傣雅解護肝方對乙硫氨酸所致小鼠脂肪肝的影響

呂顯榮 張 闖 張 超 陳 普 陳清華

1.保山中醫藥高等專科學校，云南 保山 678000;2.云南省軍區門診部，云南 昆明 650051;3.云南中醫學院，云南 昆明 650500

傣雅解護肝方是從傣醫臨床文獻資料中收集整理的民族有效驗方，該方是具有調節體內“四塔、五蘊”功能，解除人體毒素，保護臟腑功能的解毒方。傣雅解護肝方由傣百解、葛根、文尚海 (竹葉蘭)、十大功勞、定心藤、大黃藤、山楂、三七等組成。全方合用具有調補四塔、清火解毒，解酒保肝之作用。

1 實驗材料

1.1 動物 昆明種小鼠，清潔級，體重22～26g，雌雄各半，由四川省醫學科學院試驗動物研究所提供，合格證號:SCXK(川)2004—16。

1.2 藥品與試劑

1.2.1 藥品

“傣雅解護肝方”的所有藥材由云南中醫學院門診部提供 (其中的傣藥經西雙版納傣醫院巖罕單副主任藥師鑒定);乙硫氨酸 (DL－E)為Sigma公司產品。

1.2.2 試劑

總膽固醇 (TC)試劑盒，批號:1008141，甘油三脂(TG)試劑盒，批號:1108111，均購自四川省邁克科技有限公司。

1.3 儀器

752 N紫外可見分光光度計，上海精密科學儀器有限公司;HH－6數顯恒溫水浴鍋，常州國華電器有限公司;FLUKO F6/10超細勻漿機，上海弗魯克流體機械制造有限公司;LG10－2.4A高速離心機，北京醫用離心機廠;HW－80A旋渦混合器，上海精科實業有限公司;電子天平sartorius AG，STARTORIUS。

2 方法

2.1 藥物的制備 參照文獻[1]，傣雅解護肝方高、低劑量藥物的制備:將方藥用水煎煮、濃縮成稠浸膏;傣雅解護肝方醇提取物的制備:將方藥水煎煮、濃縮、乙醇沉淀、上清液回收乙醇，濃縮成浸膏。分別置于－18℃冰箱冷藏備用，給藥前配至所需濃度。

陽性藥、傣雅解護肝方低劑量為臨床用量的等效量，高劑量為等效量的2倍，醇提組劑量為低劑量水提醇沉后的量。由于在做急性毒性試驗時，該方直接煎煮后濃縮至最大濃度仍然倍數較低，故采用水提醇沉法，以提高藥物在最大濃度時的倍數。同時，在此后的試驗中均加入一組經水提醇沉后的醇提組，以觀察該組與未水提醇沉前療效是否一致，為該藥以后制劑的研究提供藥理實驗依據。

2.2 動物分組及給藥方法

參照文獻[2]，昆明種小白鼠60只，雌雄各半，隨機分成5組:正常對照組，模型對照組，傣雅解護肝方高、低劑量組，傣雅解護肝方醇提組。連續給藥7天，末次給藥后2小時，除正常對照組外均灌服1.25%的乙硫氨酸，250mg/kg，24h后處死，剖腹取肝臟，取各樣本同一部位肝組織200±10mg，用乙醇:丙酮 (1:1)混合抽提液2m l勻漿，測其總膽固醇 (TC)、甘油三脂 (TG)，進行組間比較。剩余肝臟用10%甲醛固定，作病理學檢查。

2.3 生化指標的檢測

檢測總膽固醇、甘油三脂，按試劑盒操作方法進行測定。結果見表1

2.4 病理學檢查

取固定好的肝右葉組織，石蠟包埋、切片、染色、光鏡下觀察。結果見附圖1。

2.5 統計學處理 計量資料符合正態分布、方差齊者用t檢驗，方差不齊者用t'檢驗，不符合正態分布者用秩和檢驗。實驗數據均以±s表示。

3 結果

3.1 肝勻漿中總膽固醇、甘油三酯的變化見表1

結果表明:模型組LTG、LTC與正常組相比，均明顯升高 (p＜0.05);傣雅解護肝方高劑量、醇提組能明顯抑制模型小鼠LTC的升高 (p＜0.05);低劑量組與模型組比較，對LTC有降低作用趨勢，但差異無顯著性意義 (p＞0.05);各給藥組對LTG均作用不明顯。

表1 肝勻漿LTC、LTG的變化 (±s，n=12)

表1 肝勻漿LTC、LTG的變化 (±s，n=12)

注:與正常組比較，﹟P＜0.05;與模型組比較，﹡P＜0.05。

組別 劑量 (g/kg) LTG(mmol/L) LTC(mmol/L)0.677±0.260 1.033±0.113模型組 等容積 0.907±0.192# 1.180±0.187#高劑量組 4.4512 1.019±0.255 1.049±0.051*低劑量組 2.2256 1.009±0.437 1.055±0.110醇提組 1.04 0.929±0.359 1.054±0.053正常組 等容積*

3.2 肝臟病理形態學變化見附圖1

正常組小鼠肝小葉結構正常，肝索排列規則，肝細胞大小均勻一致，胞核呈圓形，形態規則，多數肝細胞見一個細胞核，部分可見雙核，肝竇清晰可見。模型組小鼠肝臟組織光鏡下可見程度不等的彌漫性脂肪變性，胞漿內出現大量脂肪空泡。傣雅解護肝方各劑量 (型)組與模型組比較能明顯減少脂肪空泡的數量，高劑量組僅存在少量的、散在的脂肪空泡。高劑量組作用較低劑量組、醇提組好，低劑量組與醇提組差異不明顯。

附圖1 傣雅解護肝方對乙硫氨酸所致小鼠脂肪肝的影響

4 討論

近年來，由于生活水平的提高、飲食結構的改變等多種因素的影響，我國脂肪肝發病率有逐漸增加的趨勢，在歐美及我國許多地區脂肪肝成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病。脂肪肝是多種病因引起的肝細胞內脂肪蓄積過多的一種病理狀態。正常時肝內脂肪僅占肝重的3～5%，超過7%即為脂肪肝[3]。而脂肪肝是多種病因的結果，同時也作為病因使脂肪肝向脂肪性肝炎、脂肪性肝硬化發展[4]。因此，可以認為脂肪肝是肝纖維化及肝硬化的前期病變[5]。乙硫氨酸引起肝臟病變主要是脂肪變性，乙硫氨酸的化學結構與甲硫氨酸相似，后者為體內甲基轉換的供體，乙硫氨酸與之競爭，取代甲基而提供乙基，使肝臟蛋白質合成發生障礙，生成的RNA和蛋白質含有乙基而非甲基基團。由于蛋白質合成發生障礙，擔負將甘油三酯轉運出肝臟的載體脂蛋白的復合物生成減少，結果甘油三酯蓄積于肝臟，引起脂肪肝[6]。

傣族傳統醫藥學具有2500多年的悠久歷史，傣族人民在長期的生活和醫療實踐中創立獨具民族和地域特色的傣醫藥基礎理論，其中傣醫雅解理論和雅解 (解藥)是傣醫藥最具特色的理論和方藥之一。“雅解”為傣語，意譯為解藥，系指能解除體內各種毒素，平衡和協調“四塔五蘊”和臟腑功能的一類傣醫方藥的統稱。傣雅解護肝方是從傣醫臨床文獻資料中收集整理的民族有效驗方，該方是具有調節體內“四塔、五蘊”功能，解除人體毒素，保護臟腑功能的解毒方。其中傣百解、葛根，性涼，入風、火、水、土塔，調四塔，解酒毒、熱毒和其他毒，護臟腑為主藥，文尚海 (竹葉蘭)，性涼，入水塔，具有清火解毒之功，助主藥加強解毒排毒之功能。十大功勞性寒涼，能清熱利膽退黃;定心藤味甜，性寒涼，入土、火、風塔，具有清熱利尿、利膽退黃之功，二者相輔以增強清熱利濕退黃之效。大黃藤，性寒涼，入四塔，有調四塔，解百毒，消疔瘡之作用。毫命 (姜黃)味苦、微辣，性平偏熱，入水、土、風塔。具活血止痛，清火解毒之功。管底 (三葉蔓荊)根味苦、性涼，入風、水、土塔，清火解毒，治瘡癤腫痛。奶子藤、甘草，性涼入四塔，具有清火解毒，補氣活血之功。全方合用具有調補四塔、清火解毒，保肝之作用。

實驗結果表明傣雅解護肝方高劑量、醇提組能明顯抑制模型小鼠LTC的升高 (p＜0.05);肝組織病理學檢查結果亦表明，傣雅解護肝方各劑量 (型)組與模型組比較能明顯減少脂肪空泡的數量，縮小脂變的面積，實驗結果提示該方對乙硫氨酸引起的小鼠肝臟脂肪蓄積有一定的預防作用。能抑制肝脂中總膽固醇的升高，表明其對脂肪輸出障礙 (脂肪代謝紊亂型脂肪肝)有一定的療效。

“雅解”在傣族地區應用廣泛，療效確切，獨具特色。但傣醫“雅解”方藥為什么能“解毒”?其“解毒”的作用機理是什么?目前尚不清楚，與其相關的科學研究尚未開展。本研究以傣醫基礎理論為指導，采用藥理學的研究方法，對“傣雅解護肝方”藥理作用研究，結果表明傣醫“解”內涵是豐富的，包涵了調節代謝有害物質所引起“四塔五蘊”和臟腑功能紊亂的作用和解除導致人體發病的各種毒素和有害物質兩方面的作用。其作用機制可能與其調節動物血脂等作用有關。

本研究對闡明傣醫“雅解”方藥“解毒”作用的科學性及“雅解”方藥防治疾病的作用機制，進一步深化、豐富和完善傣醫學理論，指導臨床應用是有益的探索。

[1]李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].上海:上海科學技術出版社，1991:36－38.

[2]林青，張超，等.去脂軟肝丸對實驗性脂肪肝肝脂的影響[J].中國中醫藥信息雜志，2002，9(5):33－34.

[3]曾民德.脂肪肝.中華消化雜志，1999，19(2):120－122.

[4]祁培宏.脂肪肝及其中醫治療進展.中西醫結合肝病雜志，1999，9(1):61.

[5]范建高.脂肪肝與肝纖維化的關系及其機制.國外醫學·消化分冊，1997，17(2):92.

[6]李儀奎主編.中藥藥理實驗方法學[M].上海，上海科學技術社，1991:462.