高效液相色譜法測定舒筋活血分散片中4－甲氧基水楊醛含量

楊其軍 ，諸葛周，余允建，戴德雄，李金和

(1.浙江省諸暨市中醫院藥劑科，浙江 諸暨 311800;2.浙江維康藥業有限公司，浙江 麗水 323000)

舒筋活血片由紅花、香附、狗脊、香加皮等味藥組方，具有舒筋活絡、活血散瘀之功效，用于筋骨疼痛、肢體拘攣、腰背酸痛、跌打損傷。該藥作為一種治療跌打損傷的內服藥物，在臨床上有一定的應用范圍。原質量標準檢驗項目簡單[1]，無法有效控制其內在質量。筆者將原有素片改制成分散片，并參考文獻[2]，采用高效液相色譜法對舒筋活血分散片中香加皮的4－甲氧基水楊醛進行了含量測定，為該制劑的質量控制提供了快速、簡便、準確的測定方法。現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀;Sartorius BP211D型電子天平;USC－502型超聲波清洗器;TU－11901型紫外分光光度計。樣品(浙江維康藥業有限公司試制，僅供本試驗用，批號分別為20081201，20081202，20081203，20081204，20081205);4－甲氧基水楊醛對照品(批號為110790－200202，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Aichrom Reliasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－ 水－ 四氫呋喃(50 ∶50 ∶0.2);流速:1.0 mL/min;檢測波長:344 nm;柱溫:室溫;進樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

取4－甲氧基水楊醛對照品適量，用60%甲醇直接溶解制成每1 mL含0.02 mg的對照品溶液。取本品10片，精密稱定，研細，取細粉約2.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理40 min，取出，放冷，再稱定質量，用60%甲醇補足減失的質量，搖勻，靜置，取上清液，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，棄去初濾液，取續濾液作為供試品溶液。按處方工藝制備缺香加皮藥材的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗:分別取對照品溶液、陰性對照品溶液和供試品溶液，依法進樣，色譜圖見圖1。可見，色譜基線平穩，輔料、雜質對測定無干擾。

線性關系考察:精密稱取4－甲氧基水楊醛對照品適量，加甲醇制成每1 mL含4－甲氧基水楊醛0.035 8 mg的溶液，搖勻，分別精密吸取該溶液 2，4，6，8，10，14，18 μL，按擬訂的色譜條件進樣測定，以峰面積為縱坐標、進樣量(μg)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=4×106 X+37 312，r=0.999 2(n=7)。結果表明4－甲氧基水楊醛進樣量在0.071 6～0.644 4 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液，在擬訂的色譜條件下連續進樣測定。結果峰面積的 RSD為0.67%(n=6)，表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

重現性試驗:取同一批樣品，依法制備供試品溶液，在擬訂的色譜條件下測定峰面積，計算含量。結果含量的 RSD為1.85%(n=5)，表明方法的重現性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于配制后0，4，8，12，16 h時進樣測定峰面積。結果峰面積的 RSD為0.88%(n=5)，表明供試品溶液在16 h內穩定。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為20081201)適量，6 份，分別精密加入對照品溶液(0.026 4 g/L)8.0，10.0，12.0 mL，再分別加60%甲醇至25 mL，按擬訂的色譜條件測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 4－甲氧基水楊醛加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取5批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件測定，以外標法計算含量。結果批號為20081201，20081202，20081203，20081204，20081205的樣品中 4－甲氧基水楊醛含量分別為0.138，0.135，0.132，0.140，0.124 mg/片。

3 討論

取4－甲氧基水楊醛對照品，進行紫外掃描(190～400 nm)，結果在279 nm波長處有最大吸收，故選擇279 nm為檢測波長。曾用Aichrom Reliasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)與 Kromtek C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)為分析柱，二者均達到滿意的分離效果(主峰與相鄰峰分離度大于1.5，理論板數以4－甲氧基水楊醛峰計算均大于4 000)，綜合考慮，選用前者為試驗用色譜柱。

試驗還對樣品提取方法和提取溶劑進行了比較，結果以60%甲醇為提取溶劑時，4－甲氧基水楊醛的含量較高;超聲處理與加熱回流相比，結果非常相近，考慮到前者更簡便、快捷，選擇超聲處理樣品。同時，對超聲并對提取時間(20，30，40，50 min)進行了考察，結果超聲處理40 min，4－甲氧基水楊醛含量不再增加，故選擇提取時間為40 min。

[1]WS3－B－2624－97，中華人民共和國衛生部藥品標準·中藥成方制劑[S].

[2]黃 萍，劉 杰.舒筋活血片質量標準研究[J].基層中藥雜志，2000，14(1):16－17.