噬菌體生物擴增法在結核性胸膜炎早期診斷中的研究

張 威，溫 華，康 健

(1中國醫科大學附屬第一醫院，沈陽110001;2沈陽市胸科醫院)

結核性胸膜炎是結核病一種常見的表現形式，由于其早期診斷難度大，導致了患者發生胸膜肥厚、粘連甚至化膿的機會多，預后差，花費多。實驗室快速診斷一直是國內外研究的焦點之一。我們應用噬菌體生物擴增法(PhaB)檢測胸水標本，并與腺苷脫氨酶(ADA)、BACTEC MGIT960培養法進行比較，評價PhaB在結核性胸膜炎早期診斷中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2010年7～9月沈陽市胸科醫院結核性胸膜炎住院患者70例，其中男55例、女15例，年齡18～85歲。病例選擇符合《臨床診療指南·結核病分冊》［1］結核性胸膜炎診斷標準。

1.2 檢測方法

1.2.1 PhaB法 采用由上海金浩科技發展有限公司提供，英國BIOTEC(生物技術實驗有限公司)生產的FASTPlaqueTM試劑盒。操作步驟:①N-乙酰半胱氨酸—氫氧化鈉胸液標本，用液體培養基離心洗滌2次，在沉淀中加入1 ml液體培養基，無菌條件下轉移至反應管中為備用待檢菌液。②噬菌體浸染:在上述處理過的樣本中加入100μl分枝桿菌噬菌體，混勻后放37℃溫育1 h。③終止浸染:在每個反應管中加入100μl殺毒劑充分混勻，室溫作用5 min。④終止殺毒劑作用:于各反應管中加入5 m l液體培養基充分混勻，然后每管中加入1 ml指示細胞混勻。⑤澆注平皿:將上述液倒入無菌平皿中，隨即加入5 m l溶化的瓊脂(55℃左右)旋轉混合，靜置成形后，放37℃培養18～24 h。結果判定:對照結果正確的條件下觀察測試樣品結果。陽性結果可見有大小和數量不等的噬菌斑，或許多噬菌斑相互融合成透亮狀;陰性結果可見指示細胞在瓊脂平板中均勻生長，使整個平板呈毛玻璃狀，無噬菌斑出現。陽性及陰性對照應該在如下范圍:陽性≥20個噬菌斑;陰性≤19個噬菌斑。

1.2.2 其他檢測方法 BACTEC MGIT960培養法按照儀器使用說明書進行操作。PPD試驗以硬結平均直徑≥20 mm或者有水泡、淋巴管炎，統計時定義為陽性檢出。ADA測定采用比色速率法，試劑由德國AUTEC DIAGNOSTICA公司提供，儀器為東芝-40FR自動化分析儀。

1.3 統計學方法 計數資料應用χ2檢驗進行比較。以P≤0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 陽性率比較 PhaB法、ADA、BACTEC MGIT960培養法陽性率分別為48.57%(34/70)、30%(21/70)、7.14%(5/70)。PhaB 法檢出陽性率高于 ADA 法(χ2=4.36，P ＜ 0.05)及 BACTEC MGIT960 法(χ2=25.29，P ＜0.01)。

2.2 與PPD試驗對照 本組經PPD檢測結果強陽性者18例(25.71%)，其中經PhaB法檢測胸水陽性11例，二者總體陽性符合率61.11%，PhaB法陽性率高于PPD試驗(P＜0.05)。

3 討論

PhaB法是一種細菌學快速診斷新技術，近年來我國應用該法檢測不同標本結核分枝桿菌已有報道［2，3］。本 文 采 用 PhaB 法、ADA 法、BACTEC MGIT960法檢測70例胸水標本，檢出陽性標本分別為34、21、5份。PhaB法檢出陽性率高于其他2種檢測方法。本實驗中ADA陽性率低于文獻報道，可能與機體的狀態、檢測方法有關［4，5］。

胸膜活檢方法通常是在患者出現胸膜肥厚時一種有效的診斷方法，往往發生在沒有及時診斷、治療的患者身上;而BACTEC MGIT960法亦在15～20 d出結果，時間長，因此兩種檢測方法不能早期診斷結核性胸膜炎。而PhaB法可以檢測出胸水中活的結核分枝桿菌，18～24 h出結果，且具有較高的陽性率，可以作為早期診斷結核性胸膜炎的方法。

我們亦將PhaB法與PPD試驗相比較，二者總體陽性符合率61.11%，PhaB法陽性率高于PPD檢測方法。PPD試驗結果受一定因素影響［6］:結核分枝桿菌感染后需4～8周建立充分變態反應，在此之前結核菌素試驗可成陰性;營養不良、HIV感染、嚴重細菌感染、重癥肺結核等因素均可使結果呈現陰性或弱陽性改變。目前PPD作為檢測體內有無活動結核菌的方法已在基層醫院廣泛應用，雖然陽性率低于PhaB法，影響因素多，但仍可作為篩查結核菌感染的指標。

總之，PhaB法具有簡便、快速、較高的陽性率、價廉等優點，是結核性胸膜炎早期診斷的一項重要檢查方法，具有較高的臨床應用價值，特別適用于基層醫院開展。

［1］端木宏謹.臨床診療指南·結核病分冊［M］.北京:人民衛生出版社，2005:10-11.

［2］趙愛斌.噬菌體生物擴增法對結核性胸膜炎的診斷價值［J］.山西醫科大學學報，2007，38(4):333-334.

［3］林桃源，何聚蓮，方瓊.菌體生物擴增法早期診斷結核性胸膜炎的臨床價值［J］.臨床肺科雜志，2007，12(2):157-158.

［4］李湘民.腺苷脫氨酶檢測在胸腔積液中的診斷價值［J］.醫學臨床研究，2007，24(7):1111-1112.

［5］Albert H，Heydenrych A，Brookes R，et al.Performance of a rapid phage-based test，FASTPlaqueTB，to diagnose pulmonary tuberculosis from sputum specimens in South Africa［J］.Int J Tuberc Lung Dis，2002，6(6):529-537.

［6］陸再英，鐘南山.內科學［M］.7版.北京:人民衛生出社，2008:48-49.