p53、c-erbB-2、nm23在胃癌組織和轉移淋巴結中的表達

劉春忻 (齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

已有研究表明，在腫瘤的發生、浸潤和轉移的連續過程中涉及到多種癌基因。目前研究人員非常重視胃癌浸潤和轉移的相關蛋白和基因的調控研究〔1〕。研究顯示，胃癌的發生是多基因、多因素變異所致。本文檢測胃癌的腫瘤組織和轉移淋巴結中p53、c-erbB-2、nm23蛋白的表達，探討三者在胃癌轉移和浸潤中發揮的作用，以及是否具有協同作用。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 臨床對象 選擇2002年1月至2009年6月在我院住院診斷并手術切除的胃癌45例，其中男34例，女11例，年齡35～89〔平均(60.3±24.5)〕歲;早期15例，中期13例，晚期17例，所有患者均為浸潤性胃癌，按世界衛生組織制定的標準進行組織分型，根據腫瘤細胞分化程度分為低分化組(黏液腺癌6例，印戒細胞癌5例、低分化腺癌10例)和高分化組(乳頭狀腺癌8例，管狀腺癌16例);均伴有淋巴結轉移。35例非胃癌患者，慢性胃炎伴重度不典型增生26例，胃息肉9例。所有患者包括胃癌組織、轉移的淋巴結以及非癌癥胃黏膜標本均常規經4%甲醛固定、包埋，5μm厚切片待用。

1.1.2 試劑和儀器 鼠抗人p53單克隆抗體、鼠抗人c-erbB-2單克隆抗體(Santa Cruz產品);鼠抗人nm23單克隆抗體，批號:20101202(武漢博士德科技有限公司產品)。二氨基聯苯胺(DAB)酶底物顯色試劑盒，批號:20101201(武漢博士德科技有限公司產品)。恒溫水浴箱(上海方瑞儀器廠)，實驗用醫用微波爐(上海華舟壓敏膠制品有限公司)等。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 采用免疫組化 (SABC)法，乙二胺四乙酸(EDTA)修復液抗原修復組織切片，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗。然后在標本上滴加正常山羊血清封閉液，室溫20 min。滴加Ⅰ抗 (p53、c-erbB-2、nm23)，4℃過夜。PBS沖洗。滴加生物素化二抗 (羊抗兔ⅠgG)。PBS沖洗。滴加試劑SABC，PBS沖洗，DAB顯色，蒸餾水洗。蘇木素復染、鹽酸酒精分化。梯度酒精脫水、二甲苯透明、滴樹膠封片，光學顯微鏡檢查〔2〕。

1.2.2 結果判定 p53蛋白陽性表達產物定位于細胞核中，核內可見明顯的棕黃色顆粒。c-erbB-2表達產物定位于細胞質或細胞膜，表現為有明顯的棕黃色顆粒;nm23表達產物以細胞質棕黃色著色為陽性細胞顆粒。

1.2.3 圖像分析方法 采取p53、c-erbB-2、nm23光學顯微鏡圖像，通過Ⅰmage-Pro Plus7.0分析軟件圖像分析，每張切片均采用5個圖像測定血管組織陽性表達產物的積分光密度值(ⅠOD)，取平均值代表 p53、c-erbB-2、nm23 表達強度，ⅠOD 值越大表示陽性產物表達越強〔3〕。

1.3 統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件進行分析，計量資料均以±s表示，各組數據進行方差齊性檢驗。

2 結果

2.1 p53、c-erbB-2、nm23在癌癥組織和非癌癥組織胃黏膜的表達變化 p53、c-erbB-2、nm23均在胃癌組織內表達，且ⅠOD高表達，與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異(P＜0.05)。見表1，圖1。

圖1 胃癌組織病理結果

表1 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和非癌癥組織胃黏膜的表達變化(IOD，±s)

表1 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和非癌癥組織胃黏膜的表達變化(IOD，±s)

與非癌癥組比較:1)P＜0.05

組別 n p53 c-erbB-2 nm23非癌癥組35 12.12±3.43 9.34±1.64 21.63±5.65癌癥組 45 55.32±14.471) 25.74±3.751) 59.37±12.481)

2.2 癌組織與轉移淋巴結組織p53、c-erbB-2、nm23的表達變化 患者轉移淋巴結中p53、c-erbB-2蛋白ⅠOD呈高表達，與原位癌組織ⅠOD比較有顯著差異，有統計學意義(P＜0.05)。轉移淋巴結中nm23ⅠOD呈低表達，與原位癌組織ⅠOD比較有顯著差異，有統計學意義(P＜0.05)。見表2，圖2。

表2 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和轉移淋巴結的表達(IOD，±s，n=45)

表2 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和轉移淋巴結的表達(IOD，±s，n=45)

與癌癥組織比較:1)P＜0.05

組別p53 c-erbB-2 nm23癌癥組織55.32±14.47 25.74±3.75 59.37±112.48轉移淋巴結 95.47±23.741) 63.37±14.75 32.64±10.431)

圖2 p53、c-erbB-2、nm23在胃癌組織與轉移淋巴組織的表達(×460)

3 討論

惡性腫瘤最基本的生物學特性通常是腫瘤細胞具備轉移和侵襲的能力，轉移和侵襲是惡性腫瘤威脅患者生命的主要原因。因此，探索腫瘤轉移和侵襲的發生機制及其活動規律，對惡性腫瘤的預后具有明顯的指導意義。腫瘤轉移(tumor metastasis)是指腫瘤細胞從其原發部位侵入體腔、血管或淋巴管，甚至靶器官或靶組織。腫瘤侵襲(tumor invasion)是指腫瘤細胞從原發部位沿組織間隙向外周組織侵襲的過程，其確定標準是腫瘤細胞是否突破基底膜。腫瘤轉移和侵襲是既不同又有聯系的兩個階段。

胃癌的分子生物學表明，在胃癌的發生、發展過程中，一些癌基因、抑癌基因會發生缺失和突變。p53基因位于17號染色體上，蛋白產物分子量為53 kD。野生型p53具有調節細胞凋亡及增殖的雙重作用，能維持細胞的正常生長，但不易檢測，在細胞內保存期非常短。p53基因突變、缺失導致表達異常稱為突變型p53，保存時間相對較長〔4〕。多種腫瘤中p53均見過多表達，說明p53基因出現突變。本研究發現胃癌組織中p53蛋白表達的ⅠOD與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異，提示胃癌患者的p53蛋白是高表達的。

c-erbB-2基因(又稱HER2/neu)一般定位于人17號染色體，糖蛋白產物為185 kD，即c-erbB-2蛋白(ERBB2)，c-erbB-2屬于受體酪氨酸激酶(RTK)Ⅰ家族，在正常條件下，c-erbB-2通過與其他RTKⅠ受體形成異二聚體激活，參與細胞調控，涉及到細胞凋亡、增殖、遷移。腫瘤組織中，c-erbB-2過表達，促進RTK調控網絡失控，增加了腫瘤轉化活性〔5〕。本研究顯示胃癌組織中c-erbB-2蛋白表達的ⅠOD與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異，提示胃癌組織中c-erbB-2蛋白高表達。

人類nm23基因有兩個亞型，即nm23-H1和nm23-H2，定位于17號染色體。nm23基因是目前分離鑒定的一種腫瘤轉移抑制基因，可定位于細胞質和質膜。在多種生物學過程均有此酶參與，包括細胞內和細胞間信號傳遞等。研究顯示nm23蛋白在胃癌中與腫瘤的浸潤有關，血管內癌栓的腫瘤組織有較強的免疫反應也支持這一觀點〔6〕。本研究顯示胃癌組織中nm23蛋白表達的ⅠOD與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異，提示胃癌組織中nm23蛋白水平高表達。

研究發現，患者轉移淋巴結中p53、c-erbB-2蛋白呈高表達，與原位癌組織比較有顯著差異。可見c-erbB-2和p53在胃癌轉移過程中表達增加。轉移的淋巴結表達增強可能由于p53的突變失去了抑癌效果，損傷的DNA得不到修復，有利于其表達。通常p53突變及表達發生于早期胃癌，而c-erbB-2則發生于晚期胃癌。c-erbB-2蛋白在轉移的淋巴結也呈高表達，提示c-erbB-2與胃癌轉移關系更為密切，對胃癌的預后和鑒別診斷的評估有一定價值。nm23基因的突變和缺失與多種腫瘤的轉移有關〔7〕。本研究顯示轉移淋巴結中nm23呈低表達，與原位癌組織比較有顯著差異，反映出nm23基因在胃癌轉移方面起重要作用。可能在轉移的淋巴結中nm23中的核苷二磷酸激酶能夠與G蛋白作用，通過細胞信號轉導，調節細胞增殖和分化。如果nm23出現缺失，通過細胞去分化，可發生淋巴結轉移。可見腫瘤的淋巴結轉移起到一定的抑制作用。

總之，p53、c-erbB-2、nm23在胃癌組織和轉移淋巴結中的檢測對胃癌鑒別診斷和預后具有一定臨床意義。通過幾種基因檢測與CT和超聲內鏡相結合，有希望提高胃癌臨床分期的準確性，為合理選擇治療方案提供依據。

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2 賀 巖，張 磊，葉 菲，等.胃癌組織中p53基因突變和p53蛋白表達〔J〕.中國比較醫學雜志，2006;16(12):740-3.

3 賈明昭，夏 青，陳志偉.四物湯配方顆粒對骨髓抑制小鼠性激素及其受體影響的實驗研究〔J〕.天津醫藥，2009;37(7):578-80.

4 黃 偉，劉惠敏.胃癌P53，P-糖蛋白的表達意義與腫瘤預后關系〔J〕.實用診斷與治療雜志，2005;19(4):240-1.

5 陳永勝，關 麗，姚憲章，等.胃癌p53，c-erbB-2，p21，nm23基因表達的分布特點及其臨床意義〔J〕.中國實驗診斷學，2005;9(5):718-21.

6 卓麗娟，高美欽.C-erbB-2在胃癌中的表達及其與臨床病理特征和預后的關系〔J〕.山西醫科大學學報，2007;38(11):1021-3.

7 趙 茜，區穗芳，謝秀琴.p53及nm23在胃癌中的表達及其與淋巴結轉移的關系〔J〕.中國熱帶醫學，2007;7(5):689-90.