高效液相色譜法測定小兒清解沖劑中連翹苷含量

(廣東省韶關市藥品檢驗所，廣東 韶關 512028)

小兒清解沖劑是由金銀花、連翹、地骨皮等8味中藥制成的中藥復方制劑，具有除瘟解毒、清熱退燒功效，臨床上用于小兒外感風熱或時疫感冒引起的高燒不退、汗出熱不解、煩躁口渴、咽喉腫痛、肢酸體倦。本品收載于《衛生部頒藥品標準(中藥成方制劑第八冊)》，其質量標準中無含量測定項[1]。連翹苷為方中主藥連翹的主要有效成分。為有效控制藥品質量，筆者采用高效液相色譜法測定小兒清解沖劑中連翹苷含量，報道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010 CHT型高效液相色譜儀(日本島津)。連翹苷對照品(規格為20 mg，批號為 0821－200104，中國藥品生物制品檢定所);小兒清解沖劑(規格為10 g/袋，批號分別為100403，100404，100405，廣東青云山藥業有限公司);乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:依利特 Hypersil ODS2柱 (200 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－水(25∶75);流速:1.0 mL/min;檢測波長:278 nm;進樣量:20 μL;柱溫:25 ℃。

2.2 溶液制備

精密稱取連翹苷對照品10.39 mg，置50 mL量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液(每1 mL含連翹苷20.78 μg)。取樣品 10 g(1 袋)，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加人甲醇20 mL，稱定質量，浸漬過夜，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過;精密量取續濾液5 mL，蒸至近干，加中性氧化鋁0.5 g拌勻，置中性氧化鋁柱(100～120目，1 g，內徑 1～1.5 cm)上，用 70%乙醇 80 mL 洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣用50%甲醇溶解，轉移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。取本藥處方中除連翹外的其他藥物，按樣品制備工藝制成顆粒，再按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

專屬性試驗:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各 20 μL，注入液相色譜儀測定。結果陰性對照品溶液在與連翹苷對照品主峰保留時間相同位置處無色譜峰，表明此方法具有一定的專屬性。色譜見圖1。

線性關系考察:取對照品溶液，分別進樣 5，10，15，20，25 μL，按上述色譜條件測定連翹苷峰面積。以連翹苷進樣量 X(μg)為橫坐標、峰面積值Y為縱坐標作回歸曲線，得回歸 方 程 Y=1.928 3×106X+8.167 5 × 105，r=0.999 7(n=5)。結果表明，連翹苷進樣量在 0.103 9 ～0.519 5 μg 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液20 μL，重復進樣5次。結果連翹苷峰面積的 RSD為1.0%(n=5)，表明精密度良好。

重復性試驗:取同一批樣品5份，按供試品溶液制備方法制備溶液，精密吸取20 μL進樣，連翹苷峰面積的 RSD為1.1%(n=5)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗:精密吸取供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8 h進樣20 μL，測定連翹苷峰面積。結果的 RSD為1.2%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

加樣回收試驗:精密稱取同一批(批號為100403)已知含量(0.034 64 mg/g)的樣品6份，分別精密加入對照品(樣品量的80%，100%，120%)，混勻，按供試品溶液制備方法制備溶液，測定含量，計算連翹苷回收率。結果見表1。

表1 連翹苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各 20 μL，測定含量。結果批號為100403，100404，100405的 3批樣品中，連翹苷含量分別為 0.034 64，0.037 19，0.036 92 mg/g(n=3)。

3 討論

取連翹苷對照品適量，用50%甲醇溶液溶解，在200～300 nm波長范圍內掃描。結果連翹苷在200，228，278 nm波長處均有最大吸收，由于200 nm已接近紫外吸收區的末端，不宜采用;228 nm波長處樣品主峰有拖尾現象，因此以278 nm作為檢測波長。樣品預處理采用中性氧化鋁柱，以有效去除制劑中的干擾組分，保護色譜柱[2]。曾比較了不同比例的甲醇－水、甲醇－乙腈－水、乙腈－水作流動相，結果表明，以乙腈－水(25∶75)為流動相時，連翹苷的峰形好，保留時間適中，柱效高，分離度大，與其他干擾峰能很好地分離[3－4]。

按照2005年版《中華人民共和國藥典(一部)》中連翹藥材的最低含量限和小兒清解沖劑處方連翹的投料量計算，小兒清解沖劑中連翹苷的理論含量應不少于2.0 mg/袋。3批樣品的測定結果表明，實測含量比理論含量低，故認為通過連翹苷含量測定來控制該藥品質量具有一定的意義。

[1]WS3－B－1494－93，中華人民共和國衛生部頒藥品標準(中藥成方制劑第八冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:117－118.

[3]覃薛文，李志懷.RP－HPLC法測定雙黃連口服液中連翹苷的含量[J].中國藥師，2008，11(5):550－551.

[4]張曉燕，楊秀平，王建明.銀翹傷風膠囊質量標準的研究[J].中國實驗方劑學雜志，2007，13(2):6－9.