高效液相色譜法測(cè)定鼻竇炎口服液中梔子苷含量

(湖南省張家界市藥品檢驗(yàn)所，湖南 張家界 427000)

鼻竇炎口服液由辛夷、薄荷、白芷、黃芩、蒼耳子、梔子、川芎、茯苓、龍膽草等14味藥組方，具有疏散風(fēng)熱、清熱利濕、宣通鼻竅的功效，主要用于風(fēng)熱犯肺、濕熱內(nèi)蘊(yùn)所致的鼻塞不通、流黃稠涕，急慢性鼻炎、鼻竇炎見上述證候者[1]，臨床應(yīng)用較多，療效較好。2010年版《中國(guó)藥典(一部)》中，建立了該藥的黃芩苷含量測(cè)定方法。為更好地控制藥品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)鼻竇炎口服液中梔子所含梔子苷進(jìn)行了含量測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC－20AT型高效液相色譜儀(日本島津)，包括島津PDAM20A型二極管陣列檢測(cè)器，SIL－20A型自動(dòng)進(jìn)樣器，CBM－20A型系統(tǒng)控制器，CTO－10ASVP型柱溫箱，LCsolution色譜工作站;AUW220D型電子分析天平(島津);KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山超聲儀器公司)。梔子苷對(duì)照品(批號(hào)為110749－200714，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所);鼻竇炎口服液(太極集團(tuán)重慶桐君閣藥廠有限公司，批號(hào)為 10010002，09100089，09030024，本地市售品);乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:島津 Shimpack VP－ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈－0.2% 磷酸(12 ∶88);檢測(cè)波長(zhǎng):238 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按梔子苷計(jì)應(yīng)不低于5 000。

2.2 溶液制備

精密吸取樣品1 mL，置50 mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱取在五氧化二磷干燥器中減壓干燥24 h后的梔子苷對(duì)照品11.78 mg，置 100 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含0.117 8 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另按處方組成[2]制成缺梔子的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜梔子苷峰相應(yīng)保留時(shí)間附近無干擾峰檢出，見圖1。

線性關(guān)系考察:精密吸取梔子苷對(duì)照品溶液(0.117 8 g/L)2，4，6，8，10，15 μL 進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定。以梔子苷進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)、測(cè)得的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=1 546 989.9 X+7 479.7，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明梔子苷進(jìn)樣量在0.235～1.767μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.58%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液10 μL，按上述色譜條件，分別在 0，2，4，8，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD 為1.06%(n=6)，表明供試品溶液至少在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)為10010002)6份，分別精密吸取1 mL，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果平均含量為 12.61 mg/支(10 mL)，RSD=0.76%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品 (質(zhì)量濃度為1.261 g/L)6 份，分別精密加入對(duì)照品溶液(0.117 8 g/L)10.0，20.0，30.0 mL，照供試品溶液制備方法制備待測(cè)液，依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 梔子苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)不同批號(hào)的樣品，依法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10 uL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定梔子苷的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為10010002，09100089，09030024 的樣品中梔子苷含量分別為 12.61，10.33，8.82 mg/支(10 mL)。

3 討論

關(guān)于以高效液相色譜法測(cè)定中藥復(fù)方制劑中梔子苷的含量，文獻(xiàn)報(bào)道的方法較多[3]。為使樣品中梔子苷峰與相鄰色譜峰分離完全，選用乙腈－水系統(tǒng)為流動(dòng)相，并加入少量的磷酸作為穩(wěn)定劑。經(jīng)多次試驗(yàn)，選擇乙腈－0.2%磷酸溶液(12∶88)為流動(dòng)相時(shí)，峰形好，保留時(shí)間適中，能使樣品中梔子苷峰與相鄰色譜峰達(dá)到基線分離，且陰性對(duì)照無干擾。利用二極管陣列檢測(cè)器，對(duì)梔子苷峰及供試品溶液色譜中與梔子苷相同保留時(shí)間峰分別進(jìn)行掃描，結(jié)果均在238 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，且經(jīng)峰純度檢測(cè)為單一純色譜峰，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm。

中藥復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中收載兩種以上主成分的含量測(cè)定方法，對(duì)于提高和控制中成藥的質(zhì)量具有極積的作用。筆者在鼻竇炎口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已有黃芩苷含量測(cè)定方法的基礎(chǔ)上，建立了梔子苷含量測(cè)定方法，結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性、穩(wěn)定性較好，可用于該產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:1 212.

[2]WS3－B－2637－97，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十三冊(cè))[S].

[3]余瀟苓，方翠芬，祝 明.高效液相色譜法測(cè)定珍寶丸中梔子苷含量 [J].中國(guó)藥業(yè)，2009，18(5):18.