高效液相色譜法測(cè)定乳核消膠囊中淫羊藿苷含量

譚安軍，張伏軍，尹小玲，趙嘉將

(1.重慶市永川區(qū)中醫(yī)院，重慶 402160;2.重慶三峽中心醫(yī)院藥劑科，重慶 404000;3.太極集團(tuán)有限公司，重慶 401147)

乳核消膠囊是由淫羊藿、柴胡、山慈菇、王不留行等藥材精制而成的中藥復(fù)方制劑，具有行氣活血、化痰散結(jié)的功效，主要用于治療乳房纖維囊性增生癥和乳腺纖維腺瘤，以及氣滯痰凝血瘀證，癥見(jiàn)乳內(nèi)腫塊，或有脹痛，或月經(jīng)不調(diào)，精神郁悶，胸脅脹痛。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者建立了測(cè)定方中要藥淫羊藿主要成分淫羊藿苷含量的高效液相色譜法，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters Alliance 2695/2996型高效液相色譜儀，Empower色譜工作站(美國(guó)Waters公司)。淫羊藿苷對(duì)照品(批號(hào)為110737－200414，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純，水為純化水;乳核消膠囊(市售品，批號(hào)為091201，091202，091203，091207，091208)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters Symmetry C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－水(40∶60);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):270 nm;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液制備

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取0.2 g，精密稱(chēng)定，加甲醇40 mL超聲提取15 min，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈?次，每次5 mL，合并濾液，回收甲醇至干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱(chēng)取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.11 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按乳核消膠囊制備工藝制備缺淫羊藿的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性考察:照擬訂的色譜條件，取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10 μL，進(jìn)樣。供試品溶液色譜中，在與淫羊藿苷對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有一相同色譜峰，陰性對(duì)照品溶液則無(wú)此峰，表明陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，選擇性較好。見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線(xiàn)性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液 2，4，8，16，20 μL，注入液相色譜儀，以淫羊藿苷進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程 Y=194 258 X－14 239，r=0.999 8(n=5)。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在 0.22 ～2.20 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定淫羊藿苷峰面積。結(jié)果的 RSD為1.10%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于0，3，8，10，16 h時(shí)依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果淫羊藿苷峰面積值的 RSD為1.06%(n=5)，表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果樣品中淫羊藿苷平均含量為 2.12 mg/粒，RSD為1.21%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品6份，分別加入淫羊藿苷對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取5批樣品，依法制備供試品溶液并測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為091201，091202，091203，091207，091208 的樣品中淫羊藿苷含量分別為 2.32，2.17，2.25，2.11，2.36 mg/粒。

3 討論

[1]，選用甲醇－水系統(tǒng)作為流動(dòng)相，毒性更小，經(jīng)濟(jì)適用。經(jīng)多次試驗(yàn)，以甲醇－水流動(dòng)相能使樣品中淫羊藿苷峰與相鄰色譜峰達(dá)到基線(xiàn)分離，且分離良好、峰形對(duì)稱(chēng)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

分別考察了4種供試品溶液制備方法:甲醇回流提取后，加水使溶解，用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?甲醇回流提取;甲醇超聲提取;乙醇超聲提取。結(jié)果表明，甲醇超聲提取的方法快速、準(zhǔn)確、峰形對(duì)稱(chēng)。

參考文獻(xiàn):

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:229.