HPLC法測定健脾丸(濃縮丸)中柚皮苷和橙皮苷

袁 杰， 于江泳

(1.安徽省食品藥品檢驗所，安徽合肥 230051;2.國家藥典委員會，北京 100061)

健脾丸(濃縮丸)是由黨參、枳實、陳皮等六味中藥組成的復方制劑，具有健脾開胃的功效，用于脾胃虛弱，脘腹脹滿，食少便溏等病癥。本方收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第七冊［1］，標準中，只有一個顯微鑒別，無定量項目。枳實、陳皮作為主藥對療效起到重要作用，因此建立測定枳實，陳皮中柚皮苷和橙皮苷的方法［2-8］，控制樣品內在質量。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)，solution色譜工作站(日本島津公司)。HS10260D超聲波清洗器;柚皮苷、橙皮苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號:110722-200610和110721-200512，均為定量測定用);甲醇為色譜純，水為純化水，其它試劑為分析純;健脾丸(濃縮丸)樣品(批號:070906，寧夏啟元國藥有限公司;批號:080503，080701，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件和系統適用性試驗 色譜柱Shimpack ODS(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，柱溫 30 ℃，流動相 甲醇 －0.4%冰醋酸(30∶70)，體積流量1.0 mL/min，檢測波長 284 nm，進樣量 10 μL。理論板數按橙皮苷峰計算為8 964。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取柚皮苷對照品11.36 mg和橙皮苷對照品14.65 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，備用。

2.2.2 供試品溶液 取本品，研細，精密稱取0.5 g，置具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇50 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按處方量制成缺枳實、陳皮的陰性樣品，同2.2.2項下方法操作，即得。

2.3 專屬性試驗 分別精密吸取2.2項下的對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，結果顯示供試品溶液色譜中，呈現與對照品保留時間相同的色譜峰，陰性對照未呈現相應的色譜峰，陰性對照無干擾物質。見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 線性關系 精密稱取柚皮苷對照品11.65 mg、橙皮苷對照品13.43 mg，分別置與25 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL分別含柚皮苷0.466 0 mg、橙皮苷0.537 2 mg的混合溶液，分別精密吸取1、2、3、5、10mL混合對照品溶液置25 mL量瓶中加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取10μL，以上述2.1項液相色譜條件進行測定，峰面積Y對進樣量進行線性回歸，得回歸方程:柚皮苷Y=1.345 3×106X+2.536，r=0.999 8，線性范圍:0.186 4 ～1.864μg;橙皮苷Y=1.254 62 × 107X+25.468，r=0.999 9，線性范圍:0.214 9 ～2.149μg。

2.5 儀器精密度試驗 對照品溶液連續進樣5次，測定峰面積，柚皮苷RSD為0.53%和橙皮苷RSD為 0.41%。

2.6 重復性試驗 精密稱取同一樣品(批號:070906)6份，依上述2.2.2項下方法制備供試品溶液，按上述2.1項測定方法測定，柚皮苷平均質量分數為7.15 mg/g，RSD 為 0.9%;橙皮苷平均質量分數為 5.95 mg/g，RSD 為 0.6%。

2.7 穩定性試驗 精密稱取同一樣品(批號:070906)1份，依上述2.2.2項下方法制備供試品溶液，分別在 0、1、2、4、8、16、24 h 進樣 10μL，測定峰面積，柚皮苷峰面積RSD為0.4%和橙皮苷峰面積RSD為0.8%，結果表明供試品溶液在24 h內穩定。2.8 回收率試驗 精密稱取已測定的供試品(批號:070906，含柚皮苷 7.15 mg/g，橙皮苷 5.95 mg/g)適量(約0.25 g)6份，置錐形瓶中，分別加柚皮苷對照品1mL(18.23 mg/10mL=1.823 mg/mL)和橙皮苷對照品1mL(15.48 mg/10mL=1.548 mg/mL)，按2.2.2項下制備供試品溶液，測定柚皮苷和橙皮苷量，計算回收率，結果見表1、2。

2.9 樣品測定 取不同批次樣品，按供試液制備項下方法操作，得供試品溶液，按2.1項色譜條件分析測定，結果見表3。

3 討論

3.1 本品提取比較了加熱回流、超聲提取兩種方法，結果表明兩種方法沒有顯著差異。因此采用簡單方便的超聲提取的方法［9-10］。

表1 柚皮苷回收率試驗

表2 橙皮苷回收率試驗

表3 樣品測定結果

3.2 分別對供試品提取的溶劑量和超聲時間進行考察，分別進行用30、50、100mL溶劑和超聲20、30、50 min進行考察，結果證明用溶劑50 mL、超聲30 min時提取完全。

3.3 橙皮苷和柚皮苷的液相色譜峰相鄰［11-12］，柚皮苷色譜峰的保留時間為9.381，橙皮苷色譜峰的保留時間為10.506。如果液相色譜條件不好，兩峰分離度很難達到1.5，難以準確定量。運用本實驗液相條件分離度能達到2.5，能滿足定量的要求。耐用性試驗，運用依利特 C18(250 min×4.6 mm，5μm)和 Kromsail C18(150 mm ×4.6 mm，5μm)進行試驗分離度均能達到1.5以上。

［1］中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑第七冊［S］.北京:人民衛生出版社，1993:147

［2］梁遠園，馮 彪，倪 晨，等.HPLC法測枳實藥材中橙皮苷與柚皮苷的含量［J］.中藥新藥與臨床藥理，2006，17(5):359-361

［3］丁桂蘭，薛亞光，邢春來，等.HPLC法測定橘紅丸中柚皮苷、橙皮苷的含量［J］.中成藥，2004，26(9):706-710

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［5］唐德智.橘紅枇杷片中柚皮苷的含量測定［J］.安徽醫藥，2010，14(5):535-536.

［6］徐海燕，金 藝，張紅霞，等.HPLC同時測定胃力片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量［J］.中成藥，2010，32(8):1355-1357.

［7］王 珍，李 矗.補腎健脾顆粒質量標準研究［J］.中成藥，2010，32(7):1252-1255.

［8］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:230，176.

［9］游見明，蘭江濤.柑橘類柚皮苷提取工藝研究［J］.現代食品科技，2006，22(2):160-161.

［10］董 玄，高文遠，李鳳閣，等.RP-HPLC法測定枳殼藥材中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷［J］.中草藥，2009，40(增刊):283-284.

［11］張宏武，封宇飛，鄒忠梅.高效液相色譜法同時測定枳殼飲片中4種黃酮類化合物的含量［J］.中國新藥雜志，2008，17(18):1600-1603.

［12］李秀玲，李 龍，肖紅斌，等.反相高效液相色譜法同時測定枳實、枳殼中橙皮甙和柚皮甙的含量［J］.色譜，2002，20(6):585-586.