地錦草提取物對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究

梁生林， 李慶耀， 鐘衛(wèi)華， 顏峰光， 李正紅

(1.井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，江西吉安 343000;2.井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院功能科，江西吉安 343000)

地錦草為大戟科一年生草本植物地錦Euphorbia humifusaWild的干燥全草。全國(guó)各地均有分布，尤以長(zhǎng)江流域及南方各省為多，我國(guó)江西分布尤多。主要功效為清熱解毒、涼血止血［1-2］。課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)，地錦草煎劑腹腔注射對(duì)小鼠熱板法致痛有鎮(zhèn)痛作用［3］，但地錦草提取物灌胃給藥是否有鎮(zhèn)痛作用，水提物和醇提物鎮(zhèn)痛作用是否有差異，尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究探討地錦草水提物和醇提物灌胃對(duì)小鼠熱板法和化學(xué)刺激法致痛的鎮(zhèn)痛作用，旨在為地錦草進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

HSS-1B型恒溫浴槽(成都儀器廠生產(chǎn));FA160電子天平(上海天平儀器廠);地錦草2009年9月采于江西吉安;嗎啡注射液(沈陽(yáng)第一制藥廠，批號(hào):080701-2，規(guī)格:1 mL/10 mg);36%醋酸(上海松江佘山化工廠);昆明種小鼠(體質(zhì)量18～22 g，雌雄兼?zhèn)洌赡喜髮W(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。

2 方法

2.1 藥物配制

2.1.1 地錦草水提物的制備 取切段成2～4 cm的干燥地錦草45 g，用蒸餾水浸泡30 min，加10倍量蒸餾水(第1次多加2倍量)用文火煎煮3次，每次0.5 h，合并3次煎出液，靜置去渣，濃縮為100 mL，即濃度為45%(0.45 g生藥/mL)備用，以此作為大劑量組的給藥濃度，再配制小劑量組的給藥濃度15%(0.15 g生藥/mL)。

2.1.2 地錦草醇提物的制備 用回流提取法，將45 g干燥地錦草適度粉碎，用體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇浸泡24 h，水浴中加熱回流，放冷過(guò)濾，第1次回流1 h，第2及第3次各約0.5 h，回收乙醇，濃縮成浸膏狀，貯存?zhèn)溆谩Ｓ谜麴s水配成所需濃度，即大劑量組的給藥濃度45%(0.45 g生藥/mL)，小劑量組的給藥濃度15%(0.15 g生藥/mL)。

2.1.3 溶液配制 嗎啡溶液∶用蒸餾水配成0.1%濃度。醋酸溶液:用蒸餾水配成0.6%濃度。

2.2 地錦草提取物熱板法［4-5］鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

2.2.1 篩選實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 將小鼠置于鎮(zhèn)痛槽內(nèi)，以舔后爪出現(xiàn)時(shí)間作為痛閾的指標(biāo)。當(dāng)出現(xiàn)舔后爪時(shí)，立即記錄時(shí)間(即痛閾值)，然后取出小鼠。用此法篩選出痛閾值在5～30 s的雌性小鼠84只供實(shí)驗(yàn)用。

2.2.2 動(dòng)物分組與正常痛閾測(cè)定 將篩選好的84只小鼠，按隨機(jī)數(shù)字表法分為6組，每組14只:①組為生理鹽水對(duì)照組;②組為0.1%嗎啡溶液組;③組為地錦草水提物大劑量組(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為45%);④組為地錦草水提物小劑量組(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%);⑤組為地錦草醇提物大劑量組(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為45%);⑥組為地錦草醇提物小劑量組(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%)。將每只小鼠正常痛閾值各測(cè)2次，每次間隔5 min，取其平均值為給藥前正常痛閾值。

2.2.3 給藥 ①組生理鹽水;②組0.1%嗎啡溶液;③組45%地錦草水提物;④組15%地錦草水提物;⑤組45%地錦草醇提物;⑥組15%地錦草醇提物。小鼠均灌胃給藥，灌胃量均為0.1 mL/10 g，連續(xù)灌胃5 d，每天1次。末次給藥后30、45、60、90 min各測(cè)小鼠痛閾值，如果用藥后放入鎮(zhèn)痛槽內(nèi)60 s仍無(wú)反應(yīng)，即將小鼠取出，其痛閾值按60 s計(jì)算。

2.3 地錦草提取物醋酸扭體法［4-5］鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

取昆明小鼠84只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組:生理鹽水對(duì)照組、鹽酸嗎啡組、地錦草水提物大劑量組、地錦草水提物小劑量組、地錦草醇提物大劑量組、地錦草醇提物小劑量組。小鼠均灌胃給藥，灌胃量均為0.1 mL/10 g，連續(xù)灌胃5 d，每天1次。末次給藥30 min后，各鼠均腹腔注射0.6%醋酸0.1 mL/10 g(醋酸溶液臨用前配制)。觀察并記錄20 min內(nèi)各組出現(xiàn)的扭體反應(yīng)(腹部?jī)?nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高)次數(shù)。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 地錦草提取物對(duì)熱板法所致小鼠疼痛的影響

給藥前各組痛閾值比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05);0.1%嗎啡溶液組、45%地錦草水提物組和醇提物組給藥后與生理鹽水對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);15%地錦草水提物組給藥后30、45、60 min與生理鹽水對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);15%地錦草醇提物組，給藥后30 min與生理鹽水對(duì)照組比較有非常顯著性差異(P＜0.01)。

與自身給藥前比較，生理鹽水對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P＞0.05);0.1%嗎啡溶液組、45%地錦草水提物組、15%地錦草水提物組、45%地錦草醇提物組給藥后與給藥前比較均有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);15%地錦草醇提物組，給藥后30、45 min與給藥前比較有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 地錦草提取物對(duì)熱板法所致小鼠疼痛的影響 (±s，n=14)

表1 地錦草提取物對(duì)熱板法所致小鼠疼痛的影響 (±s，n=14)

注:與生理鹽水對(duì)照組比較，*P ＜ 0.01，＊＊P ＜ 0.05;與自身藥前痛閾比較，△P ＜ 0.01，△△P＜0.05。

12.21 ±3.23 0.1%嗎啡溶液組 10.95±2.52 18.49 ±5.65＊△ 19.52±4.40＊△ 21.19 ±5.19＊△ 19.33 ±5.91＊△45%地錦草水提物組 12.26±4.59 20.02 ±7.82＊△ 21.51±8.49＊△ 20.67 ±6.32＊△ 17.89 ±6.37＊＊△△15%地錦草水提物組 10.06 ±2.80 14.98 ±4.54＊△ 14.54 ±3.81＊＊△ 15.08±6.22＊＊△ 14.12 ±4.81△△45%地錦草醇提物組 12.62 ±3.37 26.18 ±6.03＊△ 26.16 ±5.51＊△ 26.50 ±6.31＊△ 29.81 ±6.41＊△15%地錦草醇提物組 10.9 ±3.32 15.38 ±4.23＊△ 13.98±3.98△△30 min 45 min 60 min 90 min生理鹽水對(duì)照組 11.14 ±3.19 10.16 ±2.89 11.4 ±4.01 11.21 ±2.98組別 給藥前痛閾值/s 給藥后痛閾值/s 11.87 ±3.78 10.59 ±3.24

3.2 地錦草提取物對(duì)醋酸扭體法所致小鼠疼痛的影響

0.1%嗎啡溶液組與生理鹽水對(duì)照組比較有非常顯著性差異(P＜0.01);45%、15%地錦草水提物和醇提物組與生理鹽水對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 地錦草提取物對(duì)醋酸扭體法所致小鼠疼痛的影響( ± s，n=14)

表2 地錦草提取物對(duì)醋酸扭體法所致小鼠疼痛的影響( ± s，n=14)

注:與生理鹽水對(duì)照組比較，*P ＜0.01，＊＊P＜0.05。

組別 扭體反應(yīng)數(shù)/次44.14 ±20.25 0.1%嗎啡溶液組 1.36 ±3.47*45%地錦草水提物組 21.71 ±16.2*15%地錦草水提物組 30±12.47＊＊45%地錦草醇提物組 21.14 ±17.38*15%地錦草醇提物組 25±21.09生理鹽水對(duì)照組＊＊

4 討論

地錦草具有清熱解毒、止血活血、利濕退黃等功效，現(xiàn)代藥理研究表明地錦草具有抗菌［6］、抗病毒、抗真菌［7］、止血［6］、抗氧化［8-12］、保肝［13-14］、保腎［9］等作用。民間及臨床廣泛用于上呼吸道感染，急慢性咽喉炎，急性扁桃體炎，氣管炎，肺炎，急性腸胃炎，小兒腹瀉，細(xì)菌性痢疾，病毒性肝炎，腎盂腎炎，咳血、尿血、便血，外傷所致出血、瘀血、腫痛，各種體癬等。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，大劑量地錦草水提物和醇提物可顯著提高熱板法所致的小鼠痛閾值和減少醋酸扭體法所致的小鼠扭體次數(shù)，與生理鹽水對(duì)照組比較和自身給藥前比較有顯著差異，醇提物鎮(zhèn)痛作用好于水提物，為其綜合開(kāi)發(fā)利用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。其鎮(zhèn)痛有效成份及機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

［1］中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書(shū)編輯委員會(huì).中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書(shū)·蒙醫(yī)學(xué)［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1992:120.

［2］馬清均，王淑玲.常用中藥現(xiàn)代研究與臨床［M］.天津:天津科技翻譯出版公司，1995:320.

［3］梁生林，溫定文，肖紅鈴，等.地錦草煎劑對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29(23):1993-1995.

［4］陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:366-368.

［5］龔純貴，張國(guó)慶，王希營(yíng).仙鶴草提取物鎮(zhèn)痛抗炎試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)研究［J］.藥學(xué)實(shí)踐雜志，2006，24(6):339-341.

［6］褚小蘭，廖萬(wàn)玉，樓蘭英，等.地錦類中草藥的藥理作用研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2001，12(3):193-194.

［7］古力娜·達(dá)吾提，尤麗吐孜，艾則孜·亞森，等.維藥地錦草軟膏的體外抗真菌及其對(duì)豚鼠皮膚真菌感染的治療作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2007，23(5):178-180.

［8］阿不都熱依木，阿不都艾尼，哈木拉提，等.五種維吾爾藥的清除羥自由基及抗DNA損傷作用研究［J］.中草藥，2001，32(3):236-238.

［9］張振濤，吳仁奇，張 威，等.地錦草抗氧化作用及對(duì)腎缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，1999，6(1):30-31.

［10］余集凱，薩仁高娃，霍萬(wàn)學(xué).地錦草提取物對(duì)小鼠肝組織GSH-PX和CAT活性的影響［J］.內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2005，20(2):191-193.

［11］趙宗孝，好斯巴特，湯文莉，等.五種中藥材清除自由基作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2004，15(2):71-72.

［12］曹瑞珍，魏永春，張國(guó)文，等.地錦草總黃酮對(duì)D-半乳糖衰老模型小鼠抗氧化作用研究［J］.衛(wèi)生研究，2007，36(3):387.

［13］饒光宇，陳秀芬.地錦草保肝作用研究［J］.中藥藥理與臨床，1996，12(2):24-25.

［14］曹瑞珍，魏永春，強(qiáng) 欣，等.地錦草總黃酮預(yù)防四氯化碳所致急性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18(1):85-86.