反相高效液相色譜法測定磷酸川芎嗪片的含量

(浙江省麗水市人民醫院，浙江 麗水 323000)

川芎嗪是從傘形科植物川芎中提取的一種生物堿單體，具有抑制自由基產生、清除氧自由基、抑制血小板聚集等藥理活性，臨床用于高血壓、胰腺炎等的治療[1]。在2005年版《中華人民共和國藥典(二部)》中，磷酸川芎嗪片的含量測定方法為紫外分光光度法[2]，筆者采用反相高效液相色譜法，取得較好效果，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀;紫外檢測器。磷酸川芎嗪對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110817－200305);磷酸川芎嗪片(北京燕京制藥公司，批號分別為070401，070608，080104);甲醇、乙腈均為色譜純，水為二次重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:XDB－C18分析柱(150.0 mm×4.6 mm，6μm);流動相:甲醇－1%醋酸溶液(35∶65);流速:1.0 mL/min;檢測波長:295 nm;柱溫:室溫;進樣量:10 μL。在此色譜條件下，磷酸川芎嗪的理論板數為2 600，保留時間為6.82 min，供試品溶液色譜中川芎嗪峰與其他各峰分離度大于1.5，分離度良好，符合規定。磷酸川芎嗪對照品溶液、空白對照品溶液和供試品溶液的色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液配制

精密稱取磷酸川芎嗪對照品12.5 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質量濃度為0.5 g/L的對照品貯備液;取對照品貯備液0.4 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取磷酸川芎嗪片20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(相當于磷酸川芎嗪片50 mg)，置100 mL容量瓶中，用甲醇適量超聲處理30 min使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取0.4 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按處方組成量取除磷酸川芎嗪外的其余輔料，按工藝要求制備缺磷酸川芎嗪的空白對照樣品，并按供試品溶液制備方法制成空白對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗:精密吸取對照品溶液、空白對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液同一位置有相同的峰，空白對照品溶液在同一位置無峰出現，表明空白對照品對試驗無干擾。

線性關系考察:精密量取對照品貯備液 0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.8 mL，分別置 10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下分別進樣10 μL測定峰面積。以峰面積(A)為縱坐標、對照品質量濃度(C)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程 A=0.046 C+0.051 4，r=0.999 8(n=6)。結果表明，磷酸川芎嗪質量濃度在5～40 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL進樣，重復5次。結果峰面積值的 RSD為1.12%(n=5)，表明方法精密度良好。

重復性試驗:精密稱取同一批(批號為070401)樣品5份，按樣品測定方法操作。結果的 RSD為0.98%(n=5)，表明方法重復性較好。

穩定性試驗:取同一批(批號為070401)樣品按供試品溶液制備方法制備溶液，分別于0，2，4，6，8 h時進樣測定含量。結果的RSD為1.04%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

加樣回收試驗:精密稱取同一批(批號為070401)樣品(含磷酸川芎嗪約45 mg)6份，置100 mL容量瓶中，稀釋成20 μg/mL，取10 mL，分別加入 20 μg/mL 的磷酸川芎嗪對照品溶液 2.5，10，20 mL，測定含量，計算加樣回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3個批號的磷酸川芎嗪片，按供試品溶液配制方法制備溶液，分別進樣10 μL，測定峰面積，計算磷酸川芎嗪片標示量的百分含量，同時按2005年版《中國藥典(二部)》方法測定，結果見表2。

表1 磷酸川芎嗪加樣回收試驗結果(n=6)

表2 樣品含量測定結果

3 討論

配制溶液時，加入適量甲醇并超聲處理30 min，可加速磷酸川芎嗪片溶解完全。在選定的色譜條件下，參照文獻[3－4]，考察了甲醇和1%醋酸溶液的比例，當比例為35∶65時，磷酸川芎嗪片與溶劑雜質峰分離好、柱壓低，對照品溶液與供試品溶液峰形好，理論板數超過所要求的1 500。用選定的波長295 nm測定，磷酸川芎嗪回收率、精密度和線性關系都令人滿意，且無其他干擾峰。

藥典收載的紫外分光光度法操作具有簡單、省時、快捷的優點，而高效液相色譜法則可有效分離多組分、排除雜質或輔料干擾。比較了兩種測定方法測定磷酸川芎嗪含量的準確性，3批樣品的測定精密度相對偏差均小于1.1%，表明反相高效液相色譜法同樣可作為磷酸川芎嗪片的含量測定方法。

[1]張廷偉.鹽酸川芎嗪的藥理作用及其臨床應用[J].醫藥導報，2006，25(11):1 179－1 180.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2005:869.

[3]張 偉，林 凱.HPLC測定舒胸膠囊中鹽酸川芎嗪的含量[J].中成藥，2006，28(6):920－921.

[4]李 雅，郭建生.高效液相色譜法測定川麻顆粒中川芎嗪的含量[J].湖南中醫藥導報，2004，10(1):51－52.