B細胞非霍奇金淋巴瘤患者FHIT與Bcl-2關系的初步探討

楊 敏，陳 琦

(遵義醫學院附屬醫院，貴州遵義563003)

脆性組氨酸三聯體(FHIT)是一種抑癌基因，主要參與細胞生長與生長抑制信號的調控，在體內可誘導細胞凋亡和抑制腫瘤細胞的增殖。Bcl-2基因在淋巴瘤的發生發展中起重要作用［1］。本研究采用免疫組化EnVision法對B細胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)組織中FHIT、Bcl-2蛋白進行檢測，以探討二者異常與B細胞NHL發病的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 NHL組為52例淋巴瘤標本，來自遵義醫學院第一附屬醫院病理科2003～2008年病理存檔石蠟包埋標本，其中男32例、女20例，年齡8～76歲、平均40歲。標本經甲醛液固定，常規石蠟包埋，4 μm切片，并以HE染色、免疫組化確定診斷。淋巴結內病變34例，淋巴結外病變18例。經形態及免疫組化證實為B細胞型NHL，病理分類和惡性度分級參照WHO(2001年)標準，其中低度惡性組12例為惰性淋巴瘤，中—高度惡性組40例為侵襲性淋巴瘤。另取10例組織細胞性壞死性淋巴結炎標本作對照。兩組在年齡、性別上差異無統計學意義。

1.2 檢測方法 試劑盒均購自Gene Tech(上海)有限公司，操作按說明書進行。以PBS代替一抗作陰性對照，試劑盒中已知陽性片作為陽性對照。主要步驟包括:制備的切片常規脫蠟水化;置0.3%過氧化氫中，PBS洗3次×5min;將切片浸泡于抗原修復液(FHIT蛋白用Tris-EDTA緩沖液pH 9.0微波煮沸10min后PBS洗3次×5min，Bcl-2用枸櫞酸鹽緩沖液pH 6.0高壓煮沸2min)抗原修復;加一抗(即用型)鼠抗人抗體，4℃孵育24 h，PBS洗3次×5min;加二抗(EnVision復合物)，37℃孵育20min，PBS洗3次×5min;經DAB染色后，以蘇木素復染細胞核，常規脫水、透明、封片。

1.3 結果判定 陽性信號呈棕黃色顆粒，陽性判定分別由兩位病理醫師在不了解臨床情況下記數500個細胞，結果用半定量記分方法［2］。①按陽性細胞占細胞總數的多少分為:≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。②按細胞著色強弱分為:無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。然后以兩項記分之和判斷陽性程度:0～1分為(-)，2～3分為(+)，4～5分為(++)，6～7分為(+++)。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行秩和檢驗、秩相關分析，以P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 FHIT蛋白缺失結果 NHL組(-)38例、(+)4例、(++)5例、(+++)5例，缺失率為67.3%;對照組分別為 1、1、12、7 例，缺失率為73.1%。FHIT蛋白在NHL組中表達低于對照組(P＜0.01)。

2.2 Bcl-2蛋白表達結果 NHL組(-)8例、(+)3例、(++)16例、(+++)25例，陽性率為84.6%;對照組分別為6、1、2、1例，陽性率為40%。Bcl-2蛋白在NHL組中表達高于對照組(P＜0.05)。

2.3 相關性結果 NHL組中FHIT蛋白、Bcl-2蛋白表達呈負相關關系(秩相關 rs=-0.593、P＜0.01)。

3 討論

很多研究證實人類多種腫瘤存在FHIT結構的異常，其中以外顯子的異常最為常見［3］，主要是缺失外顯子5和8，其他異常較少見。FHIT蛋白通過調控細胞周期和誘導細胞凋亡來抑制腫瘤發生。研究表明，在肺、食管、胃、腎、子宮頸、胰腺、乳腺等腫瘤組織中存在FHIT蛋白表達下降或缺失［4］。

Bcl-2是一種原癌基因，通過阻斷細胞凋亡來影響細胞生存［5］。Bcl-2基因過度表達可引起腫瘤細胞對凋亡的抵抗。Bcl-2基因在淋巴瘤的發生發展中起重要作用。研究報道約15%的彌漫大B細胞淋巴瘤患者有染色體t(14∶18)易位，然而有40%～60%的彌漫大B細胞淋巴瘤患者表達Bcl-2蛋白，且與預后不良相關［6］。

B細胞NHL患者FHIT蛋白的研究國內尚未見報道。本研究結果顯示，53例B細胞NHL病理切片中35例(73.1%)存在FHIT蛋白表達缺失，而Bcl-2蛋白陽性表達率為84.6%，二者呈負相關。提示FHIT蛋白的缺失在B細胞NHL的發生發展中起重要作用，在FHIT蛋白缺失的病理切片中存在Bcl-2蛋白的高表達，支持FHIT蛋白可誘導細胞凋亡的發生，而Bcl-2蛋白過度表達可引起腫瘤細胞對凋亡的抵抗，FHIT蛋白的缺失可能與線粒體的內部通道細胞凋亡受阻有關，但該過程如何介導細胞凋亡有待進一步研究。

［1］Miyashita T，Reed JC.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy-induced apoptosis in a human leukemia cell line［J］.Blood，1993，81(1):151-157.

［2］馬大烈，白辰光.免疫組織化學陽性標記結果的觀察和判斷［J］.臨床與實驗病理學雜志，2003，19(5):557-560.

［3］Tai SK，Lee JI，Ang KK，et al.Loss of Fhit expression in head and neck squamous cell carcinoma and its potential clinical implication［J］.Clin Cancer Res，2004，10(16):5554-5557.

［4］An HJ，Kim KR，Kim IS，et al.Prevalence of human papillomavirus DNA in various histological subtypes of cervical adenocarcinoma:a population-based study［J］.Mod Pathol，2005，18(4):528-534.

［5］Hermine O，Haioun C，Lepage E，et al.Prognostic significance of bcl-2 protein in expression in aggressive non-Hodgkin's lymphoma:Groupe d'Etude des Lymphomas de I'Adulte(GELA)［J］.Blood，1996，87(1):265-272.

［6］Gascoyne RD，Adomat SA，Krajewski S，et al.Prognostic significance of Bcl-2 protein expression and Bcl-2 gene rearrangement in diffuse aggressive non-Hodgkin's lymphoma［J］.Blood，1997，90(1):244-251.