阿司匹林對大鼠胃潰瘍愈合的影響及其機制

王國忠 姜行康 孫佳玉 金 莉 李成軍 李 波 王 睿

(齊齊哈爾醫(yī)學院病理生理教研室，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

阿司匹林具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗風濕、抗腫瘤的作用，還能防治白內(nèi)障、心腦血管疾病、阿爾茨海默病、糖尿病等〔1，2〕，是老年人常用藥物之一。老年人消化性潰瘍的發(fā)病有逐年增高的趨勢，以胃潰瘍多見〔3〕，是老年人10種常見病之一，70歲以上老年人的消化性潰瘍死亡率高達12%〔4〕。阿司匹林抑制環(huán)加氧酶(COX)-1導致前列腺素(PGE)生成減少而損傷消化道黏膜〔5，6〕。但是，對阿司匹林是否還抑制COX-2以及阿司匹林是否增加胃酸分泌而損傷胃黏膜及其機制還不清楚。該項研究探討了阿司匹林對COX和胃酸分泌的影響以及對潰瘍愈合的影響及機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 實驗采用雄性清潔級Wistar大鼠，體重200～220 g，購于哈爾濱醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院實驗動物中心，生產(chǎn)許可證號為SCXK2006-010。

1.1.2 儀器 日本產(chǎn)奧林巴斯光學顯微鏡、Motic Med 6.0數(shù)碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)。RM2015型 Leica切片機為德國產(chǎn)品，PHS-3B型pH計為中國上海精科儀器有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 試劑 阿司匹林為美國Alfa Aesar公司產(chǎn)品。COX-1、COX-2和胃泌素一抗為北京博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，它們的山羊抗兔酶標二抗以及DAB顯色試劑盒都是北京康為世紀生物科技有限公司產(chǎn)品。PGE2檢測試劑盒為美國R＆D公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 潰瘍模型復制及分組 用乙醚麻醉大鼠，仰臥固定在手術(shù)臺上，酒精消毒腹部，劍突下腹正中切口1.5 cm，開腹后拉出胃，將內(nèi)徑6 mm的塑料管緊貼于胃體與幽門交界處，向管內(nèi)注入100%(V/V)的乙酸75μl，25 s后移除乙酸，關(guān)閉腹腔，既復制出大鼠乙酸潰瘍模型，然后隨機分為模型組:在8～15 d每天禁食5 h;鹽水組:在8～15 d每天禁食4 h后給予生理鹽水，然后再禁食1 h;阿司匹林組:在8～15 d每天禁食4 h后用灌胃法給予阿司匹林50 mg/kg體重，然后再禁食1 h。在第16天處死各組大鼠，收集標本進行各項指標檢測。

1.2.2 潰瘍面積的檢測 按公式(1/2長徑×1/2寬徑)×π計算，π取值為3.14。

1.2.3 再生胃黏膜厚度和擴張腺體數(shù)的檢測 每組隨機取4個標本做切片，每張切片隨機取2個視野，檢測再生胃黏膜厚度和擴張腺體數(shù)。在光鏡下放大100倍，測量HE染色切片中潰瘍邊緣的再生黏膜厚度;光鏡下放大400倍，計數(shù)HE染色切片中再生黏膜內(nèi)呈囊狀擴張的腺體數(shù)，結(jié)果表示為個/高倍視野(個/HP)。

1.2.4 胃液pH的檢測 大鼠禁食24 h后用乙醚麻醉，上腹部正中切口，結(jié)扎幽門，4 h后結(jié)扎賁門，收集胃內(nèi)容于離心管內(nèi)，3 500 r/min離心10 min，測量上清液pH。

1.2.5 COX-1、COX-2、胃泌素的檢測 采用免疫組織化學Elivison二步法檢測。COX-1一抗按1∶150稀釋，COX-2一抗1∶1 000稀釋，Gas一抗 1∶1 000 稀釋，二抗是 1∶150 稀釋，用DAB顯色。然后每組隨機取4張切片，每張切片隨機取2個視野，用Motic Med 6.0數(shù)碼醫(yī)學圖像分析儀檢測COX-1、COX-2、胃泌素的積分光密度。

1.2.6 PGE2的檢測 按試劑盒說明書用酶聯(lián)免疫吸附測定法并參考文獻報道的方法〔7〕進行胃黏膜PGE2的測定。

2 結(jié)果

2.1 各組潰瘍部位組織學差異 見圖1。模型組、鹽水組和阿司匹林組潰瘍邊緣結(jié)構(gòu)紊亂。阿司匹林組腺體擴張較其他兩組明顯增加(P＜0.05)。

2.2 各組再生胃黏膜厚度、擴張腺體數(shù)和潰瘍面積的差異

見表1。阿司匹林組再生黏膜厚度較模型組和鹽水組明顯減輕(P＜0.05)，擴張腺體數(shù)較模型組和鹽水組明顯增加(P＜0.05)。

圖1 各組潰瘍部位組織學差異(HE，×100)

表1 各組再生胃黏膜厚度、擴張腺體數(shù)和潰瘍面積的差異(±s，n=9)

表1 各組再生胃黏膜厚度、擴張腺體數(shù)和潰瘍面積的差異(±s，n=9)

與阿司匹林組比較:1)P＜0.05

組別 再生黏膜厚度(μm)擴張腺體數(shù)(個/HP)潰瘍面積(mm2)模型對照組 344.2±42.21) 33.8±8.71) 8.6±3.01)鹽水對照組 338.9±52.61) 35.0±7.21) 9.2±2.51)阿司匹林組283.9±50.4 42.7±7.3 12.0±2.6

2.3 各組COX-1、COX-2、Gas的積分光密度差異 COX-1各組間的表達無差異，而阿司匹林組COX-2及Gas表達均較其他兩組明顯增高(P＜0.01)。見表2，圖2。

2.4 各組PGE2含量和pH的差異 見表3。阿司匹林組PGE2含量和pH較其他兩組明顯降低(P＜0.01)。見表3。

組別COX-1 COX-2 Gas

表2 各組COX-1、COX-2、Gas積分光密度差異(±s，n=9)

表2 各組COX-1、COX-2、Gas積分光密度差異(±s，n=9)

與阿司匹林組比較:1)P＜0.01

模型對照組 35.07±19.19 11.44±5.281) 33.84±7.631)鹽水對照組 49.79±21.50 16.08±6.981) 36.24±10.531)阿司匹林組45.24±22.36 26.28±9.84 49.29±9.56

圖2 各組COX-1、COX-2、Gas表達的差異(DAB，×400)

表3 各組PGE2含量和pH的差異(±s，n=9)

表3 各組PGE2含量和pH的差異(±s，n=9)

與阿司匹林組比較:1)P＜0.01

組別 PGE2(ng/g)pH模型對照組 153.92±30.481) 1.26±0.081)鹽水對照組 147.86±28.551) 1.33±0.061)阿司匹林組108.81±25.78 1.14±0.10

3 討論

大鼠乙酸潰瘍呈燒瓶狀，潰瘍組織學亦與人的潰瘍結(jié)構(gòu)相似。預實驗結(jié)果表明:潰瘍模型復制后第3天出現(xiàn)典型的潰瘍結(jié)構(gòu)，潰瘍面積約28 mm2，至潰瘍后第16天潰瘍面積約9 mm2，與文獻報道的基本一致〔8〕。從第8天起，每天給予阿司匹林50 mg/kg體重，至第16天，阿司匹林組的潰瘍面積高于模型組和鹽水組，表明阿司匹林有加重潰瘍的作用。再生黏膜厚度和擴張腺體數(shù)是評價潰瘍愈合質(zhì)量的關(guān)鍵指標，本文顯示潰瘍邊緣結(jié)構(gòu)紊亂，腺體擴張，以阿司匹林組明顯。且阿司匹林組潰瘍邊緣再生黏膜厚度低于模型組和鹽水組，擴張腺體數(shù)高于模型組和鹽水組，表明阿司匹林有惡化潰瘍的作用。

COX有COX-1、COX-2、COX-3三種。胃黏膜只表達組成型COX-1和誘導型COX-2。COX能夠催化花生四烯酸生成對胃黏膜有保護作用的PGE2，Gas由G細胞產(chǎn)生，作用于壁細胞Gas受體促進胃酸分泌。本文中COX-1在模型組、鹽水組和阿司匹林組表達無差異，其積分光密度無顯著差異，可能是因為COX-1是組成型的原因;阿司匹林組的COX-2和Gas表達高于其他兩組，其積分光密度亦高于其他兩組。COX-2在阿司匹林組高表達可能是由于阿司匹林引起胃黏膜炎癥反應造成的。

PGE2具有擴張血管、增加胃腸黏膜血流、增加黏液分泌及碳酸氫鈉分泌的作用，有助于上皮的修復和細胞的更新〔5〕。胃酸是胃黏膜強烈的攻擊因子。本文中阿司匹林組的PGE2含量低于模型組和鹽水組，阿司匹林組的pH也低于其他組。

文獻報道〔5，6〕阿司匹林有抑制 COX-1活性的作用，本結(jié)果表明阿司匹林還有增加COX-2表達的作用，COX-2表達應使PGE2增加，但阿司匹林組PGE2含量低于模型組和鹽水組，提示阿司匹林雖然增加COX-2的表達，但也有抑制COX-2活性的作用，從而使PGE2生成減少。阿司匹林組的Gas表達增加可能是由于PGE2減少引起的，由此可以推測:PGE2有調(diào)節(jié)Gas表達的作用。

1 房 靜.論阿司匹林功能的多樣性〔J〕.遼寧中醫(yī)藥大學學報，2009;11(11):231-3.

2 鄒凱華，張 華.阿司匹林的研究進展〔J〕.上海醫(yī)藥，2009;30(2):64-6.

3 范 敏，楊 超.淺談老年消化性潰瘍的臨床特點及病理改變〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(4):486-8.

4 于惠珍.老年消化性潰瘍33例臨床分析〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(11):1433-4.

5 張錫迎，鄧淑儀，陳麗霞.長期使用低劑量阿司匹林對老年人胃腸黏膜的影響〔J〕.醫(yī)藥導報，2005;24(7):606-7.

6 顧同進，曹憶嶸.低劑量阿司匹林對黏膜損傷的防治〔J〕.老年醫(yī)學與保健，2007;13(1):58-60.

7 Luo JC，Shin VY，Yang YH，et al.Tumor necrosis factor-alpha stimulates gastric epithelial cell proliferation〔J〕.Am JPhysiol Gastrointest Physiol，2005;288(1):G32-8.

8 Brzozowski T，Kwiecień S，Konturek PC，et al.Comparison of nitric oxidereleasing NSAⅠD and vitamin C with classic NSAⅠD in healing of chronic gastric ulcers;involvement of reactive oxygen species〔J〕.Med Sci Monit，2001;7(4):592-9.