兩種檢測乙肝血清學(xué)標(biāo)志物方法的臨床對(duì)比

秦望森 (河南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,河南 鄭州 450000)

乙型肝炎病毒(HBV)血清學(xué)標(biāo)記物(HBV-M)檢查仍作為目前臨床診斷、治療和判斷HBV感染者病程及傳染性的重要指標(biāo)之一。HBV-M的檢測方法有很多種,臨床常用的免疫檢測方法主要有放射免疫法(RIA)、ELISA。隨著科技的發(fā)展,一些新的檢測技術(shù)不斷被開發(fā)。時(shí)間分辨熒光免疫分析法(TRF IA)的研究在國內(nèi)外廣為重視,其在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用日益廣泛,特別在免疫分析方面更顯示優(yōu)越性〔1〕。本文探討 ELISA與TRFIA檢測HBV-M的差異并對(duì)比分析其臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2007年 2月至2009年 12月本院住院或門診疑為乙肝的患者,共 216例,其中男 148例,女 68例,年齡 18～58〔平均(30.1±12.1)〕歲。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器 上海新波生物技術(shù)有限公司 HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb和 HBcAb定量檢測試劑盒;上海榮盛有限公司 ELISA試劑盒。Anytest 2000型時(shí)間分辨熒光免疫分析儀,ELx-800酶標(biāo)儀。

1.2.2 檢測方法 空腹抽取 5 ml靜脈血,當(dāng)日分離血清,分別進(jìn)行定性和定量檢測。TRFIA法測定前用試劑盒內(nèi)配套乙型肝炎線性參比品制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,并由Anytest 2003中文軟件得出其各標(biāo)準(zhǔn)曲線皆符合工作要求;ELISA法設(shè)立陰陽性對(duì)照。然后,應(yīng)用 TRFIA和 ELISA法分別對(duì) 216例樣本進(jìn)行HBV五項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志物定量與定性檢測,其操作和結(jié)果判讀均嚴(yán)格按照說明書和作業(yè)指導(dǎo)書的規(guī)定進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定 ELISA法:HBsAg、HBsAb、HBeAg均為樣本OD值/陰性對(duì)照,平均 OD值≥2.1判斷為陽性,否則為陰性。HBeAb為冠狀病毒(COV)=(陰性對(duì)照平均OD值 +陽性對(duì)照平均 OD值)/2,樣本 OD值≥COV為陽性,＜COV為陰性。HBcAb為 1∶30稀釋血清,COV=陽性對(duì)照平均 OD值 ×0.5,標(biāo)本≥COV為陰性,＜COV為陽性。TRFIA定量 HBsAg正常值0～0.5 ng/ml,HBeAg正常值 0～0.03 NCU/ml,HBeAb正常值0～1.5 NCU/ml,HBcAb正常值 0～0.1 NCU/ml,超過正常值視為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行 χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

TRFIA法的HBeAb檢測結(jié)果與ELISA法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而其他單個(gè) HBV-M檢測項(xiàng)目比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表 1、表 2。

表1 TRFIA法和 ELISA法檢測組合模式結(jié)果的比較(n)

表2 TRFIA法和 ELISA法檢測組合模式結(jié)果的比較(n)

3 討 論

乙肝是一種全球廣泛流行的傳染病,以 HBV感染數(shù)和HBsAg攜帶率估算,全世界HBsAg攜帶者有3.5億人,其中亞、非、拉地區(qū)有 2.8億,而中國根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查,人群發(fā)生率較高,表面抗原攜帶率約為 15%〔2〕,占全世界 HBsAg攜帶者的1/3,占亞、非地區(qū)的 1/2。因此,篩查正常人群,對(duì)健康人群進(jìn)行計(jì)劃免疫,需要一種快速、準(zhǔn)確、靈敏、簡便的檢測方法,過篩無償獻(xiàn)血人員、從業(yè)人員及婚檢,并且臨床上用于病程進(jìn)展的評(píng)估及療效評(píng)價(jià)等。傳統(tǒng)的 ELISA方法對(duì)乙肝“兩對(duì)半”血清標(biāo)志物定性測定,只能判斷其陰陽性,無法得知其真正的濃度,而HBV-M定量檢測能較為準(zhǔn)確地反映其血清中的含量,可以間接反映體內(nèi)HBV復(fù)制活躍程度,對(duì)臨床藥物療效評(píng)價(jià)具有重要意義。“兩對(duì)半”定量檢測結(jié)果的有效性在檢測的過程中直接進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)量化質(zhì)控,分高中低及三個(gè)定值質(zhì)控品,“兩對(duì)半”定性檢測的室內(nèi)質(zhì)控;ELISA只能間接進(jìn)行質(zhì)控;分陰陽性質(zhì)控品;免疫膠體金檢測則不能進(jìn)行嚴(yán)格的室內(nèi)質(zhì)控,從而保證檢測結(jié)果的有效性和溯源性。

TRFIA技術(shù)是一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)〔3〕,其靈敏度高達(dá)10～18,線性范圍寬(10～18 mol/L),高穩(wěn)定性(＜±1%)。TRFIA是一種特殊的熒光分析方法,以鑭系元素為標(biāo)記物,又稱“解離-鑭系熒光免疫分析”。在傳統(tǒng)的異硫氰酸熒光素標(biāo)記的熒光免疫分析中,其激發(fā)光波長和熒光光譜的 Stokes移位較小,僅 28 nm,由于激發(fā)光譜和發(fā)射光譜常有部分重疊,在測量時(shí)不可避免產(chǎn)生干擾。而用鑭系元素標(biāo)記抗原抗體的熒光免疫分析則利用了波長和時(shí)間兩種分辨技術(shù),因稀土離子本身激發(fā)光譜寬(300～500 nm)、熒光發(fā)射光譜窄(甚至不足 10nm),通過時(shí)間延遲,去除非特異熒光干擾,在固定時(shí)間檢測特異熒光,解決了自然背景干擾問題,明顯提高檢測靈敏度,并通過激發(fā)光與發(fā)射光之間較大的Stokes移位,很容易對(duì)激發(fā)光和發(fā)射光進(jìn)行波長分辨,明顯排除了非特異熒光的干擾,提高了光譜的分辨率,使特異性明顯增強(qiáng)。ELISA法是目前檢驗(yàn)科常用的免疫學(xué)檢測方法之一,雖操作簡單,無須特殊設(shè)備,但測定中影響因素較多,常可見到一些假陽性或假陰性結(jié)果。

對(duì)臨床來說,HBsAg、HBsAb和 HBeAb的定量更為重要。隨著儀器和試劑的國產(chǎn)化,檢驗(yàn)費(fèi)用的降低,TRFIA因其突出的高敏感性、特異性,無放射污染等特點(diǎn),是取代放免的方法之一〔4〕,在乙肝“兩對(duì)半”定量檢測中有廣泛的應(yīng)用前景。本文發(fā)現(xiàn) TRFIA法的 HBeAb檢測結(jié)果與ELISA法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而其他單個(gè)HBV-M檢測項(xiàng)目比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外,TRFIA法和 ELISA法兩種檢測方法在 HBsAg、HBe-Ab、HBcAb三種血清學(xué)標(biāo)志物中,HBsAg、HBcAb兩種血清學(xué)標(biāo)志物組合模式陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TRFIA檢測HBV-M比 ELISA法敏感,可作為 HBV-M定量的一種常規(guī)方法,能為臨床檢測診斷與療效監(jiān)測、預(yù)后判斷和科學(xué)試驗(yàn)以及乙型肝炎疫苗免疫力的評(píng)價(jià)和高危人群預(yù)防提供及時(shí)準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)信息。

1 郭淑英,潘利華,曲曉春,等 .固相時(shí)間分辨熒光免疫分析螯合劑(I)中間體 1-4,4'-二溴-6,6'-二甲基-2,2'-聯(lián)吡啶的合成〔J〕.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2006;16(3):264-6.

2 陳慧英,張錦鋒,岑小鵬,等 .ELISA檢測乙型肝炎 HBsAg室內(nèi)質(zhì)控血清的試劑和使用〔J〕.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2000;15(4):203-5.

3 黃憲章,石 文,莊俊華,等 .TRFIA與 ELISA法檢測乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物結(jié)果的比較〔J〕.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008;23(1):59-60.

4 雷秀霞,陳小輝,徐邦牢,等 .TRFIA、MEIA、ELISA法三種方法檢測HBV-M結(jié)果分析〔J〕.中國醫(yī)師雜志,2004;6(9):1252-3.