子癇前期患者血清sHLA-G與外周血NK細(xì)胞的相關(guān)性研究

孫 煒，孫 炯

(1鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇鹽城224006;2鹽城市亭湖區(qū)人民醫(yī)院)

子癇前期是妊娠期特有的疾病，是嚴(yán)重威脅母嬰安全的產(chǎn)科并發(fā)癥，其發(fā)病機(jī)理至今尚未完全闡明［1］。研究表明人類白細(xì)胞抗原 G(HLA-G)在重度子癇前期患者胎盤(pán)組織中表達(dá)低下，揭示HLA-G在妊娠期高血壓疾病中可能起著非常重要的作用［2，3］，子癇前期患者胎盤(pán)組織 HLA-G 表達(dá)缺陷可導(dǎo)致自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)功能異常，從而影響母胎免疫耐受［4］。2008年7月～2010年3月，我們通過(guò)測(cè)定血清中可溶性HLA-G(sHLA-G)以及外周血NK細(xì)胞的表達(dá)及相關(guān)性分析，探討sHLA-G在子癇前期發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 我院分娩產(chǎn)婦121例，其中輕度子癇前期患者45例(實(shí)驗(yàn)A組)，重度子癇前期患者34例(實(shí)驗(yàn)B組)，正常妊娠婦女42例(對(duì)照組)。重度子癇前期及輕度子癇前期的診斷符合臨床標(biāo)準(zhǔn)［5］。各組孕婦的年齡及孕周比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。各組孕婦均無(wú)肝炎、結(jié)核等急、慢性傳染病史，無(wú)高血壓、心臟病、免疫治療史，胎兒性別及體質(zhì)量、胎盤(pán)重量差異無(wú)顯著性。

1.2 血清sHLA-G水平測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)雙抗體夾心法檢測(cè)。正常妊娠孕婦分別于建卡時(shí)、中孕、臨產(chǎn)前抽取肘靜脈血3 ml，子癇前期患者于臨產(chǎn)前采集肘靜脈血3 ml。所有血標(biāo)本放置在4℃冰箱，靜置4 h，待自凝后5 000 r/min離心10 min，分離血清，置于 －80℃冰箱凍存?zhèn)溆?。ELISA試劑盒購(gòu)自Biovendor公司，所有操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用Bio-Tek EL×800酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)測(cè)定各樣本吸光值。以標(biāo)準(zhǔn)品已知濃度的對(duì)數(shù)及光吸收值分別為X軸和Y軸，形成標(biāo)準(zhǔn)曲線，用Curve Expert軟件處理數(shù)據(jù)產(chǎn)生半對(duì)數(shù)圖，依據(jù)各待測(cè)樣品測(cè)得的吸光值計(jì)算其sHLA-G水平。

1.3 外周血NK細(xì)胞數(shù)量檢測(cè) 以免疫組化SP法測(cè)定。淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院，NK細(xì)胞檢測(cè)試劑盒(包括鼠抗人CD16、CD57單克隆抗體、生物素偶聯(lián)的兔抗鼠IgG抗體、鏈霉親和素-HRP、過(guò)氧化物酶底物)購(gòu)自北京元康醫(yī)學(xué)技術(shù)公司。無(wú)菌取受試者空腹外周靜脈血各2 ml，肝素抗凝，按常規(guī)方法分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)后，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作，并按標(biāo)準(zhǔn)判定NK細(xì)胞百分比。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。各組數(shù)據(jù)以±s表示，結(jié)果采用單因素的方差分析(組間比較采用LSD法)，以及Pearson相關(guān)分析。以P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 血清中sHLA-G表達(dá)比較 對(duì)照組早孕期、中孕期、晚孕期分別為(14.02 ±5.31)、(13.64 ±5.09)、(12.58 ±4.66)ng/ml，F(xiàn)=6.578，P ＞ 0.05。對(duì)照組晚孕期、實(shí)驗(yàn)A組和實(shí)驗(yàn)B組分別為(12.58±4.66)、(10.74 ±3.21)、(9.06 ±2.66)ng/ml，F(xiàn)=8.776，P=0.001;組間兩兩比較，P 均 ＜0.05。

2.2 外周血NK細(xì)胞百分比比較 實(shí)驗(yàn)A組、實(shí)驗(yàn)B組及對(duì)照組晚孕期分別為(16.14±2.93)%、(18.55 ±3.15)%及(13.15 ±2.60)%，F(xiàn)=33.361，P=0.001;組間兩兩比較，實(shí)驗(yàn)A、B組均高于對(duì)照組(P=0.001)。

2.3 相關(guān)性分析 子癇前期患者外周血NK細(xì)胞百分比和血清sHLA-G存在負(fù)線性相關(guān)關(guān)系，(r=－0.401，P=0.001)。

3 討論

HLA-G主要在人的胎盤(pán)組織中表達(dá)，定位于母胎界面絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞上［6］，在羊水、臍帶血以及母體血循環(huán)中也有一定量的表達(dá)。HLA-G的正常表達(dá)對(duì)孕卵的著床及維持起著重要作用，子癇前期患者及不明原因的習(xí)慣性流產(chǎn)患者胎盤(pán)、血清中HLA-G表達(dá)下降，使滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕分化過(guò)程下降，滋養(yǎng)細(xì)胞不易侵入子宮蛻膜及重鑄螺旋動(dòng)脈，絨毛著床過(guò)淺、血管發(fā)育欠佳，不能有效供應(yīng)胎盤(pán)營(yíng)養(yǎng)，且滋養(yǎng)細(xì)胞易受母體免疫系統(tǒng)的攻擊，使胎盤(pán)生長(zhǎng)發(fā)育受限，可導(dǎo)致子癇前期、流產(chǎn)等［7，8］。絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞是與母體組織直接接觸的胚胎細(xì)胞，其細(xì)胞表面所表達(dá)的HLA-G可通過(guò)與NK細(xì)胞表面抑制性受體結(jié)合，抑制NK細(xì)胞的胞毒活性，從而維持母胎免疫耐受［9］。

外周血sHLA-G可以反映體內(nèi)HLA-G表達(dá)水平，sHLA-G不僅可在母胎界面致免疫耐受，并影響整個(gè)免疫系統(tǒng)的作用。本研究結(jié)果顯示，子癇前期組與正常妊娠組間sHLA-G的表達(dá)存在顯著差異，重度子癇前期組亦低于輕度子癇前期組，說(shuō)明sHLA-G分子的低表達(dá)與子癇前期發(fā)病密切相關(guān)，并可能促進(jìn)子癇前期的病程發(fā)展，sHLA-G分子的表達(dá)與子癇前期病情的輕重呈負(fù)相關(guān)。通過(guò)對(duì)外周血NK細(xì)胞數(shù)量比較，子癇前期患者外周血NK細(xì)胞百分比均顯著高于正常孕婦，且隨血清sHLA-G的下降而呈升高趨勢(shì)。子癇前期患者滋養(yǎng)細(xì)胞HLA-G存在轉(zhuǎn)錄及蛋白水平缺陷，可能由此而引發(fā)NK細(xì)胞對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的殺傷作用［10］。

迄今為止，母胎界面的免疫調(diào)控機(jī)制尚未被系統(tǒng)性地闡明，HLA-G在母胎界面發(fā)揮了重要的免疫作用，進(jìn)行這一方面的研究，對(duì)異常妊娠及移植免疫分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)有著重要的意義。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，并與臨床分型綜合分析，可為臨床診斷與治療提供理論基礎(chǔ)。

［1］侯彩英，閔保華，蔡穎，等.sHLA-G在子癇前期患者的表達(dá)及意義［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，8(10):1905-1906.

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［4］張展，賈莉婷，常彩紅.先兆子癇患者母、臍血NK細(xì)胞增殖能力及殺傷功能測(cè)定［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，40(4):688-691.

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