金屬硫蛋白在宮頸癌和膀胱癌的表達

甄紅霞 伊靈慧 王秀文 薄愛華 (河北省易縣縣醫院婦產科，河北 易縣 074200)

有報告認為〔1〕金屬硫蛋白(MT)表達的下降將導致細胞內氧化物的堆積，從而引起某些原癌基因的激活或抑癌基因的失活;然而MT異常增多時，與腫瘤的發生、發展及耐藥有明顯的相關性。然而MT與各類癌瘤組織的生物學特性的關系，看法不一〔2，3〕。本文旨在闡明MT表達與腫瘤細胞的生物學特性的關系，并為臨床制定化學治療方案提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 病例資料 選擇2006年1月至2008年10月收集易縣兩個縣級醫院、河北北方學院附屬第一、三醫院和解放軍251醫院，宮頸癌鱗狀細胞癌標本70例，膀胱移行細胞癌標本74例，共計144例，其中宮頸鱗狀細胞癌患者，年齡37～79歲，平均60歲，中位年齡54.5歲。膀胱移行細胞癌年齡35～74歲，平均57歲，中位年齡51.5歲。

1.2 免疫組織化學染色 Ⅰ抗為鼠抗人金屬硫蛋白單克隆抗體，由美國Santa Cruz公司生產。SP免疫組織化學試劑盒和DAB顯色劑，均購自北京中山生物技術公司。將新鮮癌標本固定于10%中性甲醛內，常規石蠟包埋，切片厚度5μm，HE染色進行病理診斷和病理組織分類。免疫組化染色程序嚴格按照試劑盒規程進行操作。首先切片脫蠟至水，微波修復抗原;Ⅰ抗孵育室溫過夜;Ⅱ、Ⅲ抗體孵育為37℃，各40 min。陰性對照以PBS代替Ⅰ抗;陽性對照為公司提供的已知MT陽性切片。

1.3 統計學處理 利用SPSS10.0軟件進行χ2檢驗。

2 結果

MT陽性物質呈棕黃色，分布在癌細胞的胞質內。陽性病例的癌細胞胞質呈棕黃色，陰性病例癌細胞胞質不著色。MT在各種癌瘤中的陽性率及其與分化程度、浸潤深度的相關性見表1。

表1 MT在宮頸癌及膀胱癌中的陽性表達〔n(%)〕

3 討論

據研究MT基因廣泛存在于人的實質性臟器中，其編碼蛋白與金屬離子有很強的離子螯合性，尤其是對鋅(Zn)、銅(Cu)離子結合能力更強，因此MT與許多微量元素的吸收、轉運和代謝有密切關系。據報告MT對自由基的清除能力是谷胱甘肽的38.5倍，尤其是鋅結合MT的能力最強〔3〕。另外MT也參與應激反應和細胞凋亡的調節作用〔4〕。由于致癌因子或某些刺激因子(如腫瘤壞死因子、干擾素)的作用，可以誘導(或激活)MT基因從而編碼，產生大量MT，因此有報告MT高表達與腫瘤的發生、發展和分化有相關性，在消化管及膀胱正常組織則檢測不到MT表達，良性腫瘤中MT的表達很低，復發癌瘤中MT陽性率明顯升高，因此，認為MT過表達是患者預后不良的指標之一〔5，6〕。

目前尤其引人關注的是關于MT參與腫瘤耐藥機制的問題。有人將MT基因乳頭狀病毒轉染小鼠C127型細胞，使其MT含量為原來的10倍，這種細胞對卡鉑、苯丁酸氮芥、左旋苯丙氨酸氮芥等耐藥性增加4.4倍〔7〕;凡MT增高者，均顯示對順胺氯鉑和烷化劑耐藥;MT低表達的細胞，對上述抗癌藥物敏感。如果用氯化鎘(CdCl2)誘導小鼠胚胎性纖維細胞，使其無MT基因表達，此時該細胞對烷化類抗癌藥敏感性提高。有實驗表明，MT能隔離藥物與靶DNA的作用。當MT與烷化劑等作用時，產生物理和結構上的改變，進而影響細胞內金屬離子的分布狀況，從而啟動多重化學反應，削弱烷化劑的細胞毒性作用。有實驗證明，MT含量增高的腫瘤對烷化劑(卡鉑、順鉑和亞硝基脲烷化劑等)和環磷酰胺產生耐藥，而對5-氟尿嘧啶和長春新堿敏感，其機制有進一步研究。

本實驗顯示，宮頸癌和膀胱癌中均有高表達現象(即MT含量高)，尤其MT在BTC中的陽性率很高(75.00%)，而且，癌組細胞分化低和浸潤深者陽性率更高，尤其是宮頸癌組，表現更為明顯，組間有高度差異。有報告〔8，9〕MT在消化管癌、前列腺癌、乳腺癌、子宮內膜癌等，陽性率50% ～75%，說明MT在許多實體瘤中呈高表達現象，而且MT高表達是癌組織惡性度高和預后不良的指標之一。

目前我國中小型醫院由于化驗條件的限制，很少檢測MT在癌瘤中的表達狀況，而在消化管癌、宮頸癌或膀胱癌輔助化療中采用的復合方案中(如VPB或BOMP方案)都含有鉑類藥物(卡鉑、草酸鉑或順鉑等)〔10〕。如果患者癌組織中MT呈高表達狀態，對此類藥物敏感性下降;對MT陰性患者利用這些藥物則能夠增加敏感性。本實驗提示，如果臨床病理能夠廣泛開展耐藥基因蛋白的檢測(其中包括MT)，將對提高化療效果有很大幫助，尤其是對多藥耐藥基因蛋白的檢測，將對提高患者生存率和生活質量有重要意義。

1 張曉麗，薄愛華.金屬硫蛋白與腫瘤相關性的研究進展〔J〕.河北北方學院學報(醫學版)，2009;26(2):78-80.

2 Yamasaki Y，Smith C，Weisz D，et al.Metallothionein expression as prognostic factor for transitional cell carcinoma of bladder〔J〕.Urology，2006;67(3):530-5.

3 高社全，霍韶軍，董海燕，等.金屬硫蛋白與膀胱移行細胞癌的相關性研究〔J〕. 疑難病雜志，2009;8(2):102-3.

4 Popiela TJ，Rudnicka-Sosin L，Dutsch-Wicherek M，et al.The metallothionein and RCAS1 expression analysis in breast cancer and adjacent tissue regarding the immune cells presence and their activity〔J〕.Neuro Endocrinol Lett，2006;27(6):786-94.

5 程 琳，鄭海軍，岳樹春，等.檢測膀胱癌TopoⅡα和MT對指導化療藥物的選擇價值〔J〕.陜西醫學雜志，2007;36(1):47-8.

6 Alessendro S，Giacomo LS，Vincenxe A，et al.Metallothionein-1 and metallothionein-2 gene expression and localization in apoptotic cell in Zntreated LEC rat liver〔J〕.Histochem Cell Biol，2003;119(4):301-8.

7 白 嵐，周榮祥，李墨農，等.金屬硫蛋白在前列腺癌中的表達及臨床意義〔J〕.臨床軍醫雜志，2008;36(6):205-6.

8 張國徽，姬宏宇，薄愛華.耐藥標志物TOPOⅡ和 MT在宮頸鱗癌中的表達及意義〔J〕.陜西醫學雜志，2005;34(6):697-9.

9 Bo AH，Zhang H，Zhang X，et al.Clinical signification on the expressions of metallothionein in three types cancer of woman〔J〕.Chinese-German JClin Oncol，2008;7(1):59-60.

10 段楊平，濮德敏，李 天，等.金屬硫蛋白在子宮內膜癌中的表達及意義〔J〕.中國婦幼保健，2008;23(17):19-20.