高效液相色譜法測定小兒吐瀉寧中橙皮苷含量

(湖北省宜昌市食品藥品監(jiān)督檢驗所，湖北 宜昌 443005)

小兒吐瀉寧是由廣藿香、姜半夏、陳皮、白術(shù)(炒)、茯苓、厚樸(姜制)、甘草7味藥組成的中藥復(fù)方制劑，具有理氣和中、健脾化濕的功效，用于小兒脾胃不和引起的吐瀉、腹脹、不思飲食等。本品原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]無陳皮檢驗項目，國內(nèi)外文獻也未見報道。為了進一步控制藥品質(zhì)量，確保制劑療效，筆者采用高效液相色譜法對小兒吐瀉寧主要成分陳皮中橙皮苷含量進行了測定，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀;Metter－AE240型電子分析天平。橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為110721－200512);小兒吐瀉寧(沈陽綠洲制藥有限責(zé)任公司，批號為20081101，20091101;三精集團中藥三廠，批號為090322);甲醇為色譜純，水為去離子雙蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－冰醋酸 －水(35∶4∶61);流速:1.0 mL/min;檢測波長:283 nm;柱溫:25℃;進樣量:5μL。理論板數(shù)以橙皮苷計算不低于2000。在此條件下，橙皮苷色譜與相鄰干擾峰完全分離，分離度大于1.5(見圖1)。

2.2 溶液制備

精密稱取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上的橙皮苷對照品71.60 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.716 g/L的對照品溶液。精密稱取樣品1 g，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇溶液100 mL，精密稱重，置水浴上加熱回流30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇溶液補足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取除陳皮外按處方量配制的陰性樣品適量，精密稱定，按供試品溶液制備方法操作即得陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗:取陰性對照品溶液，按擬訂的色譜條件測定，記錄色譜圖(圖C)。結(jié)果色譜圖中，在與橙皮苷相應(yīng)的保留時間附近無干擾峰檢出。

線性關(guān)系考察:精密量取對照品溶液 0.5，1.0，5.0，10.0，15.0，20.0 mL，分別置100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，按擬訂的色譜條件測定，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)、進樣質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程 Y=16.521 X+19.981，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，橙皮苷進樣質(zhì)量濃度在3.58～143.2 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:精密量取對照品溶液5 mL，置100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，按上述色譜條件測定，連續(xù)進樣5次。結(jié)果峰面積平均值為636，RSD為0.1%(n=5)，表明儀器進樣精密度較好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品(批號為20081101)溶液，于配制后0，2，4，6，8，10 h 時分別進樣測定。結(jié)果峰面積平均值為 902，RSD為1.0%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

重復(fù)性試驗:取同一批樣品(批號為20081101)，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果橙皮苷平均含量為5.49 mg，RSD為1.0%(n=5)。

回收率試驗:精密稱取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上的橙皮苷對照品26.00 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備溶液。稱取6份已知含量樣品(批號為090322)粉末，每份約0.5 g，精密穩(wěn)定，分別加入上述對照品貯備溶液10 mL，置100 mL容量瓶中，按供試品溶液制備方法制備待測溶液，依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

精密稱取樣品1 g，依法制成供試品溶液，按擬訂的色譜條件測定，以外標(biāo)法計算含量。結(jié)果批號為20081101，090322，20091101的樣品中橙皮苷平均含量分別為 5.49，5.30，5.43 mg/g(n=3)。

3 討論

取橙皮苷對照品溶液，進行紫外掃描(200～400 nm)，結(jié)果在283.0 nm波長處有最大吸收，故選擇283 nm為檢測波長。橙皮是小兒吐瀉寧的主藥之一，橙皮苷是其主要成分，具有多種藥理作用，建立測定橙皮苷含量的高效液相色譜法，有利于控制該產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。橙皮苷的提取方法有索氏提取法、超聲提取法、加熱回流提取法，考慮到索氏提取法較煩瑣，曾對超聲提取法(超聲提取時間分別為10，30，60 min)、加熱回流提取法(加熱回流時間分別為10，30，60 min)進行了考察，發(fā)現(xiàn)加熱回流提取法比超聲提取法效果好、回收率高，且回流30 min已能將制劑中橙皮苷提取完全，故將提取方法定為加熱回流30 min。

表1 橙皮苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

樣品含量測定結(jié)果顯示，不同廠家樣品中橙皮苷的含量差異不大，但目前沒有一個傳統(tǒng)的限度標(biāo)準(zhǔn)。筆者建議，今后在修改標(biāo)準(zhǔn)時可考慮增加小兒吐瀉寧中橙皮苷的含量測定，以確保藥品質(zhì)量，保證人民用藥安全有效。

方法學(xué)考察結(jié)果表明，所建立的測定方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，空白無干擾，可作為小兒吐瀉寧中質(zhì)量控制方法。

[1]WS3－B－0685－91，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第四冊)[S].