GPA對CCl4肝損傷模型小鼠肝\\脾組織作用的研究

摘要：為了研究大蒜多糖（ＧＰＡ）對機體組織的藥理作用，以小白鼠為研究對象，試驗分５組：正常對照組、模型對照組及3個治療組，除正常對照組外，其他4組采用ＣＣｌ４灌胃的方法建立小鼠化學性肝損傷模型，3個治療組分別用１００、２００、４００ ｍｇ／ｋｇ不同濃度大蒜多糖對小鼠進行治療，給藥７ ｄ后，摘取小鼠肝臟、脾臟，進行組織學觀察，并與ＣＣｌ４模型組及正常對照組進行比較。結(jié)果在ＣＣｌ４模型組中，小鼠肝臟發(fā)生廣泛的顆粒變性和水泡變性，中央靜脈重度淤血等病變。經(jīng)大蒜多糖治療后，小鼠肝臟水泡變性消失，顆粒變性減少，中央靜脈淤血消失；脾臟發(fā)生廣泛的淋巴細胞增生。結(jié)果表明大蒜多糖對ＣＣｌ４致小鼠化學性肝損傷具有保護作用，并能改善機體的免疫功能。

關(guān)鍵詞：大蒜多糖；ＣＣｌ４；小鼠；肝損傷

中圖分類號：ＴＳ２０１．２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）16－3355-03

The Effect of GPA on the Liver and Spleen of CCl4 Induced Liver Injury Mouse

ＺＨＡＮＧ Ｘｉａ１，ＣＨＥＮＧ Ｆｕ－ｓｈｅｎｇ２

（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｇａｎｓｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００７０，Ｃｈｉｎａ；

２． Ｌａｎｚｈｏｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ and Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ， the Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ / Key Laboratory of New Animal Drug Project of Gansu Province， Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００５０，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： ５ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｗere ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｒｌｉｃ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＧＰＡ） ｏｎ ｔｈｅ ｏｒｇaｎｉｓｍｓ． Ｅｘｃｅｐｔ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ， ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｔｈｒｅｅ ｔｒｅａｔing ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＣＣｌ４） ｂｙ ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｔｏ ｃｏｎｄstruct ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌ． Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｔｒｅａｔing ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＧＰＡ ａｔ ｔｈｒｅｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ of 100、200、400 mg/kg． Ａｆｔｅｒ ｓｅｖｅｎ ｄａｙｓ， ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ， ｓｐｌｅｅｎ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｏｕｔ ｆｏｒ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ the model group and the ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｏｂｅｒｓｅｒｖｅｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ ｇｒａｎｕｌａｒ ａｎｄ ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｓｅｖｅｒｅ ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ ｉｎ ｃｅｎｔｒａｌ ｖｅｎｏｕｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｉｎ the ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ． Ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ GPA， ｔｈｅ ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｄｉｓａｐｐｅａｒｅｄ， ｇｒａｎｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ， ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ ｉｎ ｃｅｎｔｒａｌ ｖｅｎｏｕｓ ｄｉｓａｐｐｅａｒｅｄ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｉｎ ｓｐｌｅｅｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ GPA ｈａｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｏｆ ＣＣｌ４ ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｍｉｃｅ， ａｎｄｃｏｕｌｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｉｍａｌ＇ｓ ｂｏｄｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｇａｒｌｉｃ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＧＰＡ）； ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＣＣｌ４）； mouse； ｉｎｊｕｒｅｄ－ｌｉｖｅｒ

多糖是廣泛存在于動植物及微生物體內(nèi)的天然大分子物質(zhì)，近十年已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多種動植物多糖和真菌多糖，對化學性、實驗性等肝損傷有保護與治療作用，能減弱肝病理損傷［１］。現(xiàn)代醫(yī)學、營養(yǎng)學、預防醫(yī)學的研究表明大蒜有保護肝臟、降血脂、預防動脈硬化、防治冠心病、防治腦血栓、消炎殺菌、抗腫瘤、提高機體免疫力和延緩衰老等作用［２，３］。大蒜多糖是從大蒜中提取的有效成分。近年來的研究表明，大蒜多糖（GPA）與化學性肝炎的損害和機體免疫應(yīng)答有關(guān)。有學者給小鼠口服GPA未測出ＬＤ５０，表明GPA安全無毒［４］。

利用ＣＣｌ４可以誘發(fā)小鼠化學性肝損傷模型［５］，四氯化碳作為經(jīng)典的親肝毒物，主要經(jīng)呼吸道和消化道進入體內(nèi)，人和動物均可導致肝損傷。目前國內(nèi)外關(guān)于ＣＣｌ４對肝細胞損傷的機理包括：脂質(zhì)過氧化學說，共價結(jié)合學說和細胞內(nèi)鈣代謝紊亂學說［６］。目前國內(nèi)外多采用ＣＣｌ４這一經(jīng)典化學物建立肝損傷模型［７，８］。本研究采用ＣＣｌ４肝損傷模型，從形態(tài)學上探討GPA對小鼠ＣＣｌ４肝損傷的保護作用。

１材料與方法

１．１材料

試驗動物：昆明系小鼠，雄性，健康，１８～２０ ｇ（購于蘭州生物制品研究所）；試驗藥品：１% ＣＣｌ４橄欖油溶液、ＨＥ常規(guī)染色試劑；試驗儀器：生物顯微照相系統(tǒng)，切片機以及其他常規(guī)儀器。

１．２方法

４０只小鼠隨機分為５組，每組８只，即正常對照組、ＣＣｌ４模型組、多糖低劑量組、多糖中劑量組和多糖高劑量組。稱重，除正常對照組生理鹽水灌胃外，其他各組按０．１ ｍＬ／１０ ｇ體重的劑量灌胃１%ＣＣｌ４的橄欖油溶液。５ ｈ后3個多糖治療組按１００、２００、４００ ｍｇ／ｋｇ體重進行GPA灌胃，正常對照組與模型組用生理鹽水灌胃，持續(xù)灌服７ ｄ。處死前１０ ｈ除正常組外，其他各組再次灌服１%ＣＣｌ４橄欖油溶液。頸椎脫臼處死，摘取肝臟、脾臟，甲醛固定，制作常規(guī)石蠟切片，用ＨＥ染色，光鏡觀察，顯微照相。

２結(jié)果

２．１ＧＰＡ對ＣＣｌ４模型小鼠肝組織形態(tài)學的影響

鏡下觀察可見，正常對照組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細胞索排列整齊，無肝細胞變形、壞死等現(xiàn)象（見圖１）。ＣＣｌ４模型組小鼠的肝小葉輪廓不清，肝細胞索排列紊亂，中央靜脈重度淤血，肝細胞廣泛發(fā)生顆粒變性和水泡變性（見圖２）。多糖低劑量組小鼠的肝小葉仍不清晰，肝細胞索排列較亂，中央靜脈輕度瘀血，肝細胞有輕度的顆粒變性和水泡變性（見圖３）。多糖中劑量組小鼠的肝小葉基本清晰，肝細胞索排列相對整齊，少數(shù)中央靜脈輕度瘀血，肝細胞的顆粒變性，水泡變性減輕（見圖４）。多糖高劑量組小鼠的肝小葉清晰，肝細胞索排列整齊，部分肝細胞中央靜脈周圍只有輕度顆粒變性（見圖５）。

２．２ＧＰＡ對ＣＣｌ４模型小鼠脾臟形態(tài)學影響

正常對照組小鼠脾臟的脾小體以及周圍的紅髓、脾小梁非常清晰（見圖６）。ＣＣｌ４模型組小鼠的脾臟，脾小體、紅髓等基本正常，無明顯損傷性變化（見圖７）。多糖低劑量組小鼠的脾臟，脾小體輕度腫大，淋巴細胞增多（見圖８）。多糖中劑量組小鼠的脾臟，脾小體增大，生發(fā)中心擴大，零散性淋巴細胞增多，紅髓彌漫性增生（見圖９）。多糖高劑量組小鼠脾臟的淋巴組織增生，脾小體明顯增大，淋巴細胞增生（見圖１０）。

３討論

四氯化碳肝損傷為目前國際常用的肝炎模型之一，其中毒機制主要是四氯化碳進入機體后產(chǎn)生自由基引起膜脂質(zhì)過氧化，使膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性破壞，從而引起細胞中毒死亡［９］。已有研究指出［１０］，四氯化碳在肝臟經(jīng)細胞色素Ｐ４５０激活為自由基

·ＣＣｌ３攻擊肝細胞膜上的磷脂分子，繼而與膜脂質(zhì)和蛋白質(zhì)大分子共價結(jié)合，使蛋白質(zhì)代謝障礙，引起膜結(jié)構(gòu)和功能完整性的破壞。另外，·ＣＣｌ３可抑制細胞膜和微粒體膜上鈣泵的活性，使Ｃａ２＋內(nèi)流增加。兩種途徑最終導致肝細胞漿中可溶性溶酶滲出入血，引起肝細胞形態(tài)的改變。

本試驗中ＣＣｌ４模型組小鼠的肝小葉輪廓不清，肝細胞索排列紊亂，中央靜脈重度淤血，肝細胞水腫，呈現(xiàn)不同程度的顆粒變性和水泡變性，進一步證實了ＣＣｌ４的毒性作用；經(jīng)大蒜多糖治療后，小鼠肝臟病變明顯減輕，隨著濃度增大肝損傷減輕：肝細胞索排列逐漸清晰，中央靜脈瘀血消失，基本無水泡變性，只有輕度顆粒變性。表明大蒜多糖對ＣＣｌ４所致的化學性肝損傷有一定的治療作用，在本試驗的3個濃度中，高濃度效果最好。

脾臟作為機體的免疫器官，反映機體抵抗病變繼而產(chǎn)生免疫效應(yīng)的程度。本試驗中ＣＣｌ４模型組小鼠的脾臟也基本正常，無明顯損傷性變化；經(jīng)大蒜多糖治療的小鼠，脾小體腫大，淋巴細胞增生，生發(fā)中心擴大，且隨大蒜多糖濃度的增大作用效果也逐漸增強。表明大蒜多糖明顯增強了脾臟的免疫作用。表明大蒜多糖對ＣＣｌ４所致的化學性肝損傷小鼠有免疫應(yīng)答作用。

參考文獻：

［１］ 王文玲，黃雪松，曾莉莎．大蒜多糖的研究綜述［Ｊ］．廣州食品工業(yè)科技，２００４，２０（４）：１４４－１４６．

［２］ 陳能煜，伍睿．大蒜研究進展［Ｊ］．天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，２０００，（２）：６７－７４．

［３］ 張敏．對化學性肝損傷有輔助性保護作用的保健食品研究進展［Ｊ］．四川食品與發(fā)酵，２００５，４１（１２）：４１－４４.

［４］ 鄭敏，潘世斌，姜友定，等． 大蒜多糖對肝損傷小鼠血清和肝組織ＡＬＴ、ＡＳＴ的影響及其急性毒性實驗［Ｊ］． 咸寧學院學報（醫(yī)學版），２００３，１７（２）：８５－８７．

［５］ 騰樹保，王勝春，胡詠武，等． 五靈膠囊對小鼠免疫性肝損傷的作用［Ｊ］． 第四軍醫(yī)大學學報，２０００，２１（７）：１６１－１６３．

［６］ ＰＬＡＡ Ｇ Ｌ． Ｃｈｏｒｉｎａｔｅｄ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ： ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｓｔ ５０ ｙｅａｒｓ［Ｊ］．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ，２０００， ４０４２－４０６５．

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［１０］ 沛毅． 當歸對實驗性肝損傷小鼠的抗自由基損傷作用［Ｊ］ ．中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，１９９６，６（４）：２１－２２．