兩種方法對蘋果中維生素C含量測定的比較

摘要：為了準確地評價蘋果中的維生素Ｃ含量，比較了２，４－二硝基苯肼法和紫外分光光度法測定蘋果中維生素Ｃ的差異。結果表明，前者在波長為５００ ｎｍ處吸光度最大，水浴時間為３ｈ，溫度為３７℃。線性回歸方程為y＝０．２３２ １ｘ－０．００１ ２，Ｒ２＝０．９９９ ５；后者在２４３ ｎｍ處吸光度最大，標準曲線的Ｒ２＝０．９９８ ４，線形回歸方程為y＝０．００７ ５ｘ－０．０１４。兩種方法測定維生素Ｃ的結果分別為７．３６ ｍｇ／１００ ｇ和７．３２ ｍｇ／１００ ｇ。

關鍵詞：蘋果；維生素Ｃ；含量

中圖分類號：Ｏ６５７．３２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）16－3386-03

Comparison ｏｆ Ｔｗｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ ｉｎ Ａｐｐｌｅ

ＳＵＮ Ｐｅｎｇ，ＷＡＮＧ Ｎｉｎｇ，ＳＵＮ Ｘｉａｎ－ｆｅｎｇ

（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ＆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｘｉ’ａｎ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｘｉ′ａｎ ７１００４８， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ ｉｎ ａｐｐｌｅ， ２， ４－ｄｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ． Ｉｎ ｔｈｅ ２， ４－ｄｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅ ｍｅｔｈｏｄ， ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ５００ ｎｍ， ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｉｎ ３７ ℃ ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ ｆｏｒ ３ｈ． Ｉｔｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ （Ｒ２） ｆｏｒ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｗａｓ ０．９９９ ５， ｌｉｎｅａｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｗａｓ y＝０．２３２ １ｘ－０．００１ ２． Ｉｎ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ， ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２４３ ｎｍ， ｉｔｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ （Ｒ２） ｆｏｒ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｗａｓ ０．９９８ ４， ｌｉｎｅａｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｗａｓ y＝０．００７ ５ｘ－０．０１４ 0． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ７．３６ ｍｇ／１００ ｇ ａｎｄ ７．３２ ｍｇ／１００ ｇ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ａｐｐｌｅ； ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ； ｃｏｎｔｅｎｔ

維生素Ｃ又稱抗壞血酸，是一種重要的水溶性維生素。人體中所需的維生素Ｃ大多由新鮮的水果和蔬菜供給，由于維生素Ｃ在空氣中很容易被氧化而損失，因此測定果蔬中維生素Ｃ的含量對人們日常通過膳食補充維生素Ｃ具有科學的指導意義［１，２］。本試驗利用２，４－二硝基苯肼法和紫外分光光度法對蘋果樣品中的維生素Ｃ含量進行了測定。

１材料與方法

１．１材料

樣品：紅富士蘋果（產于陜西興平）。

草酸、２，４－二硝基苯肼、抗壞血酸、硫脲、硫酸、活性炭、鹽酸，以上試劑均為分析純，購于國藥集團化學試劑有限公司。

電熱恒溫箱、離心機、電子天平、紫外分光光度計、酸度計、勻漿機。

１．２方法

１．２．１２，４－二硝基苯肼法取１０.00 ｇ鮮樣和１０ ｍＬ ２０ ｇ／Ｌ的草酸溶液，放入研缽中研成勻漿，取勻漿液倒入1００ ｍＬ容量瓶中，用1０ ｇ／Ｌ的草酸溶液稀釋至刻度，過濾備用。取２５ ｍＬ上述濾液，加入０．５ ｇ活性炭，振搖１ ｍｉｎ，過濾。取1０ ｍＬ提取液，加入１０ ｍＬ ２０ ｇ／Ｌ草酸溶液，混勻。于３個試管中各加入４ ｍＬ稀釋液。一個試管作為空白，在其余試管中加入１．０ ｍＬ ２０ ｇ／Ｌ的２，４－二硝基苯肼溶液，將所有試管放入３７ ℃恒溫箱或水浴中保溫３ ｈ。除空白管外，將所有試管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室溫，然后加入１．０ ｍＬ ２０ ｇ／Ｌ的２，４－二硝基苯肼溶液，在室溫中放置1０～1５ ｍｉｎ后置于冰水內。向每一試管中加入體積分數為８５％硫酸５ ｍＬ，室溫放置３０ ｍｉｎ后，測定其吸收光譜。

１．２．２紫外分光光度法將樣品洗凈、擦干、切碎、混勻。稱取５．００ ｇ混勻的樣品于研缽中，加入２～５ ｍＬ體積分數為1%的鹽酸，勻漿，轉移到２５ ｍＬ容量瓶中，稀釋至刻度。取０．１～０．２ ｍＬ提取液，放入盛有０．２～０．４ ｍＬ體積分數為10%的鹽酸的１０ ｍＬ容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度后搖勻。以蒸餾水為空白，在２４３ ｎｍ處測定吸光度。分別吸取０．１～０．２ ｍＬ提取液，２ ｍＬ蒸餾水和０．６～０．８ ｍＬ １ ｍｏｌ／Ｌ的 ＮａＯＨ溶液依次放入１０ ｍＬ容量瓶中，混勻，１５ ｍｉｎ后加入０．６～０．８ ｍＬ體積分數為10%的鹽酸，混勻，加蒸餾水定容至刻度。以蒸餾水為空白，在２４３ ｎｍ處測定吸光度。

２結果與討論

２．１２，４－二硝基苯肼法

２．１．１波長的選擇圖１表明，生成肼的最大吸收波長為５００ ｎｍ，故選取５００ ｎｍ為測定波長。

２．１．２水浴時間的影響圖２表明，到３ ｈ后吸光度基本不再增加，故選擇水浴時間為３ ｈ。

２．１．３活性炭用量的影響圖３表明，當活性炭加入量低于０．１ ｇ時反應不完全，高于0.１ ｇ時反應完全，且隨著活性炭加入量的增加，吸光度基本不再變化，故選擇活性炭加入量為０．１ ｇ。

２．１．４反應溫度的影響圖４表明，當溫度低于３０ ℃時反應不完全，溫度上升至３７ ℃以上，加熱時間３ ｈ后反應完全，吸光度基本不再增加，故選擇水浴溫度為３７ ℃。

２．１．５標準曲線２，４－二硝基苯肼法的標準曲線為y=0.232 1x-0.001 2，相關系數為0.999 5（見圖5）。

２．１．６樣品測定結果在波長為５００ ｎｍ，溫度為

３７ ℃，水浴加熱時間３ ｈ，活性炭加入量為０．１ ｇ的條件下，對３組蘋果樣品提取液進行測定，測定結果見表１。

由標準曲線的回歸方程計算樣品液中維生素Ｃ濃度為０．７３６ μｇ／ｍＬ，蘋果樣品維生素Ｃ含量為７．３６ ｍｇ／１００ ｇ。

２．２紫外分光光度法

２．２．１波長的選擇圖６表明，最大吸收波長為２４３ ｎｍ，故選取２４３ ｎｍ為測定波長。

２．２．２堿處理時間的影響圖７表明，當堿加入量小于０．６ ｍＬ時維生素Ｃ在堿中反應不完全，仍有部分維生素Ｃ未反應，其吸光度隨著堿的加入面降低，而當堿加入量高于０．6 ｍＬ時吸光度基本沒有變化，故選擇堿加入量為０．６～０．８ ｍＬ。

２．２．３標準曲線紫外分光度法的標準曲線為y=0.007 5x-0.014，相關系數（R2）為0.998 4（見圖8）。

２．２．４樣品測定結果由測定數據可知，在波長２４３ ｎｍ處經堿處理和未經堿處理的蘋果樣品提取液的吸光度值分別為：０．０８７、０．０９５（圖９、圖１０）。故△Ａ２４３ ｎｍ＝０．００８ 0，查標準曲線并代入回歸方程得，樣液中維生素Ｃ含量為２．９３ μｇ，再由下式計算樣品中維生素Ｃ的含量為７．３２ ｍｇ／１００ ｇ。

Ｃ——由標準曲線查得的維生素Ｃ含量（μｇ）；

Ｖ——樣品提取液定容體積（ｍＬ）；

Ｖ１——測定時吸取樣品提取液的體積（ｍＬ）；

Ｗ——稱取樣品的質量（ｇ）。

３討論

目前，測定維生素Ｃ的常用方法包括：分光光度法、滴定法、熒光法、高效液相色譜法和毛細管電泳法等［３，４］。本試驗采用了２，４－二硝基苯肼法和紫外分光光度法。前者為國標方法，適用于蔬菜、水果及其制品中總維生素Ｃ含量的測定。后者操作簡單，不受還原性物質的干擾，也不需要特殊的儀器及試劑，常用于維生素Ｃ的快速測定［５，６］。本實驗表明兩種方法的測定結果差異不大。

參考文獻：

［１］ 羊金梅，覃超鳳，余瑞林，等． 分光光度法測定梨和蘋果中維生素Ｃ的含量［Ｊ］． 安徽醫藥，２００５，９（３）：２０５－２０６．

［２］ 李秋菊，王亞紅，劉秀萍． 維生素Ｃ的測定方法［Ｊ］． 太原師范學院學報（自然科學版），２００５，４（１）：８９－９１

［３］ 耿立威． 西紅柿中維生素Ｃ的分光光度法測定［Ｊ］． 吉林師范大學學報，２００３（３）：９１－９２．

［４］ 賀鋒嗄，哈林其木格，劉金，等． 紫外光度法直接測定蒙古酒中維生素Ｃ的含量［Ｊ］． 分析實驗室，２００１，２０（２）：９１－９２．

［５］ 陳維． 探究十種常見果蔬中維生素Ｃ含量的差異［Ｊ］． 生物學教學，２００５（１０）：５９－６１．

［６］ 呂長淮． 紫外分光光度法測定維生素Ｃ片的含量［Ｊ］． 安徽醫藥，２００３，７（２）：１４６．