噬菌體生物擴(kuò)增法在結(jié)核性胸膜炎早期診斷中的研究

張 威，溫 華，康 健

(1中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，沈陽(yáng)110001;2沈陽(yáng)市胸科醫(yī)院)

結(jié)核性胸膜炎是結(jié)核病一種常見的表現(xiàn)形式，由于其早期診斷難度大，導(dǎo)致了患者發(fā)生胸膜肥厚、粘連甚至化膿的機(jī)會(huì)多，預(yù)后差，花費(fèi)多。實(shí)驗(yàn)室快速診斷一直是國(guó)內(nèi)外研究的焦點(diǎn)之一。我們應(yīng)用噬菌體生物擴(kuò)增法(PhaB)檢測(cè)胸水標(biāo)本，并與腺苷脫氨酶(ADA)、BACTEC MGIT960培養(yǎng)法進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)PhaB在結(jié)核性胸膜炎早期診斷中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2010年7～9月沈陽(yáng)市胸科醫(yī)院結(jié)核性胸膜炎住院患者70例，其中男55例、女15例，年齡18～85歲。病例選擇符合《臨床診療指南·結(jié)核病分冊(cè)》［1］結(jié)核性胸膜炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 PhaB法 采用由上海金浩科技發(fā)展有限公司提供，英國(guó)BIOTEC(生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)有限公司)生產(chǎn)的FASTPlaqueTM試劑盒。操作步驟:①N-乙酰半胱氨酸—?dú)溲趸c胸液標(biāo)本，用液體培養(yǎng)基離心洗滌2次，在沉淀中加入1 ml液體培養(yǎng)基，無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移至反應(yīng)管中為備用待檢菌液。②噬菌體浸染:在上述處理過(guò)的樣本中加入100μl分枝桿菌噬菌體，混勻后放37℃溫育1 h。③終止浸染:在每個(gè)反應(yīng)管中加入100μl殺毒劑充分混勻，室溫作用5 min。④終止殺毒劑作用:于各反應(yīng)管中加入5 m l液體培養(yǎng)基充分混勻，然后每管中加入1 ml指示細(xì)胞混勻。⑤澆注平皿:將上述液倒入無(wú)菌平皿中，隨即加入5 m l溶化的瓊脂(55℃左右)旋轉(zhuǎn)混合，靜置成形后，放37℃培養(yǎng)18～24 h。結(jié)果判定:對(duì)照結(jié)果正確的條件下觀察測(cè)試樣品結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果可見有大小和數(shù)量不等的噬菌斑，或許多噬菌斑相互融合成透亮狀;陰性結(jié)果可見指示細(xì)胞在瓊脂平板中均勻生長(zhǎng)，使整個(gè)平板呈毛玻璃狀，無(wú)噬菌斑出現(xiàn)。陽(yáng)性及陰性對(duì)照應(yīng)該在如下范圍:陽(yáng)性≥20個(gè)噬菌斑;陰性≤19個(gè)噬菌斑。

1.2.2 其他檢測(cè)方法 BACTEC MGIT960培養(yǎng)法按照儀器使用說(shuō)明書進(jìn)行操作。PPD試驗(yàn)以硬結(jié)平均直徑≥20 mm或者有水泡、淋巴管炎，統(tǒng)計(jì)時(shí)定義為陽(yáng)性檢出。ADA測(cè)定采用比色速率法，試劑由德國(guó)AUTEC DIAGNOSTICA公司提供，儀器為東芝-40FR自動(dòng)化分析儀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)數(shù)資料應(yīng)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較。以P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 陽(yáng)性率比較 PhaB法、ADA、BACTEC MGIT960培養(yǎng)法陽(yáng)性率分別為48.57%(34/70)、30%(21/70)、7.14%(5/70)。PhaB 法檢出陽(yáng)性率高于 ADA 法(χ2=4.36，P ＜ 0.05)及 BACTEC MGIT960 法(χ2=25.29，P ＜0.01)。

2.2 與PPD試驗(yàn)對(duì)照 本組經(jīng)PPD檢測(cè)結(jié)果強(qiáng)陽(yáng)性者18例(25.71%)，其中經(jīng)PhaB法檢測(cè)胸水陽(yáng)性11例，二者總體陽(yáng)性符合率61.11%，PhaB法陽(yáng)性率高于PPD試驗(yàn)(P＜0.05)。

3 討論

PhaB法是一種細(xì)菌學(xué)快速診斷新技術(shù)，近年來(lái)我國(guó)應(yīng)用該法檢測(cè)不同標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌已有報(bào)道［2，3］。本 文 采 用 PhaB 法、ADA 法、BACTEC MGIT960法檢測(cè)70例胸水標(biāo)本，檢出陽(yáng)性標(biāo)本分別為34、21、5份。PhaB法檢出陽(yáng)性率高于其他2種檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)中ADA陽(yáng)性率低于文獻(xiàn)報(bào)道，可能與機(jī)體的狀態(tài)、檢測(cè)方法有關(guān)［4，5］。

胸膜活檢方法通常是在患者出現(xiàn)胸膜肥厚時(shí)一種有效的診斷方法，往往發(fā)生在沒(méi)有及時(shí)診斷、治療的患者身上;而BACTEC MGIT960法亦在15～20 d出結(jié)果，時(shí)間長(zhǎng)，因此兩種檢測(cè)方法不能早期診斷結(jié)核性胸膜炎。而PhaB法可以檢測(cè)出胸水中活的結(jié)核分枝桿菌，18～24 h出結(jié)果，且具有較高的陽(yáng)性率，可以作為早期診斷結(jié)核性胸膜炎的方法。

我們亦將PhaB法與PPD試驗(yàn)相比較，二者總體陽(yáng)性符合率61.11%，PhaB法陽(yáng)性率高于PPD檢測(cè)方法。PPD試驗(yàn)結(jié)果受一定因素影響［6］:結(jié)核分枝桿菌感染后需4～8周建立充分變態(tài)反應(yīng)，在此之前結(jié)核菌素試驗(yàn)可成陰性;營(yíng)養(yǎng)不良、HIV感染、嚴(yán)重細(xì)菌感染、重癥肺結(jié)核等因素均可使結(jié)果呈現(xiàn)陰性或弱陽(yáng)性改變。目前PPD作為檢測(cè)體內(nèi)有無(wú)活動(dòng)結(jié)核菌的方法已在基層醫(yī)院廣泛應(yīng)用，雖然陽(yáng)性率低于PhaB法，影響因素多，但仍可作為篩查結(jié)核菌感染的指標(biāo)。

總之，PhaB法具有簡(jiǎn)便、快速、較高的陽(yáng)性率、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)，是結(jié)核性胸膜炎早期診斷的一項(xiàng)重要檢查方法，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值，特別適用于基層醫(yī)院開展。

［1］端木宏謹(jǐn).臨床診療指南·結(jié)核病分冊(cè)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:10-11.

［2］趙愛斌.噬菌體生物擴(kuò)增法對(duì)結(jié)核性胸膜炎的診斷價(jià)值［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，38(4):333-334.

［3］林桃源，何聚蓮，方瓊.菌體生物擴(kuò)增法早期診斷結(jié)核性胸膜炎的臨床價(jià)值［J］.臨床肺科雜志，2007，12(2):157-158.

［4］李湘民.腺苷脫氨酶檢測(cè)在胸腔積液中的診斷價(jià)值［J］.醫(yī)學(xué)臨床研究，2007，24(7):1111-1112.

［5］Albert H，Heydenrych A，Brookes R，et al.Performance of a rapid phage-based test，F(xiàn)ASTPlaqueTB，to diagnose pulmonary tuberculosis from sputum specimens in South Africa［J］.Int J Tuberc Lung Dis，2002，6(6):529-537.

［6］陸再英，鐘南山.內(nèi)科學(xué)［M］.7版.北京:人民衛(wèi)生出社，2008:48-49.