阿司匹林對大鼠胃潰瘍愈合的影響和機制

李成軍 馬丹丹 祝友朋 王國忠 (齊齊哈爾醫學院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

阿司匹林具有解熱、鎮痛、抗癌、抗風濕作用〔1〕、還能防治心腦血管疾病〔2，3〕，是老年人常用的藥物。但是，阿司匹林有損傷胃腸道黏膜的副作用〔4〕，10% ～25%長期服用阿司匹林患者可發生消化性胃潰瘍〔5〕，老年人消化性潰瘍的發病有逐年增高的趨勢〔6〕。阿司匹林通過抑制環加氧酶導致前列腺素生成減少引起消化性潰瘍的研究已比較清楚，最近報道生長因子在潰瘍的修復中起重要作用〔7〕。但是，阿司匹林對胃黏膜生長因子的影響與潰瘍愈合的關系尚未進行深入研究。本研究探討了阿司匹林對表皮生長因子(EGF)和血管內皮生長因子(VEGF)表達的影響與胃黏膜血流的關系以及對潰瘍愈合的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 選用雄性清潔級Wistar大鼠，體重180～210 g，由哈爾濱醫科大學第二附屬醫院實驗動物中心提供。Motic Med 6.0數碼醫學圖像分析儀、組織血流量檢測儀和光學顯微鏡都為日本產品，LRH-250-A型生化培養箱為中國產品。阿司匹林為美國Alfa Aesar公司產品，EGF和VEGF一抗為博奧森生物技術有限公司產品，它們的酶標二抗以及DAB顯色試劑盒都是康為世紀生物科技有限公司產品。

1.2 方法

1.2.1 乙酸胃潰瘍模型復制與分組 乙醚麻醉大鼠，腹部手術將胃拉出腹腔，將內徑6 mm的塑料管緊貼于胃體與幽門交界處血管少的部位，注入100%(V/V)的乙酸75μl，25 s后移除乙酸，縫合腹壁〔8〕。模型復制后第8天隨機分為模型組:在8～15 d每日只禁食5 h，不做任何處理;鹽水組:在8～15 d每日禁食4 h后，用灌胃法給每只大鼠生理鹽水2 ml，然后再禁食1 h;阿司匹林組:在8～15 d每日禁食4 h后，用灌胃法給阿司匹林50 mg/kg體重，然后再禁食1 h。在第16天收集標本進行各項指標檢測。

1.2.2 潰瘍面積的檢測 按公式1/4(潰瘍長徑×潰瘍寬徑)×π計算，π取值為3.14。

1.2.3 黏膜下組織微血管數的檢測 在光學顯微鏡下放大200倍，計數HE染色切片肉芽組織中已形成血管腔結構的毛細血管作為微血管數，每組隨機取4個標本做切片，每張切片隨機取2個視野，結果表示為個/高倍視野(個/HP)。

1.2.4 EGF和VEGF的檢測 用免疫組織化學Elivison二步法檢測。EGF一抗1∶100稀釋，VEGF一抗1∶150稀釋，二抗都是1∶150稀釋，用DAB顯色試劑盒顯色。然后每組隨機取4張

切片，每張切片隨機取2個視野，用數碼醫學圖像分析儀檢測其積分光密度。

1.2.5 胃黏膜血流(GMBF)的檢測 采用氫氣清除法檢測潰瘍邊緣血流，以正常大鼠相應部位GMBF作對照，以百分比變化表示(%)〔9〕。

1.3 統計學分析 用SPSS 16.0統計軟件進行分析，所得數據用±s表示，組間差異用單因素方差分析中的最小顯著差法(LSD)進行分析。

2 結果

2.1 各組潰瘍面積 阿司匹林組潰湯面積為(11.88±2.56)mm2，明顯高于模型組和鹽水組〔(8.37±3.03)mm2，(9.14±2.48)mm2，P ＜0.05〕。見圖1。

2.2 各組EGF和VEGF表達的差異 阿司匹林組潰瘍邊緣黏膜組織EGF和VEGF的積分光密度較模型組及鹽水組明顯減低(P＜0.01)。見表1，圖2。

2.3 各組肉芽組織微血管數和GMBF的差異 阿司匹林組微血管數和GMBF較其他組減少(P＜0.01)，見表2。

圖1 各組潰瘍部位病理學觀察(HE，×100)

表1 各組EGF和VEGF的積分光密度的差異(±s，n=8)

表1 各組EGF和VEGF的積分光密度的差異(±s，n=8)

與阿司匹林組比較:1)P＜0.01，下表同

組別EGF VEGF模型組 13.99±4.611) 28.43±6.451)鹽水組 16.28±5.041) 32.53±4.821)阿司匹林組7.41±3.84 19.45±5.27

圖2 各組EGF和VEGF表達的差異(DAB，×400)

表2 各組微血管數和GMBF的差異(±s，n=8)

表2 各組微血管數和GMBF的差異(±s，n=8)

組別 微血管數GMBF模型組 14.63±3.851) 79.28±4.621)鹽水組 12.01±2.561) 83.29±5.191)阿司匹林組7.88±3.52 69.68±7.79

3 討論

胃潰瘍是由于黏膜侵襲因素和黏膜自身防御-修復因素之間失衡所致〔10〕。阿司匹林是胃黏膜的重要侵害因素。用100%的乙酸75μl復制的大鼠胃潰瘍，在第3天潰瘍面積約為27 mm2，然后潰瘍逐漸愈合，至第8天潰瘍面積約為17 mm2〔8〕。本研究表明潰瘍正在進行愈合，而阿司匹林組潰瘍邊緣黏膜結構紊亂，表明阿司匹林是胃黏膜的重要侵害因素而抑制潰瘍愈合。EGF和VEGF在潰瘍的修復中具有重要作用，參與黏膜細胞和血管的再生〔11，12〕。本結果表明阿司匹林可能通過抑制EGF和VEGF的表達而抑制潰瘍愈合。GMBF在潰瘍的修復中起重要作用〔13〕，可為黏膜提供氧和營養物質，以促進胃黏膜細胞再生。表明阿司匹林抑制EGF和VEGF導致微血管生成減少和黏膜血流降低，抑制了潰瘍的愈合。總之，阿司匹林通過抑制EGF和VEGF的表達導致微血管生成減少和黏膜血流降低，抑制了潰瘍的愈合，因此，在應用阿司匹林的同時，應重視增加GMBF藥物的應用，以防止阿司匹林對胃黏膜的損害。

1 鄒凱華，張 華.阿司匹林的研究進展〔J〕.上海醫藥，2009;30(2):64-6.

2 武天明，趙宗禹，邢玉柱.阿司匹林的正確應用〔J〕.中國老年學雜志，2006;26(7):997-8.

3 廖仁昊，陳立英，梁容仙，等.阿司匹林聯合腦缺血預處理對大鼠腦缺血再灌注后炎性反應的影響〔J〕.中國老年學雜志，2010;30(13):1846-8.

4 Ji KY，Hu FL.Ⅰnteraction or relationship between Helicobacter pylori and non-steroidal anti-inflammatory drugs in upper gastrointestinal diseases〔J〕.World J Gastroenterol，2006;12(24):3789-92.

5 顧同進，曹憶嶸.低劑量阿司匹林對黏膜損傷的防治〔J〕.老年醫學與保健，2007;13(1):58-60.

6 于惠珍.老年消化性潰瘍33例臨床分析〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(11):1433-4.

7 Tarnawski AS.Cellular and molecular mechanisms of gastrointestinal ulcer healing〔J〕.Dig Dis Sci，2005;50(1):24-33.

8 Brzozowski T，Kwiecień S，Konturek PC，et al.Comparison of nitric oxidereleasing NSAⅠD and vitamin Cwith classic NSAⅠD in healing of chronic gastric ulcers;involvement of reactive oxygen species〔J〕.Med Sci Monit，2001;7(4):592-9.

9 Konturek PC，Brzozowski T，Pajdo R，et al.Ghrelin-a new gastroprotective factor in gastric mucosa〔J〕.JPhysiol Pharmacol，2004;55(2):325-36.

10 李 巖.消化性潰瘍的藥物治療進展〔J〕.中國實用內科雜志，2007;27(1):24-5.

11 Luo JC，Chi CW，Lin HY，et al.Dexamethasone inhibits epidermal growth factor-stimulated gastric epithelial cell proliferation〔J〕.J Pharmacol Exp Ther，2007;320(2):687-94.

12 Wallace JL，Dicay M，McKnight W，et al.Platelets accelerate gastric ulcer healing through presentation of vascular endothelial growth factor〔J〕.Br J Pharmacol，2006;148(3):274-8.

13 Ceranowicz P，Warzecha Z，Dembinski A，et al.Treatment with ghrelin accelerates the healing of acetic acid-induced gastric and duodenal ulcers in rats〔J〕.J Physiol Pharmacol，2009;60(1):87-98.