補血顆粒醇提工藝條件的優選

(浙江醫藥高等專科學校，浙江 寧波 315100)

補血顆粒由黃芪、延胡索、當歸、陳皮組成，其方是由《重訂嚴氏濟生方》中古方三神丸衍化而來[1]。功能為補血活血，調經止痛。用于血虛血瘀、月經不調、痛經。根據處方中藥材所含有效成分的性質，將延胡索單獨用乙醇回流提取。筆者通過正交試驗篩選，以其所含的主有效成分之一延胡索乙素含量為考察指標，用方差分析法進行分析，優選了補血顆粒提取工藝條件[2]。

1 實驗儀器與材料

Agilent 1100型高效液相色譜儀、Advantage系列超純水機(美國pall)、BS124S電子分析天平(德國Sartorius)、SB-12DT超聲波清洗儀(寧波新芝生物儀器廠)、延胡索乙素對照品(中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號：0726-200208)，投料延胡索經本實驗室鑒定為罌粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang.的干燥塊莖，其他試劑均為分析純。

2 實驗方法與結果

2.1 延胡索乙素的含量測定[3-4]

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；甲醇-0.1%磷酸溶液(用三乙胺調至pH至6.0)(60∶40)為流動相；流速1 mL/min；檢測波長280 nm;理論塔板數按延胡索乙素峰計算應不低于2 000。

2.1.2 對照品溶液的制備 稱取延胡索乙素對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密吸取醇提液5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2 浸出物含量測定 精密吸取樣品液10 mL，置干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥5 h，置干燥器中冷卻30 min，精密稱定重量，再在上述溫度下干燥1 h,冷卻、稱重，至連續2次稱重的差異不超過5 mg，按下式計算得膏率(W為浸膏質量，M為藥材質量，V為樣品溶液體積)。

2.3 醇提工藝正交設計[5]準確稱取延胡索粗粉(過一號篩)50 g，加乙醇回流提取，以乙醇濃度、加醇量、提取次數、提取時間為考察因素，每個因素設計3個水平,以延胡索乙素含量為本品提取工藝的評價指標，以浸出物含量作為本品的參考指標，按L9(34)正交表安排試驗，平行操作，見表1。

表1 因素水平表

2.4 正交試驗及結果 按醇提正交試驗設計方案安排試驗，得濾液,試驗結果見表2。方差分析結果見表3。

表2 L9(34)正交試驗結果

表3 延胡索乙素含量方差分析

F0.10(2，2)=9.00；F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

實驗結果表明，以延胡索乙素的含量為本品提取工藝的評價指標，以浸出物含量作為本品的參考指標，直觀分析顯示各因素作用主次為C>A>B>D，最佳提取方案為A1B3C3D2。方差分析結果表明煎煮次數(A)、加水量(B)、煎煮時間(C)三因素均對實驗結果有顯著性影響，提取時間(D)因素，由于極差值較小，對實驗結果無顯著性影響。因此選用A1B3C3D2。

2.5 驗證試驗 為了進一步考察優選工藝的可靠性及穩定性，按2.3項下的提取條件進行提取，按優選工藝條件進行3次驗證試驗，測定結果見表4，結果表明正交試驗優選的工藝條件穩定、可靠。

表4 驗證試驗結果

3 結論

3.1 延胡索的有效成分主要為生物堿，其中又以延胡索乙素為其主要活性成分。因此我們選取延胡索乙素作為本品提取工藝的主要評價指標，以浸出物含量作為本品的參考指標。

3.2 優選后的最佳工藝條件為A1B3C3D2，即醇提最佳工藝條件為加8倍量的60%乙醇回流提取90 min，共提取3次。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:化學工業出版社,2010:52.

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[5]李強,謝揚,丁宗保,等.正交設計優選黃石斛多糖提取工藝[J].安徽農業科學,2010,38(28):15608-15609.