馬來酸曲美布汀緩釋片雜質(zhì)3，4，5－三甲氧基苯甲酸的檢測

(開開援生制藥股份有限公司，河南 信陽 465200)

馬來酸曲美布汀是一種治療慢性胃炎引起的消化道疾病和腸易激綜合征的藥物，已經(jīng)在許多國家使用多年，國內(nèi)開開援生制藥股份有限公司、天津田邊制藥等公司已有生產(chǎn)。馬來酸曲美布汀原料和片劑已被收載于《日本藥局方外醫(yī)藥品規(guī)格》中，3，4，5－三甲氧基苯甲酸是其主要降解產(chǎn)物[1－2]。控制3，4，5－三甲氧基苯甲酸含量，有利于保證緩釋片的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

SP8800型高效液相色譜儀(美國科學(xué)儀器公司);H.S6型電熱恒溫水浴鍋(上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司)。鹽酸(開封市芳晶化學(xué)試劑有限公司);氫氧化鈉(天津市德恩化學(xué)試劑有限公司);乙腈(色譜純)，高氯酸(分析純)，醋酸銨(分析純)，戊烷磺酸鈉(色譜純);馬來酸曲美布汀對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100580－200501);3，4，5－三甲氧基苯甲酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100617－200501);馬來酸曲美布汀緩釋片(開開援生制藥股份有限公司，批號為08080117，08080217，08080317)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Century SIL C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:高氯酸緩沖液(取高氯酸0.85 mL，加水至1 000 mL，用0.1%醋酸胺溶液約 1 000 mL調(diào) pH 至 3.75±0.05，取此溶液 1 000 mL，加戊烷磺酸鈉1.54 g，振搖使溶解)－乙腈(65∶35);檢測波長:267 nm;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

取馬來酸曲美布汀緩釋片10片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于馬來酸曲美布汀0.1 g)，置100 mL量瓶中，加流動相適量，振搖使馬來酸曲美布汀溶解，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液;精密稱取3，4，5－三甲氧基苯甲酸對照品適量，用流動相溶解并稀釋成約為1.0 g/L的溶液，作為雜質(zhì)對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗

按處方量稱取輔料適量，用流動相稀釋(相當(dāng)于含有1 mg/mL的馬來酸曲美布汀)，超聲處理15 min，離心，取上清液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果輔料對3，4，5－三甲氧基苯甲酸無干擾。

2.3.2 破壞性試驗

酸降解試驗:取馬來酸曲美布汀對照品50.3 mg，置50 mL容量瓶中，用1 mol/L鹽酸溶液20 mL溶解，置80℃水浴30 min，冷卻，用流動相稀釋至刻度，搖勻。色譜見圖1 A。

堿降解試驗:取馬來酸曲美布汀對照品50.2 mg，置50 mL容量瓶中，用5 mL乙醇使溶解，加0.02 mol/L NaOH溶液20 mL，置60℃水浴10 min，冷卻，用流動相稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液即得堿降解溶液。色譜見圖1 B。

光照試驗:以4 000 lx光照條件，在自制的光照試驗箱中試驗10 d。結(jié)果馬來酸曲美布汀緩釋片非常穩(wěn)定，未發(fā)生變化。

2.3.3 檢測限與定量限確定

在色譜圖中，噪聲的信號為0.03mV，質(zhì)量濃度為0.0099μg/mL的對照品溶液的信號為0.07 mV，計算得檢測限為12.73 ng/mL(S/N≥3)，定量限為 42.43 ng/mL(S/N≥10)。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密稱取3，4，5－三甲氧基苯甲酸對照品9.9 mg，置100 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。分別精密量取該溶液 1 mL，稀釋成質(zhì)量濃度為 0.099，0.495，0.990，4.950，9.900，19.800 μg/mL 的溶液。精密量取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以樣品峰面積 A對質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 Y=27 366 X+324.09，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，3，4，5－ 三甲氧基苯甲酸質(zhì)量濃度在0.099 ～19.8 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

2.3.5 精密度試驗

精密稱取3，4，5－三甲氧基苯甲酸對照品適量，用流動相配制成質(zhì)量濃度分別為0.5，1，10 μg/mL的溶液，在同一天內(nèi)連續(xù)5次，連續(xù)測定5 d，分別計算日內(nèi)差、日間差。結(jié)果二者的 RSD均≤1.5%(n=5)，表明3，4，5－三甲氧基苯甲酸溶液在5 d內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 回收率試驗

稱取制劑處方空白輔料10 mg，置10 mL量瓶中，分別精密加入取標(biāo)準(zhǔn)曲線項下質(zhì)量濃度為 0.495，0.990，4.950 μg/mL 的對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法計算回收率。結(jié)果3種質(zhì)量濃度的溶液回收率分別為100.23%，98.89%，100.08% ，RSD 分別為 0.11% ，0.45% ，0.12% ，平均回收率為99.73% ，RSD=0.23% 。

3 討論

紫外掃描結(jié)果表明，馬來酸曲美布汀在267.2 nm波長處有最大吸收，主要降解產(chǎn)物3，4，5－三甲氧基苯甲酸在262 nm和268 nm波長處有最大吸收。經(jīng)試驗，254 nm和267 nm波長處測得的雜質(zhì)個數(shù)一致，雜質(zhì)含量測定結(jié)果基本一致。但267 nm波長處處各雜質(zhì)更易于檢出，故確定將267 nm作為檢測波長。

由于目前藥品標(biāo)準(zhǔn)中沒有3，4，5－三甲氧基苯甲酸的定量控制要求，筆者參照文獻(xiàn)[3]，將樣品中3，4，5－三甲氧基苯甲酸的含量控制在0.25%。

[1]王 衛(wèi)，左文堅.反相離子對高效液相色譜法測定馬來酸曲美布汀片的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜志，2003，23(2):111－115.

[2]卓開華，唐 彥，毛亞珠.三種HPLC法測定馬來酸曲美布汀片有關(guān)物質(zhì)及含量[J].安徽醫(yī)藥，2007，11(8):701－703.

[3]WS1－(X－083)2003Z－2010，馬來酸曲美布汀片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[S].