冠心蘇合丸的物質組釋放動力學研究

江叔奇， 葛衛紅， 吳君金， 石婷婷， 許廣艷， 阮利君

(浙江中醫藥大學藥學院，浙江杭州 310053)

冠心蘇合丸源于宋代《太平惠民和劑局方》中的蘇合香丸，是由蘇合香(Styrax)、冰片(Borneolum)、乳香(制)(Resona Boswellia)、檀香(Lignum Santali Albi)、土木香(Inula helenium)等五味藥材組方而成，具有理氣、寬胸、止痛之功效，臨床用于治療心絞痛、胸悶、憋氣等病癥［1］。

丸劑是中藥傳統劑型之一，早在《五十二病方》中就有記述［2］。傳統上，中醫根據患者病情辨證論治選用劑型，丸劑常用于病屬輕緩或久病體虛余病未清等癥。然而，傳統中藥丸劑釋放特征及劑型特點的研究，目前多以中藥復方中的單一或少數組分進行。顯然，這種研究模式不能將中藥及其復方作為一個有機整體，使中醫藥失去多組分、整體性的特點。

隨著組學在現代科學技術中的應用，特別是在中醫藥研究中的應用，部分學者提出了多組分中藥釋放動力學評價方法［3-7］，即以多組分中藥物質組(化合物組)為中藥藥動學評價對象，對多組分中藥及其復方進行化合物組的釋放動力學的量化表征，評價多組分中藥制劑的釋放特征。本實驗以此為基礎，采用GC-MS法檢測，通過對不同廠家生產的和同一廠家生產的不同批號的冠心蘇合丸丸劑間的物質組釋放特征進行比較研究，為冠心蘇合丸的質量控制提供一定的參考方法。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

RCZ-6C2型溶出儀(上海黃海藥檢儀器有限公司);GC-MS-QP2010Plus氣相色譜質譜聯用儀(日本島津公司);Rtx-5MS(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)毛細管氣相色譜柱(Restek);Avanti J-26XP高速離心機(美國Beckman);Milli-Q Biocel超純水儀(美國MILLIPORE公司);JA2003N電子天平(上海精密科學儀器有限公司);KH-250DB型超聲儀(昆山禾創超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與藥品

冠心蘇合丸(A 廠，批號:8013353，9011245，9012742;B廠，批號:20081201;C廠，批號:096602;D廠，批號:20090201);無水乙醇(分析純，天津市永大化學試劑開發中心，批號:20090811);超純水(實驗室自制)。

2 原理

中藥物質組釋放/溶出動力學評價方法的基礎是:設定多組分中藥物質組含量為中藥整體性的指標，而中藥所含的化合物之間的含量特征關系是其釋放特征量化評價的依據。將多組分中藥的物質組基本組成特征視為標準譜，采用Kalman濾波法計算，獲得多組中藥在釋放介質中的物質組釋放量，并得到其釋放動力學［6-11］。

3 方法

3.1 實驗條件

氣相色譜條件:色譜柱為Rtx-5MS(30 m×0.25 mm ×0.25 μm);載氣為高純氦氣 (純度 ＞99.999%);柱體積流量 1.23 mL/min;柱前壓:75.0 kPa;進樣口溫度250℃;程序升溫:柱溫60℃，保持3 min，以15℃/min速率升溫至240℃，保持4 min;進樣方式:分流進樣，分流比為50∶1;進樣量1 μL。

質譜條件:質譜檢測模式:常規掃描模式(SCAN);電子轟擊(EI)離子源，電子能量70 eV;離子源溫度200℃;接口溫度230℃;四級桿溫度:150℃;質量掃描范圍m/z40～500;溶劑切割時間:3 min。

3.2 陰性對照溶液的配制

加入500 mL脫氣后60%乙醇溶液于溶出杯內，于(37±0.5)℃，漿法 100 r/min下攪拌 10 h，0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，依法檢測并記錄GC-MS圖。

3.3 方法學研究

3.3.1 各廠家冠心蘇合丸標準物質組溶液的制備

取各廠家冠心蘇合丸(A廠，批號:9012742;B廠;C廠;D廠)各5丸，精密稱定，分別放入研缽，加入50 mL脫氣60%乙醇溶液，研勻，再取450 mL脫氣60%乙醇溶液［12］將混懸藥液洗入溶出杯，在密閉條件下［13］，于(37 ±0.5)℃，漿法 100 r/min 下攪拌10 h，取溶出液適量，5 000 r/min離心15 min，取上清液，即得各廠家標準物質組溶液(A廠家濃度相當于8.178 mg生藥/mL;B廠家濃度相當于12.706 mg生藥/mL;C廠家濃度相當于12.450 mg生藥/mL;D廠家濃度相當于8.982 mg生藥/mL)。

3.3.2 物質組濃度標準譜測定

取適量各廠家標準物質組溶液，0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，按GC-MS法依法測定，將實驗數據導出，選取具有主要離子峰的時間段的離子強度，即得物質組濃度標準譜。

3.3.3 線性關系考察

分別精密移取A廠冠心蘇合丸標準物質組溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，置 10 mL量瓶內，加60%乙醇溶液至刻度，混勻即得0.408 9、0.817 8、1.635 6、3.271 2、4.906 8、6.542 4、8.178 0 mg生藥/mL的供試液，0.22 μm 微孔濾膜過濾，取續濾液，按GC-MS法依法測定，選取標準譜相應時間段的離子強度，并與相應的物質組濃度標準譜比較，以Kalman濾波法計算各供試液的物質組濃度，考察測定和計算方法的線性。

3.3.4 精密度試驗

取A廠冠心蘇合丸標準物質組溶液適量，0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，進樣6次，依法測定、計算各樣本物質組濃度，以考察測定和計算方法的精密度。

3.3.5 穩定性試驗

取A廠冠心蘇合丸標準物質組溶液適量，避光密封，常溫下放置，0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，分別于 0、2、4、8、16、24 h 各依法測定一次，計算各物質組溶液濃度，以考察測定和計算方法的穩定性。

3.4 不同廠家冠心蘇合丸的物質組釋放

分別取A廠，批號:9012742;B廠;C廠;D廠冠心蘇合丸各6份，每份5丸，精密稱定，放入不同的溶出杯內，采用槳法裝置［14］，釋放介質為60%乙醇溶液，在密閉條件下［13］，溫度為(37 ±0.5)℃，轉速為100 r/min，分別于 30、60、120、180、240 min 取樣10 mL，補加等量的60%乙醇溶液，5 000 r/min離心15 min，上清液以 0.22 μm 微孔濾膜過濾，取續濾液，采用GC-MS法依法測定，并計算各廠家冠心蘇合丸的物質組釋放度和Weibull分布參數。

3.5 同一廠家不同批號冠心蘇合丸的物質組釋放

分別取A廠生產的批號為8013353，9011245的冠心蘇合丸各6份，每份5丸，精密稱定，放入不同的溶出杯內，按3.4項下方法，測定各批號冠心蘇合丸的物質組釋放度和Weibull分布參數。

4 結果

4.1 陰性對照溶液的GC-MS圖譜 見圖1。

4.2 方法學研究

4.2.1 各廠家冠心蘇合丸標準物質組濃度GC-MS圖

以時間t(單位:min)為橫坐標，離子強度為縱坐標，記錄不同廠家標準物質組溶液GC-MS圖譜(圖2～5)。

圖1 陰性對照溶液的GC-MS圖譜

圖2 A廠冠心蘇合丸標準物質組濃度GC-MS圖譜

圖3 B廠冠心蘇合丸標準物質組濃度GC-MS圖譜

圖4 C廠冠心蘇合丸標準物質組濃度GC-MS圖譜

圖5 D廠冠心蘇合丸標準物質組濃度GC-MS圖譜

4.2.2 GC-MS法測定的物質組濃度線性

以生藥質量濃度(X)為橫坐標，物質組濃度(Gt)為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程Gt=0.118 5X+0.011 7(r=0.999 7)，結果表明，冠心蘇合丸溶液的物質組濃度在0.408 9～8.178 0 mg生藥/mL濃度范圍內呈良好的線性關系。

4.2.3 精密度實驗

與冠心蘇合丸物質組標準譜相比較，經Kalman濾波后，物質組濃度計算結果為(0.972 5±0.012 7)(n=6)，表明物質組濃度測定方法的精密度良好。

4.2.4 穩定性實驗

與冠心蘇合丸物質組標準譜相比較，冠心蘇合丸物質組溶液在室溫放置24 h內物質組濃度變化較小，其物質組濃度值的波動范圍為(0.994 8±0.024 0)(n=6)，說明冠心蘇合丸物質組溶液在24 h內穩定性良好。

4.3 不同廠家冠心蘇合丸的物質組釋放

采用GC-MS法測定冠心蘇合丸不同時間點釋放的物質組含量，其物質組釋放動力學評價方法計算結果顯示，不同廠家生產的冠心蘇合丸的物質組含量差異顯著(圖6)，A、B、C、D 4個廠家生產的冠心蘇合丸240 min內物質組的平均累積釋放百分率分別為(104.12 ±4.54)，(69.33 ±1.31)，(75.30 ±2.07)，(101.36 ±0.74)。計算各廠家冠心蘇合丸Weibull分布參數T50、Td，發現各廠家丸劑間T50、Td存在顯著性差異(P＜0.01)(表1～2)。

圖6 不同廠家冠心蘇合丸物質組釋放曲線(n=6)

表1 不同廠家冠心蘇合丸釋放曲線的Weilbull分布參數 ±s，n=6)

表1 不同廠家冠心蘇合丸釋放曲線的Weilbull分布參數 ±s，n=6)

廠家 T50/min Td /min A廠184.38 ±19.03 199.42 ±22.47 B 廠 186.90 ±10.71 300.06 ±34.43 C 廠 246.32 ±12.90 374.04 ±40.57 D廠114.23 ±5.89 168.07 ±10.79

4.4 同一廠家不同批號冠心蘇合丸的物質組釋放度

GC-MS法測定計算結果顯示，不同批號的丸劑在各釋放時間點的物質組釋放度有一定差異，但其

表2 不同廠家冠心蘇合丸Weibull分布參數方差分析

240 min內累積釋放的物質組含量差異不顯著，近乎均達到完全釋放(圖7)，批號為8013353、9011245、9012742的冠心蘇合丸在240 min內物質組的平均累積釋放百分率分別為:93.79 ±1.53，107.38 ±5.59，104.12 ±4.54。計算同一廠家不同批號冠心蘇合丸Weibull分布參數T50、Td，發現各不同批號丸劑間T50、Td不存在顯著性差異(P＞0.05)(表3，4)。

圖7 不同批號冠心蘇合丸物質組釋放曲線(n=6)

表3 不同批號冠心蘇合丸釋放曲線的Weilbull分布參數±s，n=6)

表3 不同批號冠心蘇合丸釋放曲線的Weilbull分布參數±s，n=6)

批號 T50/min Td /min 8013353 193.38 ±4.87 220.64 ±8.34 9011245 186.51 ±8.65 202.48 ±9.16 9012742 184.38 ±19.03 199.42 ±22.47

表4 不同批號冠心蘇合丸Weibull分布參數方差分析

5 分析與討論

5.1 方法學適用性

冠心蘇合丸物質組釋放度測定方法學考察結果顯示，中藥物質組釋放動力學評價理論用于冠心蘇合丸的物質組釋放度測定，方法可行，能夠準確對物質組進行定量。GC-MS法測定冠心蘇合丸的物質組在0.408 9～8.178 mg生藥/mL濃度范圍內呈良好的線性關系(r=0.999 7)，物質組濃度測定的精密度和測試液24 h內的穩定性均較好。

5.2 釋放介質的選擇

目前釋放度/溶出度測定常用的介質主要有水、不同濃度的鹽酸溶液、各種濃度的磷酸鹽緩沖液和醋酸鹽緩沖液［15］。但在測定某些不易溶于上述介質的藥物時，可以在介質中加入一定量表面活性劑或有機溶媒，增加溶解度，使樣品溶出速率增大。由于GC-MS法主要適用于測定脂溶性物質，而脂溶性物質在水溶性介質中溶解度較小，使藥物釋放溶出有一定的困難，根據文獻［12］的研究結果，本實驗采用60%的乙醇溶液作為釋放介質，研究冠心蘇合丸的釋放度。

5.3 樣品劑量的選擇

化學藥的溶出度測定，通常每次測定1粒(片)，而服用量多為每次1～2粒(片)。對于中藥丸劑，一般測定量不超過8丸［16］。但當冠心蘇合丸的取樣量為1丸時，某些成分的離子強度低，基線噪音較大，影響測定的準確度。因此為提高離子強度，減少實驗誤差，本實驗的測定量選擇5丸。

5.4 過濾膜的選擇及過濾操作時注意事項

取樣過濾時，應注意可能存在的損失。因濾膜與藥物間有一個吸附飽和過程，即濾膜只有吸附到一定量之后，方能達到飽和、不再吸附［17］。由于試驗中的溶出介質是60%乙醇溶液，因此在取樣過濾時應選擇有機膜，同時每次過濾時應先棄除初濾液7～8 mL，取續濾液1～2 mL作為檢測液，減少濾膜對脂溶性成分的吸附。

5.5 溶出裝置的密閉性

由于乙醇和所測定的成分大多具有揮發性，為了防止測定過程中這些成分的揮發損失，保證測定結果的準確性，本實驗按照文獻［13］的方法，即采用以橡皮墊覆蓋，密封膜包封溶出杯的方法，并在橡皮墊與槳的接觸處涂抹少量蓖麻油。這樣能有效防止乙醇、冰片等在溶出過程中的過度揮發損失。

5.6 釋放度控制標準是中藥質量控制的新視角

實驗中測定不同廠家的或同一廠家不同批號的冠心蘇合丸的釋放度，按照物質組釋放動力學評價方法，發現相同廠家不同批號的冠心蘇合丸Weibull分布參數T50和Td沒有顯著性差異(P＞0.05)，而不同廠家生產的冠心蘇合丸Weibull分布參數T50和Td卻有顯著性差異(P＜0.01)。提示中藥制劑質量控制中，在制訂含量控制標準的同時，有必要制訂基于中藥物質組釋放度的中藥復方固體制劑質量控制標準。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:化學工業出版社，2010:967-968.

［2］張兆旺.中藥藥劑學［M］.北京:中國中醫藥出版社，2003:363.

［3］陳立兵，張繼穩，葛衛紅，等.中藥物質組相關概念釋義［J］.世界科學技術—中醫藥現代化，2008，10(2):1-4.

［4］張繼穩.中藥制劑溶出度/釋放度評價及其體內外相關性評價模式.中藥產業現代化推進戰略論叢［M］，浙江:浙江大學出版社，2006:299-304.

［5］陳立兵，張繼穩，顧景凱，等.中藥制劑及給藥系統的物質組釋放/溶出動力學原理［J］.中草藥，2008，39(5):641-644.

［6］陳立兵，張繼穩，顧景凱，等.多組分中藥化合物組釋放同步性評價方法［J］.藥學學報，2008，43(6):647-651.

［7］張繼穩，陳立兵，顧景凱，等.多組分中藥化合物組釋放/溶出動力學理論研究［J］.中國天然藥物，2008，6(1):48-52.

［8］相秉仁.計算藥學［M］.北京:中國醫藥科技出版社，1990:154-159.

［9］王雁鵬，董旭輝，陳 巖，等.卡爾曼濾波分光光度法同時測定混合氨基酸［J］.光譜實驗室，2006，23(6):1166-1169.

［10］夏志新，張音波，余煜棉，等.卡爾曼濾波法用于撲熱息痛5組分混合體系分析［J］.廣州大學，2004，3(5):416-419.

［11］周 蔚，安 燕.卡爾曼濾波在多組分同時測定中的應用［J］.青海師范大學學報，2005，14(2):45-47.

［12］胡薏冰，柳克鈴，李若存，等.云威靈油軟膠囊溶出度的測定［J］.中國實用醫藥，2008，3(3):55-57.

［13］宋洪濤，郭 濤，李 麗，等.麝香保心丸中冰片的體外溶出度研究［J］.解放軍藥學學報，1999，15(2):17-21.

［14］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版二部［S］.北京:化學工業出版社，2010:附錄85-87.

［15］翁水旺，鄭麗清.藥物溶出度試驗的應用和進展［J］.中國醫院藥學雜志，2003，23(4):240-242.

［16］陳蘇偉，陳琴鳴，陳健苗.中藥制劑溶出度測定方法研究現狀與探討［J］.現代中西醫結合雜志，2005，14(15):2062-2064.

［17］謝沐風，操洪欣.溶出度測定中若干問題［J］.中國醫藥工業雜志，2006，37(12):859-862.