78例NSCLC血清VEGF表達臨床意義分析

劉新姿 錢曉萍 王朝霞 王科明 劉寶瑞 胡文靜 王立峰 楊陽 禹立霞

1.南京醫科大學第二附屬醫院腫瘤科，江蘇 南京 210011；2.南京大學附屬鼓樓醫院腫瘤中心，江蘇 南京 210008

血管形成在腫瘤的發生、發展、侵襲及轉移中發揮著重要作用，已成為腫瘤治療的新靶點之一。血管形成受血管刺激因子與抑制因子間平衡的調控，同時也涉及多種其他因子，如凋亡相關因子、生長素、生物酶和黏附因子等[1]。血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種重要的促血管形成因子，是目前已知最有效最特異的因子，它通過與血管內皮細胞上的相應受體結合，能促進內皮細胞生長，同時可增強血管通透性使內皮細胞遷移，抑制內皮細胞凋亡，激活蛋白酶致使細胞外基質降解，有利于新生血管生長及延伸[2]。近年來許多學者應用免疫組織化學法檢測NSCLC患者腫瘤組織中的VEGF表達，發現VEGF有助于預測患者預后，但是目前關于NSCLC患者血清VEGF變化的研究尚不是很多。筆者采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測了78例非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者化療前血清VEGF水平，并探討了其與療效、預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集筆者所在醫院腫瘤科2001年12月～2006年1月住院的臨床資料完整的NSCLC患者78例，經病理學或細胞學證實，均為初治患者。其中男44例，女34例；年齡28～76歲，中位年齡60歲。腺癌50例，鱗癌22例，其他6例（包括腺鱗癌3例，大細胞癌2例，肉瘤樣癌1例）。依據國際抗癌聯盟1997年修訂的TNM分期標準，本組患者Ⅰ、Ⅱ期10例，Ⅲ、Ⅳ期67例，分期不明1例。其中遠處轉移患者包括肺轉移12例，骨轉移10例，肝轉移3例，腦轉移5例，肺骨轉移5例，腎上腺轉移3例，肺腎上腺轉移1例，骨腦轉移5例，骨腎上腺轉移1例，心包轉移2例?；熐肮δ軤顟BKPS評分≥70分，預計生存期＞3個月。所有患者均在化療前抽取靜脈血清標本，每份血10 μL。

1.2 治療方案

所有患者均采取新一代含鉑兩藥聯合方案為主的一線化療，21 d為1個周期，化療2～6個周期。NP（蓋諾+順鉑）方案，GP （鍵擇+順鉑）方案，TP（艾素+順鉑）方案，劑量為健擇（GEM）800 mg/m2，d1、d8，順鉑（DDP）60 mg/m2分 5 d 用，蓋諾（NVB）25 mg/m2，d1、d8，艾素（TXL）75 mg/m2，d1、d8。

1.3 檢測方法

VEGF酶聯免疫分析試劑盒為美國LIFEKEY生物醫學技術公司產品。采用ELISA法，按照試劑盒說明書進行操作。血清VEGE＞125 pg/mL視為陽性，血清VEGF≤125 pg/mL視為陰性。

1.4 療效評價

按2000年RECIST實體瘤標準，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩定（SD）和進展（PD）。疾病進展時間（TTP）為化療開始至疾病進展的時間。CR+ PR計算總有效率。生存期（OS）為從開始化療至死亡或末次隨訪的時間。

1.5 統計學處理

應用SPSS13.0軟件進行統計學分析，率的比較采用x2檢驗或Fisher確切概率法檢驗，用Kaplan-Meier生存曲線及Log-Rank檢驗比較其預后意義，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 VEGF在NSCLC患者血清中的表達

78例NSCLC患者血清VEGF水平，其中24例陽性，54例陰性，陽性率為30.8%。

2.2 NSCLC患者血清VEGF與臨床特征的關系

經x2檢驗，VEGF表達與淋巴結轉移與否、遠處器官轉移與否以及腫瘤TNM分期密切相關（P＜0.05）。有淋巴結轉移者VEGF陽性率（43.9%，18/41）明顯高于無淋巴結轉移者（17.6%，6/31）；有遠處轉移者VEGF陽性率（45.8%，22/48）較無遠處轉移者顯著升高（6.67%，2/37）；TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期者VEGF陽性率（38.5%）較Ⅰ、Ⅱ期者顯著升高（0.0%），以上均有統計學意義（P＜0.05）。NSCLC患者血清VEGF與患者的性別、年齡無關（P ＞0.05）。VEGF在腺癌中的陽性率（34%）高于鱗癌（18.2%），但差異無統計學意義（P ＞0.05）。見表1。

表1 肺癌VEGF與臨床特征間的關系

2.3 NSCLC患者血清VEGF與化療療效及生存期的關系

78例患者共接受化療248個周期，均可評價療效，無一例完全緩解，PR 20例，SD 40例，PD 18例。VEGF陽性者的化療有效率為4.2%（1/24），陰性患者為35.2%（19/54），后者顯著高于前者（P＜0.05）。見表2。隨訪至2006年9月30日，13例患者失訪，其中5例血清VEGF陽性，8例VEGF陰性。從Kaplan-Meier生存曲線看，VEGF表達陽性組的生存曲線高于VEGF陰性組，但Log-Rank檢驗，兩者總體生存未達到統計學上顯著性差異（P=0.0741，圖1）。VEGF升高患者的生存期為2～57個月，中位生存期20個月，95%CI為（8.8～31.2個月）；1年生存率為63.6%，2年生存率為32.7%，3年生存率為16.4%。VEGF正常患者的生存期為2～51個月，中位生存期36個月，95%CI為（11.3～60.7個月）；1年生存率為79.7%，2年生存率為52.1%，3年生存率為44.6%，兩者3年生存率差異有統計學意義（P＜0.05)。見表3。78例患者有77例統計了TTP，1例未計入，為VEGF陽性表達。VEGF高表達和低表達患者的中位TTP均為8個月，95%CI分別為1.6～14.4個月，4.8～11.2個月，兩者TTP差異無統計學意義（P=0.2802）。見圖2。

以乘積極限法計算VEGF表達陽性及陰性患者的1年、2年、3年累積生存率及兩組的中位生存期。陰性組累積生存率及中位生存期較陽性組為高，提示VEGF為負性預后因子。見表3。

表2 NSCLC患者VEGF與化療療效的關系

表3 NSCLC患者VEGF與生存期的關系

圖1 VEGF表達對NSCLC患者生存曲線的影響

圖2 血清VEGF表達與TPP分析

3 討論

腫瘤的生長和轉移首先依賴于血管的生成，血管的形成過程是促進因子和抑制因子作用的結果。VEGF是血管生成過程最重要的正向調控因子，與多種腫瘤的生長、轉移和預后密切相關[3]。VEGF在許多腫瘤中表達上調，導致腫瘤微環境促血管生成和抑制血管生成因子的失衡，從而促進血管化作用和生長[4-5]。

NSCLC循環VEGF水平的臨床意義是有爭論的。Jiang等[6-10]報道，血清VEGF在原發性NSCLC中表達增高，在淋巴結轉移組表達顯著高于無淋巴結轉移組，而且隨著腫瘤分期的進展，其水平逐漸增高，差異有統計學意義，提示與腫瘤進展與轉移有關。筆者的研究也支持以上結果。而另一些研究顯示相反的結果，70例SCLC或NSCLC患者并未發現血清VEGF水平與腫瘤分期或遠處轉移情況有顯著相關性[11-14，21]。

目前還沒有報道顯示血清VEGF與NSCLC不同組織類型（鱗癌、腺癌、大細胞癌）有相關性[6-8]，支持了筆者的發現。

筆者的研究結果表明，VEGF在非小細胞肺癌患者血清中的表達與患者的性別、年齡無關（P＞0.05），而與腫瘤淋巴結轉移與否、遠處器官轉移與否以及腫瘤的TNM分期密切相關（P＜0.01）。即隨著臨床分期、淋巴結轉移及遠處轉移的進展，血清VEGF陽性率可出現明顯升高。這一結果說明VEGF在肺癌的生物學演進上扮演了重要角色，是肺癌惡性生物學行為的重要標記。在高度惡性、處于進展階段的肺癌中，腫瘤組織增生活躍，分泌大量的VEGF入血，是血清中檢測到高水平VEGF的重要原因，而VEGF能夠增加內皮細胞磷脂酶C的活性，通過肌醇酯水解促進第2信使產生，誘導內皮細胞增殖，同時增殖了的內皮細胞又可分泌多種促腫瘤生長物質，VEGF通過以上方式與腫瘤的生長、侵襲、轉移緊密聯系[15]。筆者認為，肺癌患者血清VEGF高表達，在排除創傷和炎癥的前提下，可能提示腫瘤的活躍生長及潛在轉移。

有報道，通過免疫組化方法檢測NSCLC與正常肺組織的VEGF與微血管密度的表達，研究發現兩者差異具有統計學意義，NSCLC的微血管密度隨VEGF表達增強而增多，VEGF表達與肺癌分化程度、分期和預后密切相關，VEGF高表達者易轉移，生存期短，提示VEGF參與肺癌的發生、發展過程，其表達強度可作為判斷預后的獨立指標[17]。

治療前NSCLC患者血清VEGF的預后價值還不十分清楚，仍有爭議。在大多數研究中，血清VEGF對生存期無預后影響[14，21]。在肺癌中，一些報道指出血清VEGF高表達與腫瘤大小以及預后相關[9，18-20]。Laack等[7]發現血清VEGF高水平表達患者生存期顯著長于低表達患者，118例NSCLC患者單因素分析中發現血清VEGF表達水平是重要的預后因子。

筆者的研究結果顯示，VEGF正?；颊叩纳嫫趦炗赩EGF升高患者，接近統計學意義（P=0.0741），可能是由于本研究患者病例較少，可進一步擴大樣本量進行研究。VEGF高表達和低表達組的1年、2年生存率差異無統計學意義（P＞0.01），但是從兩者的生存曲線看，VEGF陽性組高于陰性組，陽性組和陰性組3年生存期差異有統計學意義（P＜0.05）。以上結果提示，血清VEGF水平升高晚期NSCLC患者，其生存期縮短，預后差。將血清VEGF水平作為判斷晚期NSCLC患者預后，可能具有一定的價值。

本研究還顯示，78例NSCLC患者經新一代療效類似的含鉑方案化療后評價療效，PR 20例，SD或PD 58例，有效率為25.6%。VEGF高表達和低表達患者的有效率分別為4.17%、35.2%，其差異具有統計學意義（P＜0.05），這表明NSCLC患者血清VEGF水平增高與患者的治療反應性存在顯著的負相關。這些結果直接或間接的顯示鉑類的治療對較少產生VEGF的NSCLC是有效的。總之，NSCLC患者VEGF低表達可能預示對鉑類反應好。

綜上所述，血清VEGF可作為NSCLC患者腫瘤轉移、化療敏感性及預后的一個良好的預測指標，且ELISA測定血清VEGF檢測方便，既容易又可重復，價格便宜，且創傷性達到最低，臨床應用價值很大。

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