通腑與瀉肺法配伍應用對ALI/ARDS大鼠肺腸組織sIgA含量影響的比較研究

劉恩順，孫增濤，蘇景深，郭思佳，劉 偉，劉 建，孟苗苗，楊 曉

（1.天津中醫藥大學第二附屬醫院呼吸科，天津 300150；2.天津中醫藥大學，天津 300193）

通腑與瀉肺法配伍應用對ALI/ARDS大鼠肺腸組織sIgA含量影響的比較研究

劉恩順1，孫增濤1，蘇景深1，郭思佳2，劉 偉1，劉 建2，孟苗苗2，楊 曉2

（1.天津中醫藥大學第二附屬醫院呼吸科，天津 300150；2.天津中醫藥大學，天津 300193）

目的：觀察通腑與瀉肺法及其配伍應用對ALI/ARDS大鼠肺腸組織sIgA含量的影響。方法：將100只健康wistar大鼠隨機分為5組：對照組、模型組、瀉肺組、通腑組和通腑瀉肺組，采用尾靜脈注射油酸加內毒素的方法造成大鼠ALI/ARDS模型，檢測各組大鼠肺腸組織sIgA含量。結果：通腑法、瀉肺法和通腑瀉肺法均可有效降低肺腸組織sIgA含量，且通腑與瀉肺法配伍應用效果明顯優于二法單獨應用。結論：在調節ALI/ARDS大鼠黏膜免疫功能方面，肺腸同治具有明顯優勢。

通腑瀉肺法；ALI/ARDS；sIgA；黏膜免疫

急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是指由心源性以外的各種肺內外致病因素導致的急性進行性缺氧性呼吸衰竭[1]。ARDS的臨床表現為進行性呼吸困難、紫紺、氣促、喘憋等肺氣壅遏的癥狀，往往同時伴有便秘、腹脹等腑氣不通，大腸失于傳導的病理變化，其證候學突出體現了中醫“肺腸相關”的特點。因此，“肺病及腸”、“肺腸同病”是從中醫視角觀察ARDS的常見結論，而“臟病治腑”、“通腑瀉肺”也是中醫常用的有效治法并為臨床研究初步證實[2-3]。隨著黏膜免疫研究的深入，使人們越來越相信消化系統和呼吸系統兩大黏膜器官組織之間存在密切聯系，sIgA是黏膜免疫主要的功能執行者，主要存在于初乳、唾液、胃腸液、支氣管，這在一定程度上證明了sIgA是聯系各處黏膜免疫的共同分子基礎。有學者經研究后指出，sIgA是體現肺與大腸相表里的重要物質基礎之一[4]。開展通腑與瀉肺法及其配伍應用對ALI/ARDS大鼠肺腸組織sIgA含量影響的比較研究，有助于揭示ARDS肺腸相關的免疫調節的物質基礎，豐富“肺與大腸相表里”這一臟腑相關理論的現代生物學機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 健康wistar大鼠100只，雄性、體重（200± 20）g，購自天津市山川紅實驗動物科技有限公司（許可證號：SCXk（津）2009-0001），購入后置天津中醫藥大學動物實驗中心常規飼養。

1.1.2 藥物及試劑 通腑瀉肺方（葶藶子、桑白皮、大黃、枳實、厚樸）、通腑方（大黃、枳實、厚樸）、瀉肺方（葶藶子、桑白皮）中藥顆粒劑，購自天津中醫藥大學第一附屬醫院藥房。生藥劑量比例按照參考文獻[5]換算，依照人體單位體重生藥量求得大鼠單位體重生藥量。用蒸餾水配置通腑瀉肺方（生藥濃度1.08 g/ml），通腑方（生藥濃度0.45 g/ml）、瀉肺方（生藥濃度0.63 g/ml），4℃冰箱保存備用。油酸（分析純）來自天津運盛化學品有限公司；大腸桿菌內毒素脂多糖（編號：L2880血清型055:B5），大鼠SIgA ELISA試劑盒(批號：BP-E09107R)為美國SIGMA公司產品。

1.1.3 模型建立 動物購入后適應性飼養1周，參照文獻[6]的造模方法并加以改進。將大鼠置于大鼠固定器，固定軀干及四肢，暴露尾部。正常對照組大鼠于左側尾靜脈注射生理鹽水0.12 ml/kg，2 h后于右側尾靜脈再次注射生理鹽水1 ml/kg；其他各組于左側尾靜脈注射油酸0.12 ml/kg，間隔2 h后選右側尾靜脈注射內毒素1 mg/kg復制ARDS模型。常規消毒，自由攝食飲水，注意保暖。

1.1.4 動物分組和給藥方法 將大鼠按體重隨機分為5組：對照組、模型組、瀉肺組、通腑組和通腑瀉肺組，每組20只。對照組與模型組在造模完成后即用生理鹽水灌服，每次0.01 ml/g。瀉肺組、通腑組和通腑瀉肺組在造模完成后即分別采用瀉肺方、通腑方、通腑瀉肺方灌胃，每次0.01 ml/g，1次/d。

1.1.5 標本采樣和制備 分別在造模第3天和第7天每組隨機抽取10只大鼠，腹主動脈取血處死后，冰上迅速取左肺組織和距幽門下15 cm處及回盲部腸組織放入無菌低溫凍存管，于液氮中速凍，轉存到-80℃冰箱保存待測。

1.1.6 指標觀測 觀察各組大鼠一般狀態，ELISA檢測大鼠肺腸組織中SIgA，操作嚴格按說明書進行。

1.1.7 統計學處理 采用SPSS13.0統計軟件包，各項指標以均值±標準差（±s），計量資料進行ANOVA單因素方差分析，LSD法作兩兩比較；以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 實驗結果

2.1 一般狀態觀察

對照組大鼠活潑好動，皮毛光澤發亮，呼吸平穩，抓取時能迅速逃避。模型組大鼠在注入OA后30 min起，始出現精神不振，行動遲緩，對刺激反應差，皮毛枯槁，無光澤，多見皮毛倒立，蜷縮成團狀；隨時間延長，大鼠出現呼吸急促、呼吸困難，部分大鼠出現紫紺、血性泡沫樣液體從鼻腔溢出、大便干結、部分有血尿。瀉肺組、通腑組和通腑瀉肺組大鼠精神及呼吸困難均好于模型組，能飲水，多數有黑色稀便，極臭，未見血尿；但亦行動遲緩，對刺激反應不靈敏；皮毛無光澤，但較少出現皮毛倒立。

2.2 肺腸組織sIgA檢測結果

2.2.1 第3 天檢測結果 第3天大鼠肺、腸組織sIgA含量比較，模型組較對照組明顯升高（P＜0.01），瀉肺組、通腑組及通腑瀉肺組較模型組顯著降低（P＜0.05），通腑瀉肺組較瀉肺組和通腑組顯著降低（P＜0.05）。詳見表1。

表1 大鼠sIgA第3天檢測結果（±s,μg/ml）Tab.1 Test results of sIgA in the third day（±s,μg/ml）

表1 大鼠sIgA第3天檢測結果（±s,μg/ml）Tab.1 Test results of sIgA in the third day（±s,μg/ml）

與對照組比較，▲P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05；與通腑瀉肺組比較，△P＜0.05Compared with control group,▲P＜0.01;compared with model group,*P＜0.05;compared with Tongfu Xiefei group,△P＜0.05

組別 n 肺sIgA對照組模型組瀉肺組通腑組通腑瀉肺組9 8 8 6 7 21.97±2.44 46.11±3.25▲40.03±3.29*△37.29±3.52*△31.16±2.99*腸sIgA 23.20±3.12 47.08±2.05▲3 9.14±2.70*△39.08±2.22*△32.86±2.51*

2.2.2 第7 天檢測結果 第7天大鼠肺、腸組織sIgA含量比較，模型組較對照組明顯升高（P＜0.01），瀉肺組、通腑組及通腑瀉肺組較模型組顯著降低（P＜0.05），通腑瀉肺組較瀉肺組和通腑組顯著降低（P＜0.05）。詳見表2。

3 討論

分泌性IgA是黏膜免疫系統的主要效應分子，主要存在于淚液、唾液、乳汁和呼吸道、消化道及泌尿生殖道等黏膜表面分泌液中，是黏膜組織免疫應答的特征，也是機體黏膜免疫的第一道防線。SIgA的產生直接取決于抗原的存在。Singh等[7]報道，用傷寒沙門菌免疫小鼠可誘導小鼠脾T細胞數量增加，腸液SIgA含量增高。劉東妍等[8]也發現，在持續高氧作用下新生大鼠回腸黏膜分泌大量SIgA，這有利于抵御細菌毒素的侵襲，以保持腸黏膜的完整性。證實了機體在遭受抗原打擊后可以出現以SIgA升高為表現形式的黏膜免疫應答，與有學者[9]提出的局部氣管吸入或鼻腔滴入減活疫苗，可激發黏膜產生較多的SIgA，提高其免疫功能的觀點一致。

表2 大鼠sIgA第7天檢測結果（±s,μg/ml）Tab.2 Test results of sIgA in the seventh day(±s,μg/ml)

表2 大鼠sIgA第7天檢測結果（±s,μg/ml）Tab.2 Test results of sIgA in the seventh day(±s,μg/ml)

與對照組比較，▲P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05；與通腑瀉肺組比較，△P＜0.05Compared with normal group,▲P＜0.01;compared with model group,*P＜0.05;compared with Tongfu Xiefei group,△P＜0.05

組別 n 肺sIgA對照組模型組瀉肺組通腑組通腑瀉肺組9 8 8 4 5 21.21±3.39 45.20±2.57▲38.77±2.88*△39.02±2.03*△30.92±3.27*腸sIgA 24.93±2.80 47.03±2.50▲40.38±3.01*△41.99±3.19*△31.24±2.81*

失控性的炎癥反應是ARDS病理機制的一大特點，目前認為，急性肺損傷是機體炎癥反應在肺部的表現，炎癥反應包括促炎與抗炎兩個方面[10-11]。二者之間存在著錯綜復雜的關系并相互影響，兩者保持平衡則機體內環境保持穩定。而與炎癥反應和炎癥損傷同時發生的黏膜免疫應答在維持機體處于穩定狀態中起到重要作用。正如邱海波等[12]在探討急性肺損傷的炎癥反應機制與藥物治療時提出必須同時觀察促炎與抗炎反應的變化，才有可能確定正確的免疫治療方向一樣，對ARDS機體免疫功能特別是黏膜免疫功能要有更深入的認識。

ARDS具有明顯的肺、腸相關特征，因此，“肺病及腸”、“肺腸同病”是從中醫視角觀察ARDS的常見結論，而“臟病治腑”、“臟腑同治”也是中醫常用的有效治法。本實驗開展了通腑與瀉肺法及其配伍應用對ARDS大鼠黏膜免疫功能影響的研究，結果表明，當大鼠接受抗原攻擊，制成ARDS模型后，激活體內黏膜免疫系統以增強抵抗疾病的能力，表現為所有造模組肺、腸組織sIgA水平均較對照組明顯增高。治療后第3天和第7天三組均能降低肺、腸組織sIgA水平，其中通腑瀉肺組優于瀉肺組和通腑組。實驗結果一方面肯定了中醫通腑法、瀉肺法和通腑瀉肺法均可通過激活sIgA免疫應答，中和體內抗原，減輕其對機體的損傷，從調節黏膜免疫功能這一溝通肺、腸的生物學機制起到治療ARDS的作用。另一方面，體現中醫肺、腸相關的通腑瀉肺法效果明顯優于單純使用通腑法與瀉肺法，為探索肺與大腸相表里理論的生物學機制和物質基礎提供了實驗依據，值得進一步深入研究。

[1]中華醫學會呼吸病學分會.急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征的診斷標準(草案)[J].中華結核和呼吸雜志,2000,23(4):203.

[2]李文放,陳杰,楊興易,等.大黃對急性呼吸窘迫綜合征患者的臨床療效中國急救醫學,2003,23(2):102.

[3]耿耘,馬超英.中西醫結合治療呼吸窘迫綜合征臨床觀察[J].江西中醫學院學報,1997,9(1):4-5.

[4]靳文學,楊宇.從黏膜免疫系統看“肺與大腸相表里”[J].四川中醫,2005,23 (12):1-3.

[5]柯雪帆,趙章忠,張玉萍,等.《傷寒論》和《金匱要略》中的藥物劑量問題[J].中國中藥雜志,1983,8(12):36-38.

[6]張青,毛寶齡.油酸和內毒素兩次打擊大鼠急性肺損傷動物模型研究[J].第三軍醫大學報,2000,22(6):603-604.

[7]Singh M,Vohra H,KumarL,et al.Induction of Systemic and Mucosal Immune Response in Micelmmuniscd with Porins of Salmonella Typha[J].J Med Microbiol,1999,48(1):79.

[9]羅慰慈.現代呼吸病學[M].北京:人民軍醫出版社,1997:99-100.

[8]劉冬妍,陳旭芳,李玖軍.高氧致新生大鼠腸黏膜SIgA的變化[J].中國醫科大學學報,2009,38(1):45-47.

[10]Meduri GU.The role of the host defence response in the progression and outcomesofARDS;pathophysiologicalcorrelation and glucocortivoid treatment[J].Euri Reapir J,1996,(9):2650-2670.

[11]Bow R C,Grodzin C J,Balk R A.Sepsis:a new hypothesis for pathogenisis of the disease process[J].Chest,1997,112:235-243.

[12]邱海波,陳德昌,潘家綺,等.急性肺損傷的炎癥反應機制與藥物治療探討[J].中國危重病急救醫學,1999,11(11):678-680·

The effect of application of combining Tongfu-therapy with Xiefei-therapy on sIgA content in lung and large intestine in ALI/ARDS rats

LIU Enshun1,SUN Zengtao1,SU Jingshen1,GUO Sijia2,LIU Wei1,LIU Jian2,MENG Miaomiao2,YANG Xiao2
（1.Second Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM,Tianjin 300150,China;2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

Objective:To observe the effect of Tongfu-therapy,Xiefei-therapy and Tongfu Xiefei-therapy on sIgA content in lung and large intestine in ALI/ARDS rats.Methods:We divided the health Wistar rats into 5 groups,Control group, model group,lung treatment group,large intestine treatment group and lung-large intestine treatment group.We made the ALI/ARDS-rat model by Intravenous injecting oleic acid and endotoxin in caudal vein,and observed sIgA content in lung and large intestine organs.Results:All of Tongfu-therapy,Xiefei-therapy and Tongfu Xiefei-therapy could effectively reduce the sIgA content in lung and large intestine,and the method of combining Tongfu-therapy with Xiefei-therapy was superior to the single method.Conculsion:Lung-large intestine treatment is great advantage in regulating immunologic function of mucous membrane in ALI/ARDS rats.

Tongfu Xiefei-therapy;ALI/ARDS;sIgA;Mucous membrane immunologic function

R242

A

1673-7210（2011）02（c）-020-03

國家重點基礎研究發展計劃課題（2009CB522702）；國家自然科學基金面上項目（30701115）；天津市應用基礎及前沿技術研究計劃項目（08JCYBJC11000）。

2010-12-16）