高效液相色譜法測定赤芍合劑中芍藥苷含量

(湖北省恩施土家族苗族自治州藥品檢驗所，湖北 恩施 445000)

赤芍合劑是以赤芍為主藥制成的醫院制劑，由湖北民族學院醫學院附屬醫院根據經驗處方研發而成，具有清熱涼血、散瘀止痛功效，臨床上廣泛用于缺血性腦血管疾病和各種高黏血癥，療效確切。為有效控制藥品質量，筆者采用高效液相色譜法測定方中主藥赤芍有效成分芍藥苷的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Hitachi L－7100型高效液相色譜儀(日本日立)，包括Hitachi L－7420型紫外檢測器，7725i型定量進樣閥，T2000色譜數據處理軟件。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110736－200630);赤芍合劑(湖北民族學院醫學院附屬醫院，批號分別為070801，071001，080401);乙腈、甲醇為色譜純，水為純化水，其試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0.1%磷酸水溶液－ 異丙醇(17 ∶83 ∶0.5);流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長:230 nm。在此色譜條件下，芍藥苷和其他組分可達基線分離，Rf＞1.5。

2.2 溶液制備

精密量取本品1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)20 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得對照品溶液。取不含赤芍的赤芍合劑模擬復方，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀。結果陰性對照品溶液在與對照品溶液相應保留時間內幾無色譜吸收峰，證明其他原料和輔料對芍藥苷的測定無干擾(圖1)。

線性關系考察:精密稱取60℃下干燥至恒重的芍藥苷對照品24.5 mg，置 25 mL 棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取 1，2，3，5，7 mL，置5個10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10 μL，注入色譜儀，測定峰面積。以芍藥苷的峰面積(Y)和對照品質量濃度(X)作圖，得回歸方程 Y=24 957.5+7 993 736 X，r=0.999 9(n=5)。結果表明，芍藥苷質量濃度在 0.098 ～0.686 g/L范圍內與峰面積線性關系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:在芍藥苷質量濃度線性范圍內，取高、中、低3種質量濃度的芍藥苷對照品溶液，于同一天內連續進樣6次，每次10 μL。結果芍藥苷峰面積的RSD 為 0.90% ～1.30%(n=6)。

穩定性試驗:取同一份供試品溶液，室溫(20～25℃)下放置，分別于 0，2，4，6，8，10，12，16，20，24 h 時進樣 10 μL 測定。結果含量的 RSD為1.10%(n=10)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗:取同一批(批號為070801)樣品，按供試品溶液制備方法平行制備6份溶液，分別精密吸取10 μL，重復測定6次。結果芍藥苷的含量分別為 9.63，9.44，9.64，9.20，9.25，9.46 g/L，平均 9.44 g/L，RSD=2.0%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的赤芍合劑樣品6份，每份1 mL，分別按高、中、低3個量級加入定量的芍藥苷對照品，各份均按樣品測定項下方法制成待測溶液，依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取樣品3批，按供試品溶液制備項下方法制備溶液，并按上述色譜條件測定和計算含量。結果批號為070801，071001，080401的3 批赤芍合劑中，芍藥苷含量分別為 9.1，9.4，9.2 g/L(n=3)。

3 討論

赤芍合劑是醫院制劑，臨床試驗證明該制劑安全、有效。方中平肝藥赤芍為君藥，為了保證藥品質量，筆者以赤芍中芍藥苷為質量控制指標，采用高效液相色譜法測定制劑中芍藥苷含量。取芍藥苷對照品溶液(100 μg/mL)，在200～400 nm波長范圍內掃描，結果在280 nm和320 nm波長處有最大吸收，280 nm波長處雜質峰較多，峰形較差，故選擇320 nm為測定波長;比較了加熱回流和超聲提取兩種方法，效果均好，但超聲提取簡便快速，故采用超聲提取法;比較了乙醇、甲醇兩種提取溶劑，甲醇較好;比較了提取時間(15，20，30 min)，結果超聲提取20 min即可提取完全;分別試驗了乙腈－0.1%磷酸水溶液－ 異丙醇(17 ∶83 ∶0.5)[1]、乙腈－0.1%磷酸水溶液(14∶86)[2]、乙腈－水(60∶40)[3]3種流動相，結果乙腈－0.1%磷酸水溶液－異丙醇(17∶83∶0.5)可改善芍藥苷峰形，減少峰拖尾，分離效果最佳，保留時間適當，理論板數符合規定。本試驗結果表明，高效液相色譜法用于赤芍合劑的質量控制，方法簡便、快速、穩定、實用，結果準確。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:428.

[2]張 耕，張 紅.高效液相色譜法測定腦缺血合劑中芍藥苷的含量[J].中國醫院藥學雜志，2009，29(9):777.