痣特佳膠囊中黃芩苷的含量測(cè)定

謝 梅，余敏靈

(1.中國(guó)人民解放軍第452醫(yī)院，四川 成都 610021; 2.四川省樂(lè)山市藥品檢驗(yàn)所，四川 樂(lè)山 614000)

痣特佳膠囊由槐角、地榆炭、黃芩、當(dāng)歸、桔殼、防風(fēng)、鞣質(zhì)、阿膠加工而成，主要功能是清熱消腫、涼血止血、收斂，用于一、二期內(nèi)痔，血栓性外痔，肛竇炎、直腸炎，對(duì)其他痔瘡有緩解作用[1]。方中黃芩功能清熱燥濕、瀉火解毒、涼血活血、安胎，其活性成分為黃芩苷[2]。藥品標(biāo)準(zhǔn)中和現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道中尚無(wú)對(duì)該制劑中黃芩苷的含量測(cè)定方法。筆者采用反相高效液相色譜法對(duì)痣特佳膠囊中黃芩苷含量進(jìn)行了測(cè)定[3]，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀(美國(guó));2487型紫外檢測(cè)器;Empower色譜工作站;Varian Cary100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(美國(guó))。黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110715－200815，含量為95.2%);痣特佳膠囊(吉林吉春制藥有限公司，批號(hào)分別為091005，091206，091228);所用藥材由樂(lè)山康發(fā)藥業(yè)股份有限公司提供;乙腈(上海陸都化學(xué)試劑廠)為色譜純;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 －水－磷酸(47∶53∶0.2);流速:1.00 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。在此色譜條件下，高效液相色譜圖見(jiàn)圖1，黃芩苷色譜峰與其他色譜峰分離度良好(＞ 1.5)，理論板數(shù)為6 522。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

稱取黃芩苷對(duì)照品0.1205g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加70%的乙醇適量使溶解后，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。取痣特佳膠囊(批號(hào)為091005)10粒內(nèi)容物，研細(xì)，稱取約1粒內(nèi)容物，精密稱定為0.314 5 g，精密加入70%乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取處方量藥材(除黃芩外)按規(guī)定生產(chǎn)工藝制備成陰性對(duì)照品[1]，取陰性對(duì)照品內(nèi)容物研細(xì)，精密稱定0.312 8 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品貯備液 1，2，3，4，5 mL，分別置5個(gè)50 mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液照上述色譜條件測(cè)定，以黃芩苷質(zhì)量濃度(C)與峰面積積分值(A)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=48 323.61C－32.18，r=0.998 5(n=5)。結(jié)果表明，黃芩苷進(jìn)樣量在0.229 4～1.147 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密量取對(duì)照品貯備液 0.5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次。測(cè)得峰面積平均值為2 013 289，RSD為0.3%(n=5)。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取樣品，依法制備供試品溶液，照上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果平均峰面積為2 771 359，RSD為0.1%。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別在0，2，6，12 h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)得3組樣品在各時(shí)間點(diǎn)色譜峰面積變化的 RSD分別為0.5%，0.9%，1.1%，表明供試品溶液在室溫條件下12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取樣品(批號(hào)為091005，每1 g內(nèi)容物含黃芩苷 12.55 mg)10粒內(nèi)容物，研細(xì)，稱取 6份，每份約 0.1 g，精密稱定，研細(xì)，轉(zhuǎn)移至6個(gè)具塞錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品貯備液1，1，2，2，3，3 mL，按供試品溶液制備方法制備待測(cè)溶液，照上述色譜條件測(cè)定，按2.3項(xiàng)下回歸方程計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品內(nèi)容物適量(約0.1 g)，研細(xì)，精密稱定，依法制備供試品溶液，照上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果批號(hào)分別為091005，091206，091228 的樣品中黃芩苷含量分別為 12.55，12.73，13.36 mg/g。

3 討論

取質(zhì)量濃度為5 μg/mL的對(duì)照品溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在280 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故以280 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。所建立的方法準(zhǔn)確度高，被測(cè)溶液穩(wěn)定，可作為痣特佳膠囊中黃芩苷的含量測(cè)定方法。

[1]YBZ00892009，國(guó)家食品藥品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].

[2]吳冬莉，李 青，邱東平.淺談中藥黃芩的藥理作用[J].中華中西醫(yī)學(xué)雜志，2010(5):47－49.

[3]張 捷，張艷萍，王 歡，等.高效液相色譜法測(cè)定固經(jīng)丸中黃芩苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2010，19(10):38－39.