纈沙坦對野百合堿誘導肺動脈高壓模型大鼠血漿CRP、ET-1和NO水平的影響

文 宏，李醒三，曾曉聰

(廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530021)

特發性肺動脈高壓(IPAH)是一種進展迅速且預后極差的疾病，即使給予最積極有效的治療，5年生存率僅50% ～60%［1］。目前病因及發病機制仍尚未闡明。研究發現神經內分泌因子ET/NO失衡是其重要的病理過程;炎癥在肺動脈高壓的發展過程中也可能起重要作用［2］。本實驗擬通過野百合堿(MCT)復制肺動脈高壓模型，外源性纈沙坦干預，觀察能否改善ET/NO失衡狀態從而降低肺高壓模型的肺動脈壓。

1 材料與方法

1.1 動物 健康成年雄性Wistar大鼠30只，體質量200～220 g，由廣西醫科大學實驗動物中心提供。

1.2 藥物、試劑及儀器 纈沙坦(瑞士諾華公司，商品名代文);MCT(Sigma公司);SPACE LABS 90369型心電監護系統(美國);CRP酶聯試劑盒(武漢博士德生物制品有限公司);ET-1試劑盒(北京東亞放免研究所);NO試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3 肺動脈高壓大鼠模型的建立及動物分組 參照Hayashi等方法建立肺動脈高壓大鼠模型，隨機分為單純肺動脈高壓模型組(M組)、纈沙坦干預組(V組)及正常對照組(C組)，每組10只。將MCT結晶以生理鹽水配成2%的溶液，M組和V組分別一次性項背部皮下注射MCT 60 mg/kg;C組以等量生理鹽水一次性項背部皮下注射;3組動物均同等條件下自由飲水、攝食4周后，V組以纈沙坦20mg/(kg·d)灌胃;其余仍與C、M組同等條件下繼續飼養，4周后達實驗終點。

1.4 大鼠肺動脈平均壓(mPAP)測定和右室肥大指數的計算 參照孫波等的方法測定血流動力學指標，腹腔內注射2%戊巴比妥鈉40 mg/kg麻醉后，仰臥固定，頸正中切口，分離右頸外靜脈，將一肝素化的微導管自右頸外靜脈插管達肺動脈;微導管另一端接壓力換能器并與SPACE LABS 90369型心電監護系統相連，據其壓力波形記錄mPAP。放血處死動物，取出心臟。剪除心房，分別游離右心室(RV)及左室加室間隔(LV+S)，濾紙吸水后分別稱重。以右室肥大指數［RV/(LV+S)］來反映右室的重量變化。

1.5 血漿 CRP、ET-1、NO的檢測 在進行完血流動力學檢測后，抽取其肺動脈血4 ml，4℃ 3 000 r/min離心10min，取上清液，于－70℃冰箱中保存備用。CRP用酶聯吸附反應法測定;ET-1采用放射免疫法測定;NO采用硝酸還原酶法測定，通過測定亞硝酸鹽/硝酸鹽濃度間接反映NO含量。均嚴格按試劑盒說明書進行操作。

1.6 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件，數據以±s表示，采用方差分析檢驗，3組間的總體差異、兩組間差異比較采用q檢驗，以P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 mPAP與RV/(LV+S)比較 見表1。

表1 3組大鼠m PAP、右室肥大指數的比較(±s)

表1 3組大鼠m PAP、右室肥大指數的比較(±s)

注:與 M 組比較，*P ＜0.05，△P ＜0.01

組別 n mPAP(mmHg) RV/(LV+S)(%)C 組 10 14.20 ±2.57△ 23.40 ±5.30△M 組 10 32.90 ±5.15 44.10 ±5.93 V 組 10 27.60 ±4.88* 37.80 ±4.44*

2.2 血漿中CRP、ET-1和NO含量變化 見表2。

表2 3 組大鼠 CRP、ET-1、NO 含量的變化(±s)

表2 3 組大鼠 CRP、ET-1、NO 含量的變化(±s)

注:與 M 組比較，*P ＜0.05，△P ＜0.01

組別 n CRP(mg/L) ET-1(pg/ml) NO(μmol/L)C 組 10 12.30 ±0.87△ 48.93 ±7.21△ 136.80 ±45.20△M 組 10 22.60 ±1.03 120.30 ±15.64 72.16 ±12.42 V 組 10 19.70 ±0.96* 94.58 ±9.38* 102.60 ±24.90*

3 討論

MCT是豆科植物野百合中提取的雙吡咯生物堿，在體內經肝臟轉化為吡咯野百合堿，能選擇性的作用于肺血管內皮細胞，導致內皮細胞腫脹、壞死、脫落，原位血栓形成，內皮下平滑肌增殖、遷移，導致肺動脈結構性重建，最終引起肺動脈高壓，是目前國際上公認的復制肺高壓模型之一。本實驗研究證實M組mPAP高于V組、C組，經纈沙坦干預后V組mPAP有所降低。目前研究認為，肺動脈高壓的發生涉及細胞、體液介質和分子遺傳等多個方面。血管收縮、血管重構和原位血栓是肺動脈高壓發生、發展的重要病理生理基礎［3］。本實驗發現M組CRP高于其他兩組，說明炎癥反應在肺高壓的產生和形成過程中扮演了重要的角色，與文獻報道一致［4］。經過纈沙坦干預后，CRP水平下降。同時，作為重要的神經體液調節機制，ET/NO的失衡可能是肺高壓的病理基礎之一，經過纈沙坦干預后ET/NO失衡亦有所改善。

纈沙坦為選擇性AT1受體拮抗劑，通過與AT1受體選擇性結合，從而減少AngⅡ對內皮細胞的刺激，使ET排泄增加，改善內皮功能，并切斷AngⅡ與ET的正反饋機制，同時刺激AngⅡ與AT2受體結合，使內皮細胞合成NO增加，發揮其擴張肺血管作用，從而降低肺動脈壓力;抑制血管平滑肌細胞的增殖、遷移;阻斷AngⅡ促進鈣內流的作用，減輕內皮細胞的鈣超負荷，使內皮功能失調得以糾正等機制達到對血管內皮功能的保護作用［5］。此外，纈沙坦通過阻斷血小板中的AngⅡ，對血小板聚集和血小板主要受體有持久的抑制作用，且其抗血小板的特性并不依賴于用藥劑量和療程［6］。從而抑制血小板的活化反應，改善纖溶功能，抑制血栓形成。

本研究結果顯示，經過纈沙坦干預后，可有效降低MCT性肺高壓大鼠的肺動脈壓，降低CRP等炎性指標水平［7］，改善ET/NO失衡狀態，上述結果可能與其阻斷AngⅡ與內皮細胞的結合，從而產生獨特的內皮細胞保護功能有關。

［1］Opitz CF，Wensel R，Winkler J，etal.Clinical efficacy and survivalwith first-line inhaled iloprost therapy in patients with idiopathic pulmonary arterial hypertension［J］.Eur Heart J，2005，26(18):1895-1902.

［2］Bogaard HJ，Abe K，Vonk Noordegraaf A，etal.The right ventricle under pressure:cellular and molecular mechanisms of right-heart failure in pulmonary hypertension ［J］.Chest，2009，135(3):794-804.

［3］Stenmark KR，McMurtry IF.Vascular remodeling versus vasoconstriction in chronic hypoxic pulmonary hypertension:a time for reappraisal［J］.Circ Res，2005，97(2):95-98.

［4］王毅，林偉，施舉紅.野百合堿處理大鼠肺動脈高壓模型的塑造［J］.浙江臨床醫學，2007，9(6):749-750.

［5］王高頻，趙力艷，陸紅.纈沙坦對高血壓患者血管內皮功能的影響［J］.中國心血管雜志，2004，9(5):368-370.

［6］Serebruany VL，Pokov AN，Malinin AI，et al.Valsartan inhibits platelet activity at different doses inmild tomoderate hypertensives:Valsartan Inhibits Platelets(VIP)trial［J］.Am Heart J，2006，151(1):92-99.

［7］Yang J，Jiang H，Yang J，et al.Valsartan preconditioning protects against myocardial ischemia-reperfusion injury through TLR4/NF-kappaB signaling pathway［J］.Mol Cell Biochem，2009，330(1-2):39-46.