人端粒酶RNA組分在宮頸脫落細胞中的表達及臨床意義

(中國醫科大學附屬第四醫院，沈陽110032)

盡管已知高危人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)感染是導致宮頸癌的主要危險因素，但只有少數的感染者最終發展成宮頸癌。最近有研究提出［1］，在宮頸內瘤樣病變(CIN)Ⅱ/Ⅲ級進展到宮頸癌的過程中，位于3q26位置的編碼人端粒酶的RNA組分(hTERC)基因被認為是腫瘤發生過程相關的基因。我們采用熒光原位雜交(FISH)方法，從基因水平檢測hTERC在正常宮頸、CIN和宮頸癌中的擴增情況，為臨床子宮頸癌的篩查、診斷、治療提供實驗依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2009年1月～2010年12月我院婦科門診、病房和體檢中心行子宮頸癌篩查的患者128例，年齡21～60(42±5.12)歲，均未接受任何治療。進行宮頸液基細胞學及組織病理學的檢測。按細胞學分組，未見上皮內瘤變(NILM)38例，未明確診斷意義的不典型鱗狀細胞(ASC-US)28例，不除外高度上皮內病變的不典型鱗狀細胞(ASC-H)12例，低度鱗狀上皮內病變(LSIL)15例，高度鱗狀上皮內病變(HSIL)41例和鱗狀細胞癌(SCC)3例;按組織學分組分為正常或慢性宮頸炎20例，CINⅠ級28例，CINⅡ級27例，CINⅢ級25例和SCC組28例。20例正常子宮頸建立閾值。

1.2 方法

1.2.1 細胞標本采集 采用新柏氏TCT液基細胞制片技術，用于細胞學診斷。陰道鏡下進行組織活檢或宮頸錐切和手術切除的子宮，標本固定后送病理科鏡檢，由其提供最終病理診斷結果。標本采集后，將含宮頸脫落細胞的TCT保存液(10ml)，離心、酶解、水浴將細胞滴于載玻片上制片，室溫放置過夜。

1.2.2 FISH操作 玻片洗脫，自然干燥，DAPI復染，加蓋玻片，暗處放置20min后進行顯微鏡下FISH信號觀察。在暗室使用OLYMPUSB×51型熒光顯微鏡，DAPI/FIFC/Texas Red三色濾光鏡激發觀察間期細胞熒光雜交信號，并用Video-Test公司提供的FISH分析軟件進行圖像分析。以20個正常宮頸FISH結果建立閾值，閾值=均數+3×標準差。本實驗閾值為5.81%。陽性判斷標準:計數信號完整的100個細胞，其中6個及以上細胞表現為hTERC拷貝數增加，即判定為hTERC基因擴增陽性。

1.2.3 統計學方法 用SPSS13.0軟件進行統計學分析，比較各級宮頸病變hTERC基因擴增，并計算宮頸脫落細胞hTERC基因檢測宮頸高度病變(CINⅡ/Ⅲ級)和宮頸癌的敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值。兩個樣本之間的差異用χ2檢驗和相關性分析，以P≤0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 細胞學分組結果 NILM、ASC-US、LSIL、ASCH、HSIL及SCC組中hTERC基因陽性表達率分別為18.42%、36.84%、26.67%、83.33%、85.36% 和100%，隨細胞學病變程度增加，hTERC基因擴增陽性率增加(P＜0.01)。其中，LSIL與HSIL組、LSIL與SCC組、HSIL與SCC組比較，hTERC基因擴增率差異有統計學意義(P＜0.01)。正常涂片、ASC-US與LSIL組兩兩比較，ASC-H與HSIL組比較，hTERC基因陽性率差異無統計學意義(P＞0.05)。

2.2 病理級別分組結果 正常對照、CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ及子宮頸癌組hTERC基因陽性率分別為5%、21.42%、51.85%、76%和92.86%，隨著子宮頸脫落細胞病變的進展，hTERC基因陽性表達率逐漸增高(P＜0.01)。hTERC基因擴增預測CINⅡ/CINⅢ級以上級別病變的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為73.75%、85.42%、89.39%和76.13%。

2.3 與HR-HPV相關性 HR-HPV陽性組中hTERC基因的表達率為69.56%(64/92)，HR-HPV陰性組為5.56%(2/36)，hTERC基因的表達和HRHPV感染密切相關(rs=0.794，P＜0.05)。

3 討論

國外陸續有研究證實，宮頸癌細胞系、宮頸癌組織和宮頸癌前病變組織中，均存在hTERC基因擴增，hTERC基因的異常拷貝數增加可能是宮頸癌形成的早期事件［2］。

本研究結果顯示，隨著宮頸病變的級別升高，hTERC陽性表達率逐漸升高，且CINⅢ及宮頸癌中hTERC陽性表達率顯著高于慢性宮頸炎、CINⅠ和CINⅡ，與其他國家學者報道一致［3，4］。提示 hTERC在宮頸癌的發生發展中可能起著重要作用，在一定程度上可反映宮頸病變的惡性程度，為臨床預測提供依據。在子宮頸癌及癌前病變中，HR-HPV感染后，其致癌基因E6、E7編碼的原癌蛋白可上調端粒酶活性，在HPV激活端粒酶的過程中，hTERC亞單位表達上調可能是端粒酶的激活的主要途徑。隨著宮頸病變程度的進展，HR-HPV的感染逐漸升高，hTERC基因的表達也隨之上升，兩者趨勢一致。從本研究中看到，HR-HPV陽性組中hTERC基因的表達率明顯高于陰性組，說明hTERC基因的表達和HR-HPV感染密切相關。

在臨床上，對CINI及以下病變的治療原則完全不同于CINlI及以上病變。后者需手術治療，而前者僅需定期隨訪或采取物理治療等姑息治療。在評估子宮頸病變的進展中，hTERC有望成為一項重要指標，對于子宮頸癌前病變的早期診斷和篩查具有重要的臨床價值［5］。通過本研究結果，hTERC基因的檢測在宮頸上皮內瘤變及宮頸癌的診斷及評估進展預后方面具有一定價值，可以作為宮頸癌的遺傳學診斷手段，并有望成為宮頸癌治療的新靶向［6，7］。

［1］Hopman AH，Theelen W，Hommelberg PP，et al.Genomic integration of oncogenic HPV and gain of the human telomerase gene TERC at 3q26 are strongly associated events in the progression ofuterine cervical dysplasia to invasive cancer［J］.J Pathol，2006，210(4):412-419.

［2］Ferenczy A，Franco E.Persistent human papillomavirus infection and cervical neoplasia［J］.Lancet Oncol，2002，3(1):11-16.

［3］Nakano K，Watney E，McDougall JK.Telomerase activity and expression of telomerase RNA component and telomerase catalytic subunit gene in cervical cancer［J］.Am J Patho，1998，153(3):857-864.

［4］Heselmeyer HK，Janz V，Castle PE，et al.Detection of genomic amplification of the human telomerase gene(TERC)in cytologic specimens as a genetic test for the diagnosis of cervicaldysplasia［J］.Am J Patho，2003，163(4):1405-1416.

［5］Heselmeyer-Haddad K，Sommerfeld K，White NM，et al.Genomic amplification of the human telomerase gene(TERC)in pap smears predicts the development of cervical cancer ［J］.Am J Patho，2005，166(4):1229-1238.

［6］Parkinson EK，Minty F.Anticancer therapy targeting telomeres and telomerase:current status［J］.BioDrugs，2007，21(6):375-385.

［7］Fleisig HB，Wong JM.Telomerase as a clinical target:current strategies and potential applications［J］.Exp Gerontol，2007，42(1-2):102-112.