雞新城疫活疫苗種毒HB1株和F株保存期試驗

吳 濤，毛婭卿，王 嘉，王 哲，蔣桃珍

(中國獸醫藥品監察所，北京 100081)

雞新城疫(ND)是一種具有高度傳染性的病毒性疾病，世界各地養禽業均采用疫苗進行免疫接種來控制雞新城疫的發生［1］。雞新城疫病毒HB1株(Ⅱ系)和F株(Ⅲ系)是制備雞新城疫低毒力活疫苗的生產用毒種，《中華人民共和國獸用生物制品規程》［2］(二〇〇〇年版)中規定，雞新城疫病毒HB1株和F株，在－15℃以下，保存期為6年。對疫苗生產用毒種的繁殖凍干與檢定，不僅需要較長的時間，還消耗一定的人力、物力和財力，增加污染外源病毒的機會，因此需要對毒種制定更加合理的保存期。

1 材料和方法

1.1 材料 雞新城疫病毒HB1株(Ⅱ系)，本實驗室分別在1993年6月、1997年3月、2003年2月繁殖凍干，檢定合格后交菌種保藏室－70℃保存。雞新城疫病毒F株(Ⅲ系)，本實驗室分別在1989年12月、1995年4月、2001年3月繁殖凍干，－70℃保存。雞新城疫強毒(北京株)，中國獸醫藥品監察所2006年6月凍干、檢定，－70℃保存。

SPF雞:1月齡，SPF雞胚:10日齡，均購自北京梅里亞維通實驗動物技術有限公司。

1.2 方法

1.2.1 毒種病毒含量測定 每批凍干的毒種在試驗時從－70℃冰柜中任取3支，按照《中華人民共和國獸用生物制品規程》(二〇〇〇年版)中病毒含量測定方法，分別按瓶簽注明的裝量加滅菌生理鹽水恢復后，繼續做10倍系列稀釋至 10－9，取10－7、10－8、10－9三個滴度，各經尿囊腔途徑接種 10日齡SPF雞胚5枚，每胚接種0.1 mL，至37℃條件孵育，每日照蛋。孵育120 h后，取出所有活胚，逐個收獲胚液，分別測定血凝價;48～120 h死胚(48 h以前死胚，棄去不計)同一稀釋度等量混合，分別測定血凝價，計算EID50。

1.2.2 毒種的免疫原性鑒定

1.2.2.1 接種 每批種毒任取1支，用滅菌生理鹽水分別進行稀釋，使其含毒量分別為2500 EID50/0.1 mL、5000 EID50/0.1 mL 和 10000 EID50/0.1 mL，每個滴度滴鼻接種1月齡SPF雞10只，每只滴鼻0.1 mL;同時設空白對照5只，隔離飼養觀察14 d。

1.2.2.2 攻毒 取ND強毒(北京株)1支，用滅菌生理鹽水進行105倍稀釋后，對所有雞進行攻毒，每只雞肌肉注射1 mL(含毒104ELD50/mL)，隔離飼養觀察14 d。

2 結果

2.1 毒種的病毒含量測定 結果如表1、表2所示。

表1 不同保存年代的新城疫病毒HB1株病毒含量測定結果

表2 不同保存年代的新城疫病毒F株病毒含量測定結果

由表1和表2可以看出，雞新城疫病毒HB1株和F株毒種在－70℃分別保存16年和19年，病毒含量仍符合《中華人民共和國獸用生物制品規程》(二〇〇 〇 年 版)［2］規 定 (病 毒 含 量應 ≥108.0EID50/0.1 mL)。

2.2 毒種的免疫原性鑒定 結果如表3、表4所示。

表3 不同保存年代的新城疫病毒HB1株免疫原性試驗結果

表4 不同保存年代的新城疫病毒F株免疫原性試驗結果

由表3和表4可以看出，雞新城疫病毒HB1株和F株毒種在－70℃分別保存16年和19年，免疫原性仍符合《中華人民共和國獸用生物制品規程》(二〇〇〇年版)中最小免疫量應≤5000 EID50的規定。

3 討論

3.1 對疫苗生產用毒種的繁殖凍干與檢定，不僅需要較長的時間，消耗一定的人力、物力和財力，而且還會增加污染外源病毒的機會，因此需要對毒種的保存制定更加合理的保存期。按照《中華人民共和國獸用生物制品規程》(二〇〇〇年版)的規定，雞新城疫病毒HB1株和F株毒種在－15℃的保存期為6年。從本試驗的結果看，新城疫病毒HB1株毒種在－70℃條件下保存6年、12年、16年;新城疫病毒F株毒種在－70℃條件下保存8年、14年、19年，病毒含量、免疫原性均無明顯變化，均符合《中華人民共和國獸用生物制品規程》(二〇〇〇年版)規定。本試驗結果表明，可延長新城疫病毒HB1株和F株毒種的保存期。

3.2 雞新城疫病毒HB1株和F株毒種在繁殖凍干時已按《中華人民共和國獸用生物制品規程》(二〇〇〇年版)進行了相應的鑒定工作，此次保存期試驗對不同保存年代毒株的病毒含量和免疫原性進行試驗，結果均符合規定，表明該毒株在－70℃保存15年以上仍可作為制備雞新城疫低毒力活疫苗毒種使用。

［1］殷 震，劉景華.動物病毒學［M］.第2版.北京:科學出版社，1997:748－749.

［2］農業部獸用生物制品規程委員會.中華人民共和國獸用生物制品規程(二〇〇〇年版)［M］.北京:化學工業出版社，2000:220－221.