多功能顯微診斷儀在淋球菌篩檢中的應用

付登俊,沈艷群

多功能顯微診斷儀(multifunction m icroscopy diagnosis Instrument,MDI)是近年來自國內外引進的一種屏幕線性放大40～20 000倍的高清晰度顯微鏡,主要用于末梢血檢查的健康評估,由于其不僅具有放大倍數高,分辨率可達 0.3μm,且具有暗視野及相差兩大性能。所以,我們將其拓寬至淋病奈瑟氏菌(neisseringonorrhoeae,NG)的篩檢方面,通過與診斷標準方法(培養)對比研究及大量的臨床實踐,獲得了一些經驗與實驗數據,現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料來源 采集52例四川省皮膚性病防治研究所可疑淋病患者的尿道分泌物、精液、前列腺液、陰道分泌物作為檢測標本。其中男 46例,女 6例,年齡 18～55歲。

1.2 檢測方法 NG培養基：改良TM瓊脂培養基含萬古霉素(0.3μg/m l)粘菌素(7.5μg/m l)制霉菌素(12.5μg/ml)及三甲氧芐二氨嘧啶。儀器：MDI產地：美國。(1)標準診斷方法：淋球菌培養,將無菌采集到的標本,立即接種于改良 NG培養基中,放入 36℃、5%CO2培養箱孵育 48 h,按常規方法鑒定。(2)NG MDI活體檢測法：將無菌采集到的標本直接滴加玻片上(若用棉拭子取樣,則滴加 2滴生理鹽水于玻片、將棉拭子中的樣本洗脫于鹽水中),加蓋玻片后分別用暗視野,相差活體查找NG。在相差顯微鏡下,NG判定標準為：卵圓形或圓形、成雙排列,兩菌之間呈腎形緊密排列;菌體中央呈實心狀。NG暗視野鏡下特征：卵圓形或圓形呈微弱折光,菌體中央有紫紅色顆粒。

1.3 統計學方法 采用醫學統計軟件：State軟件包做χ2檢驗。

2 結果

NG培養結果與 MDI活體觀察結果比較：52例標本中,2者均陽性為 16對,2者均陰性為 27對,MDI檢測陽性而培養陰性者為 7例,MDI檢測陰性而培養陽性者為 2例。見表 1。

表1 MDI檢測結果(例)

運用臨床診斷性試驗評價方法[1],對四格表數據進行運算,MDI活體檢測敏感性為88%,特異性為80.1%,采用醫學統計軟件包計算 χ2值,其 χ2=19.57484,χ2＞7.88(P＜0.005),故MDI活體檢測與NG培養具有非常明顯的關聯性。

3 討論

淋病奈瑟氏菌是性傳播疾病的主要病原[2],病原學檢查長期以來采用革蘭氏染色與NG培養的方法。前者由于粒細胞內葡萄球菌、衰老菌均可染成革蘭陰性而造成假陽性。后者由于 NG十分脆弱,離體后很快死亡并且容易造成假陰性。國外Aeeou-1cc等采用連接酶鏈反應(ligase chain reaction assay,LCR)[3],對 562例性病患者小便與生殖道分泌物同時測定沙眼衣原體與NG,結果發現：用LCR檢測小便中NG的敏感性、特異性分別為93.5%和99.8%;檢測生殖道分泌物分別為96.8%和100%。研究認為,采用LCR方法同時測定沙眼衣原體于 NG是敏感和特異的,且生殖道取樣較小,使取樣效果更佳[4]。

NG與其它葡萄球菌在MDI鏡下區別：在相差鏡下,白色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、金黃色葡萄球菌均呈正圓形菌體、中央薄、邊緣厚 ,明暗對比十分顯著。暗視野下呈強折光、純亮白色,與NG形態有顯著差異。

實驗顯示：MDI發現有NG的樣本中,均伴隨著白細胞的出現,急性期,白細胞大量出現,成團成堆,慢性期,稀疏可見。若無白細胞,又出現有極少數形態學上類似 NG的細菌,一定要慎重出報告。通過對比研究：MDI活體檢查與NG培養有非常明顯的關聯性。但亦有假陽性和假陰性。值得進一步深入研究。

淋病患者用藥后再進行檢查可導致MDI檢測陽性而NG培養陰性,這種情況需停藥 7～10 d重新檢查。然而取材不同,量太少則可導致MDI陰性而NG培養陽性;所以,若患者有典型臨床癥狀,樣本中又有大量白細胞出現,則宜再次取樣檢查,以免漏檢。若重復檢查均為陰性,則有可能為沙眼衣原體和解脲支原體引進的非淋菌性尿道炎。PCR技術由于對細菌標本的要求不高,死菌,活菌,標本量少的情況均能檢測出病原菌,所以日益受到人們的重視[5-6]。

目前,NG檢測中,無論是革蘭染色,DNA探針或培養法,均存在局限性,所以開發MDI高放大倍數,結合暗視野,相差的兩大功能,快速篩查NG,同時建立淋球菌培養的標準化,即建立標準的培養系統—立即接種培養基預溫,采用雙培養基,一支加抑制雜菌的抗生素,另一支不加抗生素,必然會提高NG檢出的特異性與敏感度。

[1] 王家良.臨床醫學科研設計指南[Μ].成都：四川科學技術出版社,1985：42.

[2] 張 軼,倪語星.三中檢測淋病奈瑟氏菌方法的比較[J].上海醫學檢驗雜志,1996,11(4)：200.

[3] Carroll.A ldeen WE.Morrison M.Evaluation of the Abbolt Lcx ligase chain reaction assay for detection of Chlamydia trachomatisand Neisseria gonorrhoeae in urine and genital swab speimens from a sexually transm itted disease uinic population[J].Jclin Microbiol,1998,36 (6)：1630.

[4] 王賢蕙.淋病奈瑟氏菌分子生物學檢測方法進展[J].國外醫學?臨床生物化學與檢驗學分冊,1995,16(4)：151-153.

[5] King k.Holmes MD.PHD.Sexually tronsmitted disease.Third edition New York st copyright(C)mcgram-Hill companies[M].Inl, 1999：1145.

[6] Tabeizi SN,Chen S,Tapsall J,et al.Evaluation of opa-based realtime PCR for dectation of neisseria gonorrhoeae[J].Sex Transm Dis,2005,32(3)：199-202.