高效液相色譜法測定乳核消膠囊中淫羊藿苷含量

譚安軍，張伏軍，尹小玲，趙嘉將

(1.重慶市永川區中醫院，重慶 402160;2.重慶三峽中心醫院藥劑科，重慶 404000;3.太極集團有限公司，重慶 401147)

乳核消膠囊是由淫羊藿、柴胡、山慈菇、王不留行等藥材精制而成的中藥復方制劑，具有行氣活血、化痰散結的功效，主要用于治療乳房纖維囊性增生癥和乳腺纖維腺瘤，以及氣滯痰凝血瘀證，癥見乳內腫塊，或有脹痛，或月經不調，精神郁悶，胸脅脹痛。為有效控制產品質量，筆者建立了測定方中要藥淫羊藿主要成分淫羊藿苷含量的高效液相色譜法，報道如下。

1 儀器與試藥

Waters Alliance 2695/2996型高效液相色譜儀，Empower色譜工作站(美國Waters公司)。淫羊藿苷對照品(批號為110737－200414，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純，水為純化水;乳核消膠囊(市售品，批號為091201，091202，091203，091207，091208)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters Symmetry C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水(40∶60);流速:1.0 mL/min;檢測波長:270 nm;進樣量:10 μL。理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低于3 000。

2.2 溶液制備

取本品裝量差異項下的內容物，研細，取0.2 g，精密稱定，加甲醇40 mL超聲提取15 min，濾過，殘渣用甲醇洗滌2次，每次5 mL，合并濾液，回收甲醇至干，殘渣加甲醇適量使溶解，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取續濾液，即得供試品溶液。精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.11 mg的溶液，作為對照品溶液。按乳核消膠囊制備工藝制備缺淫羊藿的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性考察:照擬訂的色譜條件，取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，進樣。供試品溶液色譜中，在與淫羊藿苷對照品溶液色譜相應位置上有一相同色譜峰，陰性對照品溶液則無此峰，表明陰性樣品對測定無干擾，選擇性較好。見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密吸取對照品溶液 2，4，8，16，20 μL，注入液相色譜儀，以淫羊藿苷進樣量(μg)為橫坐標、峰面積為縱坐標(Y)進行回歸分析，得回歸方程 Y=194 258 X－14 239，r=0.999 8(n=5)。結果表明，淫羊藿苷進樣量在 0.22 ～2.20 μg 范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，重復進樣5次，測定淫羊藿苷峰面積。結果的 RSD為1.10%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于0，3，8，10，16 h時依法進樣測定。結果淫羊藿苷峰面積值的 RSD為1.06%(n=5)，表明供試品溶液在16 h內穩定性良好。

重現性試驗:取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結果樣品中淫羊藿苷平均含量為 2.12 mg/粒，RSD為1.21%(n=6)，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品6份，分別加入淫羊藿苷對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取5批樣品，依法制備供試品溶液并測定。結果批號為091201，091202，091203，091207，091208 的樣品中淫羊藿苷含量分別為 2.32，2.17，2.25，2.11，2.36 mg/粒。

3 討論

[1]，選用甲醇－水系統作為流動相，毒性更小，經濟適用。經多次試驗，以甲醇－水流動相能使樣品中淫羊藿苷峰與相鄰色譜峰達到基線分離，且分離良好、峰形對稱，陰性對照無干擾。

分別考察了4種供試品溶液制備方法:甲醇回流提取后，加水使溶解，用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯液蒸干，殘渣加甲醇使溶解;甲醇回流提取;甲醇超聲提取;乙醇超聲提取。結果表明，甲醇超聲提取的方法快速、準確、峰形對稱。

參考文獻:

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:229.