細胞因子誘導的腫瘤殺傷細胞的臨床應用

(煤炭總醫院，北京100028)

細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)是一類異質細胞群，由上世紀80年代中期Schmidt-wolf從外周血單核細胞中誘導產生，同時表達CD3和CD56兩種膜蛋白分子，兼具T淋巴細胞強大的殺瘤活性和NK細胞的非MHC限制性，故又被稱為NK細胞樣T淋巴細胞。與以往報告的一些抗腫瘤效應細胞相比，CIK細胞殺瘤活性更強、殺瘤譜更廣。因此，以自體CIK細胞為主體的腫瘤過繼免疫治療已逐漸成為腫瘤生物治療中最活躍的應用與研究領域之一，是國內外關注的焦點。

1 自體CIK細胞的制備與臨床應用

目前，多采用改進Schmidt-wolf等所述方法，一次采集患者外周血50～100 ml，2周后制備出的CIK細胞群中CD+3細胞＞50%細胞＞30%，使CIK細胞成為一種高溶瘤活性免疫細胞。增殖的細胞總數能達到5×109～15×109以上，經細菌及真菌培養陰性時開始收集細胞。一般將細胞保存在含1%人血白蛋白的生理鹽水中，2 h內盡快輸注到患者體內。臨床上常采用連續3 d分批回輸，回輸途徑以靜脈為主，也有腔內注射、介入應用的報告。CIK細胞療效取決于其在體內的殺瘤活性，而細胞在體內發揮作用受許多因素的影響，其中一個重要因素就是免疫效應細胞能否到達靶器官，實現與腫瘤細胞的直接接觸。因此，了解免疫活性細胞在活體內的分布遷徙規律對于其發揮調節免疫、殺傷腫瘤作用來說非常重要。文獻報告［1，2］，CIK細胞在體外培養14～18 d時，細胞數量達高峰，此時細胞的數量也達最高值。CIK細胞經腹腔注射，腫瘤組織中CIK細胞量24 h達到最高(20.56%)，瘤旁注射則3 h即達到最高(25.75%)。以上結果提示，CIK細胞在體內分布的濃度規律與不同的輸注途徑有一定關系，一般以肺、肝、腫瘤部位為主。所以，臨床上針對不同解剖部位的腫瘤可以選擇不同的CIK細胞輸注途徑以最大限度的提高療效［1］。我院腫瘤外科已經在有腹腔轉移或懷疑轉移的患者中采用腹腔注射的途徑回輸CIK細胞，取得滿意療效，現正在研究回輸CIK細胞對惡性腹腔積液(腹膜表面惡性腫瘤)的治療，以期患者更好獲益。

目前，CIK細胞治療腫瘤在臨床實際應用中還有一些問題需要更好解決，譬如，晚期癌癥患者往往體質很差、合并貧血，對于反復采血，患者、醫師都有顧忌;采血后如何將紅細胞分離再回輸，臨床已有報道，但實際運用不多，這項技術還有待進一步改進;有文獻提出采用父系血液的CIK細胞的回輸方法也尚待進一步研究和探討;此外，能否進一步改進CIK細胞的培養方法、提高CIK細胞的活性和數量以滿足臨床應用的要求，也是目前面臨的問題和研究方向之一。

關于CIK細胞治療療程，文獻資料［3］提示，多療程治療后患者體內的細胞含量顯著高于單療程組，與此對應的多療程CIK治療較單療程治療患者的生存期明顯延長，并能顯著提高生活質量，對預防腫瘤復發有較好的作用。我們在治療中發現，對部分Ⅳ期患者，輸注自體CIK細胞后細胞數量達到7.5×1010～10×1010以上時，療效才更為明顯。我們一次采集患者外周血50～100 ml，培養CIK細胞總數能達到12×109～15×109以上，然后連續3 d回輸為1個療程，如此5個療程以上。

2 CIK治療的療效和適應證的選擇

CIK治療療效的觀察指標包括:瘤體變化、生存期、臨床癥狀、生存質量、體質量及免疫功能、不良反應等。腫瘤瘤體變化評價參照實體瘤療效標準，以患者治療前及治療后PETCT、CT或B超等影像學資料進行對照比較，以完全緩解(CR)、部分緩解(MR)、穩定(SD)以及進展(PD)進行療效評定，并觀察治療前后對肝、腎等重要臟器功能的影響。生存質量評估采用Karnofsky評分和檢測體質量改變、疼痛或睡眠狀況等方法。我院收治腫瘤患者治療后總體上Karnof-sky評分平均提高10～30分，提高率約為90%;平均體質量增加1～3 kg，提高率約為60%;疼痛和睡眠質量均有明顯改善。免疫功能情況的評估除常規測定CD3、CD4、CD8和CD56外，有研究單位用SZ-Ag-NoRs檢測儀觀察T淋巴細胞rDNA轉錄活性，以評估治療后免疫功能的改善，一般認為治療后免疫功能提高。但從循證醫學角度分析，我們認為最終有評價意義的指標還是生存期和生存質量。因此，對CIK治療效果的科學評價不單是看其近期療效，更要觀其遠期效果。實踐中發現，我院的自體CIK細胞免疫治療患者心、肝、腎等臟器功能均未發現不良影響，僅個別患者輸入CIK細胞后有一過性發熱反應，但24 h內即降至正常。從大量文獻上看，自體CIK細胞治療也是十分安全的。

現已報告的臨床資料幾乎均是將CIK細胞應用于進展期癌癥患者，更多是晚期患者。但CIK細胞治療的最佳適應證目前還無定論。多數學者認為，體內瘤負荷越少，臨床效果越好，這與CIK細胞抗腫瘤機制及輸注的細胞數量和活性均有關。因此，對進展期癌癥患者考慮CIK細胞治療時，要首先考慮減少患者體內的瘤負荷，包括運用手術、放療、化療、射頻治療、氬氦刀治療等手段。要將傳統的腫瘤治療手段同CIK細胞治療有機結合起來，在最大限度減少瘤體負荷的基礎上既要更好的保護患者的自身免疫系統功能又要殺滅微小腫瘤病灶，提高遠期治療效果。另一方面，正如其他學者提出的一樣，將CIK細胞運用到早期腫瘤患者或根治手術后患者，利用其免疫重建功能和抗腫瘤機制，發揮預防腫瘤復發的作用。我院對Ⅱ期和Ⅲ期已經手術根治的患者，尤其伴有免疫功能差、淋巴結轉移、脈管有癌栓等復發高危因素者，提倡CIK細胞治療，以提高根治率，但效果還需長期隨訪。如何更好的選擇CIK細胞適應證，積極探索出一套新的、更為有效的腫瘤治療模式，是我們腫瘤治療專業醫師的一項任務。

3 CIK細胞治療展望

3.1 提高CIK的腫瘤殺傷效果 樹突狀細胞(DC)是一種專職抗原提呈細胞，其前體細胞來源于骨髓，除此之外還可存在于人的臍血和外周血中，是由細胞在體外經GM-CSF和TNF-α誘導發育而來。成熟DC的抗原提呈能力是巨噬細胞和B細胞的10～1 000倍，是惟一能刺激初始型T細胞增殖并建立初級免疫應答的專職抗原提呈細胞。有研究表明，與DC細胞聯合培養和非聯合培養的細胞的殺傷率分別為100%和27%。國內外學者針對不同的靶細胞株或動物模型以相應的細胞凍融物作為特異性抗原沖擊DC后與CIK共培養，結果均發現經特異性抗原致敏的DC能不同程度的增強CIK細胞的細胞毒作用［4］。

腫瘤細胞的多藥耐藥性(MDR)被視為是影響化療療效的主要障礙之一。腫瘤細胞MDR基因表達的耐藥蛋白P糖蛋白(P-gp)往往會隨化療用藥進程過度表達，使化療藥物不能進入細胞核，導致化療失敗。研究發現，腫瘤細胞的藥物耐受株MCF7adr對CIK細胞的敏感性明顯高于其親代藥物敏感株MCF7［5］。CIK細胞可使MCF7adr上過度表達的P-gp明顯下降，尤其是使MCF7adr核膜上P-gp表達降低，從而使化療藥物在MDR腫瘤細胞內積累量明顯增加。免疫效應細胞聯合低于IC50劑量的化療藥物，對MDR腫瘤細胞的殺傷活性明顯高于單純用同等劑量化療藥物或單純用相同效靶比的CIK細胞的殺傷活性。

3.2 提高CIK治療的靶向性 提高CIK治療的靶向性不僅需要提高CIK細胞的殺傷腫瘤效果，更需要解決CIK細胞治療存在靶向性差的問題，如何將具有較強殺瘤活性的CIK細胞募集到原發或轉移的惡性腫瘤組織周圍，使之與瘤體空間最大限度的接近，從而達到更好的抗腫瘤作用，已成為目前CIK細胞治療中的一個關鍵問題。在目前抗腫瘤治療研究中，雙功能抗體(又稱雙特異性抗體BsAb)已經展現出其巨大的潛在價值［6］。利用雙功能抗體的橋接作用將CIK細胞募集到腫瘤組織周圍為解決CIK細胞治療靶向性問題提供了良好的思路。

體外細胞學實驗初步驗證了抗表皮生長因子受體(EGFR)/抗CD3雙功能抗體具有促進CIK細胞與瘤細胞結合及增強殺傷作用的能力。EGFR是原癌基因C-erbB-1(HER-1)的表達產物，廣泛分布于各組織。EGFR介導的信號轉導途徑在腫瘤細胞增殖、損傷修復、侵襲及新生血管形成等方面發揮重要作用。研究發現，在許多實體腫瘤中存在EGFR高表達或異常表達。EGFR/CD3BsAb介導的CIK細胞對EGFR表達陽性的胃癌細胞MKN45及SGC7901的結合和殺傷能力均顯著高于單純CIK細胞和EGFR、CD3單抗分別或共同介導的CIK細胞［7］。這一結果說明，至少在體外條件下EGFR/CD3BsAb確實起到橋接CIK細胞與腫瘤細胞的作用，為效應細胞的殺傷提供了有力幫助。Kornacker等［8］進行了Her2/CD3雙功能抗體引導CIK細胞治療乳腺癌和卵巢癌的臨床研究，結果也提示在雙特異性抗體的引導下CIK細胞的殺瘤作用可提高數倍。Flieger等［9］進行了Ep-CAM/CD3雙功能抗體引導CIK細胞殺傷結腸癌細胞HT29的實驗研究，證實在EpCAM/CD3引導下CIK細胞具有良好的殺瘤活性。上述研究結果均提示，該治療策略可能具有重要的臨床應用前景。

腫瘤的過繼免疫治療已逐漸成為腫瘤生物治療中最活躍的研究領域之一。在繼淋巴因子激活的殺傷細胞、腫瘤浸潤性淋巴細胞和CD3McAb激活的殺傷細胞之后，細胞因子誘導的殺傷細胞以其更高的增殖活性和更強的細胞毒活性越來越多的被人們所研究利用。CIK細胞可以殺傷多種自體或異體腫瘤細胞，殺瘤譜廣、增殖速度快、細胞毒性強，應用于臨床治療進展期癌癥患者可很大程度上改善其生活質量和延長其帶瘤生存期。可以預見，隨著CIK細胞治療技術的不斷改進和完善，它將在人類攻克腫瘤的道路上發揮舉足輕重的作用。

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