眼針對腦缺血再灌注損傷大鼠血清BDNF含量的影響

， ， ，，，德山，

(遼寧中醫藥大學，遼寧 沈陽 110032)

眼針療法是彭靜山教授根據中醫學基本理論結合長期的臨床實踐所創立的一種微針療法，眼針對于腦血管性疾病特別是腦卒中等具有顯著的療效，但是其作用機制至今尚不清楚。本研究通過建立大鼠腦缺血再灌注損傷的動物模型，觀察眼針對大鼠神經功能缺損評分、血清腦源性神經營養因子(BDNF)表達的影響，旨在探究眼針治療腦缺血再灌注損傷的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組 健康SD(SPF級)大鼠80只，雌雄不限，體重(280±20) g，由北京維通利華實驗動物中心提供，許可證編號：SCXK(京)2007-0001。分籠適應性飼養，室內溫度22 ℃，相對濕度45%。將標準顆粒飼料喂養7 d以后按隨機數字法分為：正常對照組；3、24、72 h假手術組；3、24、72 h模型組；3、24、72 h眼針組，共計10組，每組8只。

1.2 模型制備與評價 在文獻[1]基礎上,采用改良的線栓法復制大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷模型，并于缺血2 h進行再灌注，再灌注后3、24、72 h進行神經功能缺損評分。模型評價參照ZeaLonga 5分制評分標準:0分為無癥狀；1分為不能完全伸展對側前爪；2分為向對側轉圈；3分為向對側傾倒；4分為不能自發行走，意識喪失。評分為1～3分者納入實驗組，未達標準者排除。假手術組術式同模型、眼針組，區別在于釣魚線插入動脈深度為0.5～1 cm，其他同手術組。正常組未做處理。經過預實驗發現在保證大鼠體質量、環境溫度的條件下，由手術熟練的技術人員操作，動物不會發生死亡。

1.3 眼針取穴及刺法 眼針組:用31號13 mm毫針，于大鼠眶周2 mm處針刺，參照人體取穴方法，取肝區、上焦區、下焦區、腎區。手法：平刺，進針3 mm。留針20 min，留針期間捻轉行針3次，每次1 min。治療時機:3、24、72 h眼針組大鼠均于腦缺血再灌注即刻及取材前30 min，分別進行眼針刺激，并且24、72 h組每隔12 h分別針刺1次，方法同上。

1.4 指標測定 用ELISA方法檢測大鼠血清BDNF含量。眼針結束后,麻醉狀態下腹主動脈取血3 mL，離心分離血清供檢測備用；ELISA試劑盒由美國R&D公司進口分裝試劑盒，按照試劑盒說明書進行檢測。利用全自動酶標儀，在450 nm處測定各孔的OD值，采用CurveExpert 1.3進行標準曲線的繪制，并計算出對應的濃度值。

2 結果

2.1 眼針對腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經功能缺損影響 見表1。

2.2 眼針對腦缺血再灌注損傷大鼠血清中BDNF含量的影響 見表2。

表1 眼針對腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經功能缺損評分的影響 分

表2 眼針對腦缺血再灌注損傷大鼠血清中BDNF含量的影響 OD值

3 討論

腦缺血和再灌注損傷發生時，BDNF[2-3]可作為一種保護劑抵抗腦缺血損傷，對神經元損傷后修復具有重要意義[4-6]。眼針療法是由遼寧中醫藥大學附屬醫院著名老中醫彭靜山教授于70年代首創，在眼眶周圍用針刺等刺激防治疾病的一種微針療法。應用于臨床30余年來，療效顯著。

BDNF為神經營養因子家族中的一員，由神經細胞合成并廣泛分布于中樞神經系統，以大腦皮質、海馬、紋狀體分布最為豐富[4-7]。BDNF對神經元生長發育及神經元缺血損傷后修復具有重要意義。有研究[8]表明，腦缺血和再灌注損傷均可導致腦組織BDNFmRNA的廣泛表達，而且其表達水平與局部神經元抵抗損傷的能力呈正相關，腦損傷后BDNFmRNA的表達增加是神經元對腦損傷的自身保護。本研究結果表明大鼠腦缺血再灌注后,腦組織受損，機體出現神經功能缺損的癥狀。同時血清中腦源性神經營養因子的表達減少，進一步加重腦組織的損傷。應用眼針的治療方法，可通過提高大鼠血清中BDNF的含量，促進神經元缺血損傷后的修復，使大鼠神經功能缺損癥狀得到一定的緩解。

本實驗通過建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型，明確了眼針治療可以使大鼠血清中BDNF的含量增加，進而促進大鼠神經功能的恢復，揭示了眼針治療腦缺血再灌注損傷作用的相關機制。

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