不同溶劑的芫荽提取物對(duì)菜蚜生物活性的影響

陳 惠，徐 莉，葛 紅，顧國華 （江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，江蘇如皋22654）

芫荽 （CoriadrumsativumL．）又名胡荽，俗稱香菜。芫荽屬傘形科植物，英文名Coriander，為一年生香辛葉類蔬菜，由于具有調(diào)味和多種保健功效而在世界范圍內(nèi)倍受青睞［1］。除了食用功能之外，芫荽提取物還對(duì)魚油具有抗氧化作用［2］，對(duì)沙門氏菌、大腸桿菌等具有抗菌作用［3］等。徐漢虹等［4］研究表明：芫荽對(duì)蚜蟲具有活性作用，但其活性成分的粗提方法及作用方式的系統(tǒng)研究還未見報(bào)道。本研究探索芫荽殺蟲活性成分的提取方法，明確它的主要作用方式，為將芫荽進(jìn)一步開發(fā)成新型植物源農(nóng)藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

（1）芫荽原粉 芫荽來自江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所試驗(yàn)田，用清水洗凈后，自然陰干，粉碎、過篩 （20目）得芫荽原粉，待用。

（2）供試?yán)ハx 蚜蟲捕自江蘇沿江地區(qū)農(nóng)科所附近農(nóng)戶種植的青菜田，選擇健康、大小均勻的蚜蟲，以鮮嫩青菜葉飼養(yǎng)。室內(nèi)溫度 （25±1）℃，相對(duì)濕度60%～75%，光周期12D∶12L。

（3）試劑 乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯均為分析純 （AR），吐溫-80。

1．2 方法

1．2．1 活性成分的提取與藥劑配制

稱取200g植物原粉，倒入1000ml的燒瓶中，分別加入不同的溶劑500ml，浸泡24h，超聲30min，抽濾，共浸提3次，合并濾液后減壓濃縮至油狀為止 （A：芫荽的乙醇提取物；B：芫荽的氯仿提取物；C：芫荽的丙酮提取物；D：芫荽的乙酸乙酯提取物）。分別加入1g吐溫-80，用水稀釋后定容到50ml作為藥劑，稀釋為0、25、50、100、200mg／ml的溶液，備用。

1．2．2 活性作用方式的研究

（1）觸殺活性測(cè)試 采用點(diǎn)滴法。在每頭蟲體的腹背處點(diǎn)滴0．1μl各處理溶液［5］，然后將試蟲轉(zhuǎn)入墊有保濕濾紙的培養(yǎng)皿中，喂飼新鮮青菜葉片，每處理30頭，重復(fù)3次，對(duì)照為1%吐溫-80的水溶液，將培養(yǎng)皿放置于養(yǎng)蟲室。72h后分別記錄各處理蚜蟲的死亡數(shù)，以軟毛筆尖觸及蟲體無反應(yīng)為死亡標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算毒力回歸線、半致死濃度（LC50）、LC50的95%置信限等。

（2）胃毒活性測(cè)試 采用載毒葉片法，參照xenou-Kokoletsi［6］的方法，先將藥液倒進(jìn)抽氣瓶中，再將帶葉柄的完整青菜葉片浸入抽氣瓶的藥液中，然后抽氣，直到葉片表面無氣泡冒出時(shí)，松開抽氣瓶的放氣活塞放氣，使葉片將藥液吸入。把葉片從藥液中取出，放在自來水中漂洗2min，將葉片表面的藥液洗去。用吸水紙吸干葉片上的水，放入9cm培養(yǎng)皿中，每皿放葉片3張，用濕棉球包裹葉柄保濕。用軟毛筆將大小一致的無翅成蚜接入培養(yǎng)皿的葉片上，每皿接蟲30頭，重復(fù)3次。將培養(yǎng)皿養(yǎng)蟲室中飼養(yǎng)。72h后檢查死亡率，以軟毛筆尖觸及蟲體無反應(yīng)為死亡標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算指標(biāo)及方法同上。

（3）驅(qū)避活性測(cè)試 選取新鮮干凈青菜葉片，剪成大小一致的葉碟 （直徑2cm），以中間主葉脈為界用毛筆將葉碟一側(cè)均勻涂上植物提取物［7-8］，對(duì)照為1%吐溫-80的水溶液，靜置陰干；在培養(yǎng)皿底部放3張保濕濾紙，加水，然后將葉碟置于濾紙上。將大小一致的試蟲接于葉脈中部，每處理重復(fù)3次，每重復(fù)30頭試蟲，置于養(yǎng)蟲室內(nèi)。分別于處理后72h調(diào)查處理和對(duì)照活蟲數(shù)。按下式計(jì)算驅(qū)避率。

驅(qū)避率= ［（對(duì)照邊試蟲數(shù)-處理邊試蟲數(shù)）／對(duì)照邊試蟲數(shù)］×100%。

根據(jù)驅(qū)避率的不同，將驅(qū)避效果分為6個(gè)等級(jí) （0～V），分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：0級(jí)，無驅(qū)避作用；I級(jí)，0．1%～20%驅(qū)避率；Ⅱ級(jí)，20．1%～40%驅(qū)避率；Ⅲ級(jí)，40．1%～60%驅(qū)避率；Ⅳ級(jí)，60．1%～80%驅(qū)避率；V級(jí)，80．1%～100%驅(qū)避率［9］。

1．2．3 數(shù)據(jù)處理方法

參照賈春生［10］的方法，試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 17．0軟件計(jì)算毒力回歸方程、半致死濃度（LC50）、LC50的95%置信限等。

2 結(jié)果與分析

2．1 不同溶劑的芫荽提取物對(duì)蚜蟲的觸殺活性的影響

室內(nèi)72h的觸殺活性測(cè)定結(jié)果表明，不同溶劑的芫荽提取物對(duì)蚜蟲均有觸殺作用，其結(jié)果見表1。由表1可知，B的觸殺活性LC50最高，為124．207mg／ml，A、D的LC50相近，C的LC50最低，為64．470mg／ml，其95%的置信區(qū)間為 ［49．406，83．340］，即芫荽的丙酮提取物觸殺活性最高。

表1 不同溶劑的芫荽提取物對(duì)蚜蟲觸殺活性分析結(jié)果 （72h）

2．2 不同溶劑的芫荽提取物對(duì)蚜蟲的胃毒活性的影響

蚜蟲是刺吸式、吸汁類的害蟲，所以采用xenou-Kokoletsi的方法對(duì)其進(jìn)行胃毒活性測(cè)定，結(jié)果見表2。由表2可知，芫荽的不同溶劑提取物對(duì)蚜蟲均有胃毒活性作用，其中，B的觸殺活性LC50最高，為195．242mg／ml，其次分別為 A、D，C的LC50最低，為103．496mg／ml，95%的置信區(qū)間為 ［76．004，159．265］，毒力回歸方程為y=1．810x-3．647。

表2 不同溶劑的芫荽提取物對(duì)蚜蟲胃毒活性分析結(jié)果 （72h）

2．3 不同溶劑芫荽提取物對(duì)蚜蟲的驅(qū)避活性的影響

根據(jù)Malik等的分級(jí)方法，對(duì)4種提取物不同濃度的驅(qū)避率進(jìn)行分級(jí)，結(jié)果見表3。由表3可知，這4種提取物對(duì)蚜蟲均有驅(qū)避活性，當(dāng)藥劑濃度達(dá)200mg／ml時(shí)，B、D的驅(qū)避活性等級(jí)最高，為V級(jí)。

表3 芫荽不同溶劑的提取物對(duì)蚜蟲驅(qū)避活性測(cè)定結(jié)果 （72h）

3 討論

由上述試驗(yàn)結(jié)果可知，4種提取物對(duì)菜蚜均有觸殺、胃毒、驅(qū)避活性作用，其中丙酮提取的芫荽活性物質(zhì)對(duì)菜蚜的觸殺、胃毒作用最大；氯仿、乙酸乙脂的提取物則對(duì)菜蚜的驅(qū)避活性相對(duì)較高，這是由于溶劑的化學(xué)性質(zhì)不同，導(dǎo)致提取物中活性物質(zhì)的質(zhì)量不一樣，故而毒力測(cè)定的結(jié)果有差異，這一結(jié)果與楊玉英等［11］的研究是一致的。本研究中沒有對(duì)芫荽提取物活性組分進(jìn)行分離、提純、鑒定，尚需今后進(jìn)一步研究。

全球生物農(nóng)藥市場(chǎng)銷量已達(dá)到農(nóng)藥總量的20%，而目前我國生物農(nóng)藥年產(chǎn)量?jī)H占農(nóng)藥總量的1%左右［12］。本研究為芫荽的進(jìn)一步開發(fā)利用和仿生合成新型植物源農(nóng)藥奠定了一定基礎(chǔ)。

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