雷公藤多甙對 DN大鼠腎組織中Ⅳ型膠原表達的影響

陳運芬，宋 軍

(貴州省人民醫院，貴陽 550002)

近年研究認為[1]，炎癥反應、免疫因素在糖尿病腎病(DN)發病中有重要作用。中藥雷公藤多甙具有獨特抗炎、抗免疫作用，被廣泛用于免疫性疾病的治療中。Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)是構成細胞外基質(ECM)的重要生化成分，也是腎小球基底膜(GBM)的主要構成蛋白，Ⅳ-C合成和降解異常參與腎小球硬化的發生過程。2006年 6～8月，我們觀察了雷公藤多甙對 DN大鼠腎組織中Ⅳ-C表達的影響，旨在尋找治療 DN的新途徑。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雄性 SD大鼠 24只，體質量(250±20)g;雷公藤多甙，蒸餾水，鏈脲佐菌素(STZ);光學顯微鏡(100×，400×)、高溫速離心機、電熱恒溫水浴箱、CM-120透射電子顯微鏡、PCR儀。

1.2 動物分組及處理 將 24只 SD大鼠隨機分為觀察組、模型組及對照組各 8只，觀察組及模型組均經尾靜脈注射 STZ 65 mg/kg，72 h后取大鼠尾靜脈血 、留取 24 h尿 ，血糖 ＞16.65 mmol/L、尿蛋白排泄＞30 mg/24 h為 DN制模成功[2，3]。確定 DN制模成功后觀察組予雷公滕多甙 10 mg/kg+2 ml蒸餾水灌胃，模型組及對照組予等量(約 2 ml)蒸餾水灌胃 ，均為 1次 /d、連續 8周 。

1.3 內生肌酐清除率(CCr)及 24 h尿蛋白測定 給藥 8周末，用代謝籠收集各組 24 h尿液，采用放免法測 24 h尿白蛋白、測尿肌酐(U)和血肌酐(P)、全部尿量 V(ml)，按公式 U×V/P(ml/min)計算 CCr。

1.4 腎組織中Ⅳ-C表達檢測 各組上述標本取畢后處死動物，取腎組織固定、脫水、浸蠟、包埋、切片(厚度 4μm)。用免疫組化法檢測Ⅳ-C表達，常規光鏡下組織呈棕褐色者為陽性，根據顯色深淺和陽性顆粒分布分為 4級，陰性指高倍鏡下(400×)下無陽性顆粒，+指高倍鏡下(400×)有極少陽性顆粒，2+指低倍鏡(100×)下有少量、散在陽性顆粒，3+指低倍鏡下有大量呈片狀分布的陽性顆粒。均采用雙盲法，每組各測不同部位腎小球、腎小管各 40個。

1.5 統計學方法 采用 SPSS11.0軟件進行統計學處理。計量資料用±s表示、組間比較行 t檢驗，等級資料樣本間比較用秩和檢驗，檢驗水準 α=0.05。

2 結果

2.1 CCr及 24 h尿蛋白 三組給藥 8周末 CCr及24 h尿蛋白檢測情況見表1。

表1 三組給藥 8周末 CCr及 24h尿蛋白比較(n=8，±s)

表1 三組給藥 8周末 CCr及 24h尿蛋白比較(n=8，±s)

注:與對照組比較，*P＜0.05;與模型組比較，△P＜0.05

組別 CCr(ml/min) 尿白蛋白 (mg/24 h)觀察組 0.46±0.18*△ 12.21±8.36*△模型組 0.96±0.31* 18.65±6.17*對照組 0.12±0.21 4.21±1.58

2.2 腎組織中Ⅳ-C表達 模型組腎小球、腎小管中Ⅳ-C表達均明顯高于對照組，觀察組腎小球中Ⅳ-C表達顯著低于模型組(P均 ＜0.05)，觀察組和模型組腎小管中Ⅳ-C表達無顯著差異，見表2。

3 討論

DN是糖尿病的嚴重并發癥，也是其重要死因，為我國終未期腎病第二大病因，治療效果差。研究顯示，DB早期即有 GBM增厚、腎小球結構及濾過功能改變。Ⅳ-C是 GBM的基本構架及主要構成蛋白，約占GBM干體質量的50%，可決定GBM的強度及孔徑選擇性。故Ⅳ-C合成和(或)降解異常，勢必影響腎臟結構與功能。蛋白尿是糖尿病、進展性腎臟病的一種獨立危險因素，直接針對蛋白尿的干預性治療已成為目前慢性腎臟病治療的主要方法之一[4]。

表2 三組給藥 8周末腎組織中Ⅳ-C表達比較(n=8，±s)

表2 三組給藥 8周末腎組織中Ⅳ-C表達比較(n=8，±s)

組別 腎小球(n=40)腎小管(n=40)- 1+ 2+ 3+- 1+ 2+ 3+對照組 7 23 9 1 8 32 0 0模型組 4 7 11 18 9 27 4 0觀察組 7 23 8 2 30 7 3 0

雷公藤多甙是自衛矛科植物雷公藤的去皮根部經提煉和反應精制而成，具有較強的抗炎及免疫抑制作用，常用于類風濕關節炎、腎病綜合征等的治療。石詠軍等[5]運用雷公藤多苷治療早中期 DN的臨床研究表明，雷公藤多苷可顯著降低患者 24 h尿蛋白定量、尿 β2微球蛋白和血肌酐;另有研究顯示，對大量蛋白尿所致 DN患者加用雷公藤治療后蛋白尿明顯減少[6]。本實驗結果顯示，觀察組和模型組 CCr及24 h尿蛋白均顯著低于對照組，其中觀察組顯著低于模型組;模型組腎小球、腎小管中Ⅳ-C表達均明顯高于對照組，觀察組腎小球中Ⅳ-C表達顯著低于模型組。可能機制:①雷公藤多甙具有獨特的抗炎及免疫抑制作用，可抑制細胞周期多個階段 T淋巴細胞增生，抑制 IL-2、IL-6、IL-8產生。②雷公藤可能通過作用于 NF-кB抑制腎小管上皮細胞合成 MCP-1及血栓素 A2，從而影響共刺激分子表達、抑制腎小球系膜細胞增生及分泌Ⅳ-C，并改變腎小球基底膜的電荷狀態，阻止尿蛋白濾出。

綜上所述，雷公藤多苷可改善 DN大鼠腎功能，可能機制為降低腎小球組織中Ⅳ-C表達;此為DN治療提供了理論依據。

[1]Tuttle KR.Linking metabolism and immunology:diabetic nephropathy is an inflammatory disease[J].J Am Soc Nephrol，2005，16(6):1537-1538.

[2]汪深穎，司馬義.薩依木，等.糖尿病腎病大鼠胰基因組 DNA甲基化壯態的變化[J].北京師范大學學報(自然科學版)，2002，38(3):395-398.

[3]黃頌敏，陳澤君，楊亦彬，等.血管生成素及其受體、血管內皮生長因子與糖尿病腎臟微血管病變的關系[J].中華腎臟病雜志，2006，22(9):521-527.

[4]陸再英，鐘南山.內科學[M].7版.北京:人民衛生出版社，2008:495.

[5]石詠軍，劉征宇，王川，等.雷公藤多苷治療早中期糖尿病腎病的臨床研究[J].現代中西醫結合雜志，2005，15(8):987-988.

[6]張長明，周家俊.雷公藤多苷片對糖尿病腎病患者大量蛋白尿的影響[J].中國中西醫結合腎病雜志，2005，6(11):654-655.