Syk及HER2基因在胃癌組織中的表達及意義*

劉泓基 彭 艷 廖 玲 薄曉通 王宏偉 肖勝軍

胃癌是全球范圍內(nèi)患病率排第4位的常見惡性腫瘤，占全部癌癥的10%[1]。迄今為止，胃癌的發(fā)病機制尚未闡明。目前認為在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過程中，至少由兩個或兩個以上功能不同的異常激活的癌基因和（或）抑癌基因發(fā)揮作用。脾酪氨酸激酶（Syk）表達缺失可能與乳腺癌、肝癌、胃癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、膽囊癌等形成和轉(zhuǎn)移有關(guān)，人表皮生長因子受體2（HER2）基因和蛋白在胃癌、卵巢癌、輸卵管癌、食管癌、結(jié)腸癌和肺癌等惡性腫瘤中均有廣泛表達。在胃癌患者中，Syk基因和HER2基因表達的關(guān)聯(lián)性尚少見報道。本研究旨在探討Syk及HER2在胃癌發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移等臨床病理特征及預(yù)后中的作用，以期為Syk及HER2在胃癌表達的靶向治療提供理論參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2010年9月—2011年2月外科手術(shù)切除的資料完整的胃癌患者55例。男32例，女23例，年齡38~77歲，全部患者術(shù)前均未行放療、化療及生物制劑治療。其中腺癌高分化23例，中分化18例，低分化14例。新鮮標本均經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋，并經(jīng)HE染色組織學(xué)確診。根據(jù)2009年國際抗癌聯(lián)盟（UICC）第7版及美國腫瘤聯(lián)合會（AJCC）聯(lián)合制定的TNM分期標準進行臨床分期。腫瘤TNM分期T1+T2期23例,T3+T4期32例。另在55例胃癌患者中隨機選取20例癌旁（距癌灶5 cm以上）非腫瘤性組織作為對照。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 所用抗體克隆號為Syk（P04S066785E）、HER2（RAB-0156），即用型二抗試劑盒購自福州邁新（KIT-5010）檢測 Syk及HER2蛋白表達。（1）蠟塊4 μm連續(xù)切片，53℃孵育60 min，切片常規(guī)脫蠟和水化，PBS沖洗3次，每次3 min。（2）Syk及HER2經(jīng)檸檬酸鈉加熱法修復(fù)2 min，冷卻至室溫，切片置3%過氧化氫中10 min，PBS沖洗3次；10%血清孵育10 min。（3）一抗室溫下孵育60 min，PBS沖洗3次，每次5 min。（4）二抗試劑37 ℃孵育15 min，PBS沖洗3次。（5）DAB顯色，顯微鏡下觀察3~5 min，經(jīng)蘇木素復(fù)染、PBS返藍、分化脫水、透明封片、顯微鏡下觀察。

1.2.2 判定標準 HER2陽性染色呈棕黃色顆粒，定位于細胞膜。Syk以細胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，腫瘤細胞不著色或<10%為陰性，≥10%的腫瘤細胞著色為陽性。每例切片至少計數(shù)10個400倍視野，根據(jù)腫瘤陽性細胞數(shù)所占比例分為：10%~25%（+），26%~50%（++），51%~75%（+++），>75%（++++）。染色強度判定：不著色（-），淺棕黃色（+），棕黃色（++），棕褐色（+++）。每批染色均設(shè)陰性空白對照，以PBS代替一抗做陰性對照。綜合陽性細胞數(shù)和染色強度對染色結(jié)果進行分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較用卡方（χ2）檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Syk蛋白、HER2蛋白在胃癌中的表達 Syk、HER2在胃癌中的陽性表達率分別為21.8%（12/55）和29.1%（16/55）。在癌旁組織的中的陽性表達率分別為85.0%（17/20）和0。Syk和HER2蛋白在胃癌與癌旁組織中的陽性表達率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2分別為24.688和7.396，P<0.05或P<0.01）。

2.2 Syk與HER2蛋白表達與胃癌臨床病理特征間的關(guān)系 不同性別、年齡患者的Syk和HER2蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而不同組織學(xué)分類、TNM分期以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、漿膜浸潤及遠處轉(zhuǎn)移者，其Syk和HER2蛋白表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。分化程度越差、有漿膜浸潤、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移、TNM分期越高，其HER2陽性率越高，Syk陽性率越低；在低分化胃癌中，Syk表達缺失，見表1。

表1 Syk、HER2的表達與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系例（%）

3 討論

Syk基因最早是由日本學(xué)者于1991年從豬脾cDNA克隆出來的,該基因位于人類染色體9q22，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為72 ku，由629個氨基酸組成。Syk是一種候選抑癌基因,且是目前發(fā)現(xiàn)的唯一有抑癌作用的酪氨酸激酶（PTKs）。Coopman等[2]首先發(fā)現(xiàn)乳腺癌細胞中有Syk表達缺失現(xiàn)象,隨后大量研究表明，在多種腫瘤發(fā)病過程中存在Syk表達缺失現(xiàn)象。目前認為Syk可能通過影響細胞遷移、抑制細胞分裂和增殖、干預(yù)某些細胞因子的分泌、抑制腫瘤成瘤能力和轉(zhuǎn)移等機制影響腫瘤發(fā)生。

關(guān)于Syk基因在胃癌中的表達報道不一致，有文獻報道，Syk在胃癌中的陽性表達率為5.1%~42.4%，本組55例中癌組織中Syk蛋白陽性表達率為21.8%，另研究表明Syk在低分化胃癌中出現(xiàn)表達缺失現(xiàn)象[3-4]，與本研究結(jié)果一致。Nakashima等[4]研究認為，Syk的表達缺失與腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管侵犯相關(guān)。Carter等[5]研究認為，Syk基因在胃癌中表達失活的主要原因可能是Syk基因啟動子甲基化，Syk與HER2是一對功能相反的癌或抑癌基因，Syk可以抑制HER2的收縮血管內(nèi)皮細胞作用而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。甲基化可能是腫瘤抑制基因失活的主要原因，Syk基因啟動區(qū)CpG島甲基化是其失活的原因之一。

HER2是原癌基因，位于17q21，含1 255個氨基酸，屬于酪氨酸激酶型受體，是表皮生長因子受體家族成員之一[6]。目前認為HER2具有致瘤作用，其作用機制為抑制凋亡，促進增殖；增加腫瘤細胞的侵襲力；促進腫瘤血管新生和淋巴管新生。

最近關(guān)于胃癌細胞的研究表明，HER家族激酶的目標是放大成纖維細胞生長因子受體2和抑制HER3導(dǎo)致的細胞增殖損失的成纖維細胞因子[7]。研究數(shù)據(jù)顯示染色體上的多態(tài)性可能致胃癌中基因復(fù)制數(shù)增加，HER2基因放大是HER2蛋白過度表達的主要原因[8]。觀察胃癌和其他組織癌中HER2表達的陽性率，可以發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶高于原發(fā)灶，同時還與癌組織浸潤的深度有關(guān)。

HER2高表達與胃癌預(yù)后的關(guān)系一直有爭論。在HER3選擇性實驗中，攜帶HER2標記的在腸型胃癌和彌漫性胃癌這兩個組織學(xué)類型都和胃癌預(yù)后較差強烈相關(guān)[9]。研究表明，HER2的基因表達陽性可能是關(guān)系胃癌患者預(yù)后的一個獨立因素，可以考慮應(yīng)用新的輔助療法如赫賽汀合并化療，其被視為選擇HER2陽性的胃癌患者或胃食管連接部癌癥的一種新標準[10]。胃癌中Syk失表達及HER2過表達的機制需進一步探討，并為胃癌的早期預(yù)警提供理論依據(jù)，為臨床選取胃癌靶向治療藥物提供新的策略。

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