的研究已經(jīng)證實(shí)β-受體激動(dòng)劑能改善肺泡Na+和液體的重吸收，增加AFC［3］。本研究旨在探討氯胺酮與AFC之間的關(guān)系，明確氯胺酮是否對(duì)肺泡上皮Na+轉(zhuǎn)運(yùn)有抑制作用，以及使用β-受體激動(dòng)劑后能否拮抗氯胺酮對(duì)AFC的抑制作用。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物模型及分組健康♂昆明小鼠60只，麻醉后切開(kāi)氣管行氣管插管，翻轉(zhuǎn)小鼠置于左側(cè)臥位。穩(wěn)定10 min后，經(jīng)氣管導(dǎo)管隨機(jī)注入0.3 ml含不同實(shí)驗(yàn)藥物生理鹽水配制的等滲5%小牛血清白蛋白(bovine serum albumine，BSA)液，按所含藥物不同分為6組。對(duì)照組(14只)不含其它藥物;阿米洛利組(14只)含1 mmol·L-1阿米洛利;氯胺酮組(6只)含0.1 mmol·L-1氯胺酮;氯胺酮+阿米洛利組(6只)含0.1 mmol·L-1氯胺酮和1 mmol·L-1阿米洛利;特布他林組(10只)含0.1 mmol·L-1特布他林;氯胺酮+特布他林組(10只)含0.1 mmol·L-1氯胺酮和 0.1 mmol·L-1特布他林。通過(guò)容量控制的小動(dòng)物呼吸機(jī)給予麻醉小鼠100%O2通氣30 min，然后用1 ml注射器經(jīng)氣管插管緩慢負(fù)壓吸取肺泡內(nèi)液體。

1.2測(cè)定AFC通過(guò)Anthos 2010全自動(dòng)定量酶標(biāo)儀測(cè)定肺泡液體內(nèi)小牛血清白蛋白的濃度。AFC計(jì)算公式如下:AFC= ［(Vi-Vf)/Vi］×100，其中 Vf=Vi× Pi/Pf，式中 Vi和Vf分別代表起始注入肺泡內(nèi)(i)和灌注30 min后吸出的肺泡液(f)液體體積，P是白蛋白濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以±s表示，數(shù)據(jù)比較采用單因素ANOVA和Bonferroni檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

小牛血清白蛋白對(duì)照組AFC為34.43% ±9.31%，使用特異性上皮鈉通道阻斷劑阿米洛利后AFC降低至23.53%±6.90%，兩者之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。氣管內(nèi)注入0.1 mmol·L-1氯胺酮后，AFC降低至25.25% ±7.31%，較對(duì)照組明顯降低(P＜0.05)。氯胺酮+阿米洛利組AFC為22.42% ±7.05%，與對(duì)照組相比差異有顯著性(P＜0.05)，但與兩種藥物單獨(dú)使用時(shí)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.01)。

β2腎上腺素受體激動(dòng)劑特布他林增加了小鼠AFC大約25%(43.19%±5.75%，與對(duì)照組相比差異有顯著性，P＜0.01)，與以往報(bào)道結(jié)果相似。特布他林與氯胺酮合用后，AFC為36.24% ±6.74%，與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，與特布他林組相比差異有顯著性(P＜0.05)，與氯胺酮組相比差異有顯著性(P＜0.01)，表明特布他林能完全拮抗氯胺酮對(duì)AFC的抑制作用。

3 討論

目前普遍認(rèn)為AFC是通過(guò)ENaC和非阿米洛利敏感性鈉通道轉(zhuǎn)運(yùn)途徑參與。Na+通過(guò)肺泡上皮細(xì)胞頂側(cè)膜的ENaC進(jìn)入，再通過(guò)基底膜排出(主要由Na+，K+-ATP酶參與)，在細(xì)胞內(nèi)外形成滲透壓梯度，依靠肺泡上皮緊密的屏障結(jié)構(gòu)，清除肺泡內(nèi)多余積液。在此過(guò)程中，Na+通過(guò)頂膜側(cè)通道的的進(jìn)入是限速步驟。本實(shí)驗(yàn)中氯胺酮對(duì)AFC的抑制率約為30%，阿米洛利組結(jié)果與此相似，與既往報(bào)道相符［4］，由此我們推測(cè)這兩種物質(zhì)可能競(jìng)爭(zhēng)性抑制上皮鈉通道的相同位點(diǎn)。同時(shí)應(yīng)用氯胺酮和阿米洛利后結(jié)果顯示其抑制效應(yīng)與兩種藥物單獨(dú)使用時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明氯胺酮可能通過(guò)抑制肺泡上皮Na+轉(zhuǎn)運(yùn)并且降低AFC，進(jìn)而引起肺泡腔液體的積聚，其機(jī)制可能與抑制ENaC有關(guān)。

β2受體激動(dòng)劑特布他林能增加肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞基底膜側(cè)的Na+，K+-ATP酶活性，增加細(xì)胞內(nèi)鈉的排出，從而導(dǎo)致頂膜端鈉攝取增加。特布他林也可能通過(guò)ENaC增加Na+的轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)升高AFC［5］。我們的實(shí)驗(yàn)證明氣管內(nèi)注入特布他林可明顯增加在體小鼠AFC，同時(shí)能拮抗氯胺酮對(duì)AFC的抑制作用。表明氯胺酮誘發(fā)的肺水腫可能與其抑制AFC有關(guān)，應(yīng)用β2受體激動(dòng)劑特布他林噴霧吸入對(duì)氯胺酮誘發(fā)的肺水腫可能有治療作用。

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