痛風舒浸膏粉對大鼠痛風性關節炎的治療作用

曾祥永，周錫國，裴太蓉

1.重慶市南岸區中醫院骨科，重慶 400060；2.重慶市中藥研究院，重慶 400065

痛風性關節炎是一種常見的代謝性疾病，臨床以關節紅、腫、熱、痛，血清尿酸鹽增高為特點。近年來，隨著生活水平的提高，發病率有明顯增加，已成為當今世界中老年男性的常見病。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 雄性Wistar大鼠40只，體重140～160 g。普通飼料喂養，自由飲水。

1.1.2 主要試劑 痛風舒浸膏粉（1 g浸膏粉相當于5 g生藥；批號：000306，由重慶南岸區中醫院骨科提供）臨用前用生理鹽水配制成所需濃度；雙氯芬酸鈉腸溶片，25mg/片，由大連百利天華制藥有限公司生產。5-羥色胺 （5-HT）、鉀離子（K+）、多巴胺（DA）、去甲腎上腺素（NE）標準品及尿酸鈉結晶均購自Sigma公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 尿酸鈉溶液的制備 取194 ml蒸餾水加6 ml NaOH（1 mol/L）。 煮沸后加 1 g尿酸，用 1 mol/L HCl，調 pH 至 7.2，攪拌冷卻，貯存于4℃冰箱中24 h，去上清液，用濾紙將沉淀物水分吸干，干燥即可得尿酸鈉結晶。取1 250 mg尿酸鈉結晶，加入45 ml生理鹽水，同時加入5 ml吐溫80，加熱攪拌，配成50 ml尿酸鈉溶液備用。

1.2.2 模型制作 參照Coderre等[1]的經典造模方法略作改進。用6號注射針在受試大鼠右側踝關節背側從45°方向插入脛骨肌肌腱內側，將0.2 ml尿酸鈉溶液（濃度為2.5 g/100 ml）注入踝關節腔。正常組動物用生理鹽水代替尿酸鈉溶液。

1.2.3 動物分組 將動物隨機分成4組（10只/組）：正常組、模型組、雙氯芬酸組、痛風舒浸膏粉組。各組連續灌胃給藥5 d，每日1次，正常組和模型組給予生理鹽水灌胃，雙氯芬酸組給予雙氯芬酸3 mg/kg，痛風舒浸膏粉組給予痛風舒浸膏粉1.2 g/kg（為60 kg體重成人臨床日用量的4倍）。給藥體積均為1 ml/100 g體重。

1.3 觀察指標

1.3.1 關節腫脹度測量 各組大鼠在造模后3 h（用藥前），及用藥后5 d，分別在受試踝關節相同部位，用無彈性軟尺測量其周徑，觀察造模大鼠治療前后各組受試關節周徑的變化。

1.3.2 受試關節關節腔滑液的涂片觀察 各組大鼠用藥5 d后處死，取受試踝關節，清洗干凈，用手術刀剖開關節腔，取關節滑液涂于載玻片上，瑞氏染色，顯微鏡下觀察各組大鼠關節滑液的白細胞，觀察5個100倍視野，計算白細胞平均數。

1.3.3 致痛物質K+、DA、5-HT含量的測定 各組大鼠處死后，取受試關節周圍軟組織，制成勻漿，比色法檢測K+，熒光分光光度法檢測DA、5-HT的含量。

1.4 統計學處理

數據以均數±標準差（x±s）表示，采用SPSS 13.0統計軟件進行方差分析及t檢驗，各組數據行單因素方差分析，組間變量行兩兩比較的SNK法分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 藥物對關節周徑的影響

見表1。

表1 用藥前后受試關節周徑的變化（x±s，cm）

由表1可知，用藥前正常組大鼠關節周徑顯著小于其他各組（P＜0.05），其他各組間無明顯差異（P＞0.05）。 用藥后正常組大鼠關節周徑仍顯著小于其他各組（P＜0.05），模型組關節周徑顯著大于雙氯芬酸組和痛風舒浸膏粉組（P＜0.05）。正常組和模型組用藥前后關節周徑無明顯差異（P＞0.05），雙氯芬酸組和痛風舒浸膏粉組用藥后關節周徑縮小（P＜0.05）。

2.2 藥物對受試關節滑液涂片白細胞計數的影響

見表2。

表2 各組治療后關節滑液中白細胞計數（x±s，個/HP）

由表2可知，與正常組比較，其他各組關節滑液中白細胞數均有顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，雙氯芬酸組和痛風舒浸膏粉組治療后關節滑液中白細胞數均有顯著降低（P＜0.05），而雙氯芬酸組和痛風舒浸膏粉組間無明顯差異（P＞0.05）。

2.3 關節周圍軟組織中疼痛介質的含量

見表3。由表3可知，模型組受試關節周圍軟組織中致痛物質 K＋、DA、5-HT 的含量均顯著高于其他三組（P＜0.05），氯芬酸組和痛風舒浸膏粉組受試關節周圍軟組織中K＋含量顯著高于正常組（P＜0.05）。

3 討論

大量研究表明，痛風性關節炎是炎癥介質尿酸鈉沉積于局部關節組織引起的炎癥反應[1-3]。故直接注射尿酸鈉溶液于模型動物的關節腔內造成痛風性關節炎是最直接的方法。本實驗采用Coderre等[1]設計的尿酸鈉局部關節注射的經典造模方法，采用0.2 ml尿酸鈉溶液注入大鼠右側踝關節腔造成急性痛風性關節炎模型，觀察到治療前正常組大鼠受試關節周徑顯著小于其他各組（P＜0.05），說明痛風性關節炎造模成功。本方法具有操作簡便、成功率高的特點。

表3 受試關節周圍軟組織中疼痛介質的含量（x±s）

痛風性關節炎是因體內嘌呤代謝物紊亂，血中尿酸合成增多和（或）排出減少致血中尿酸濃度增高，尿酸鈉針狀微結晶體沉積在關節囊及其周圍組織所致。祖國醫學認為痛風屬風寒濕三氣雜致，后期久病入絡，瘀血凝滯，關節肥厚，活動受限[4]。中醫治療在急性期以清熱利濕、祛風通絡為主，后期治療除利濕通絡外，佐以活血化瘀[5]。

痛風舒浸膏粉是由牛膝、忍冬藤、黃柏、赤芍等成分組成的中藥復方制劑，具有利尿、改善血瘀模型大鼠的血液黏滯性及活血化瘀的作用。本實驗研究其對痛風性關節炎的治療作用及機制。實驗結果顯示痛風舒浸膏粉能明顯縮小受試關節周徑，減少關節滑液中白細胞數量，說明痛風舒浸膏粉能抑制尿酸鈉所致大鼠關節腫脹和局部炎癥反應。

關節疼痛是痛風性關節炎的主要表現。引起痛風關節疼痛的內源性致痛物質主要有：無機離子，如K＋、H＋等；某些單胺類神經遞質，如5-HT、NE、組織胺等；肽類，如P物質、前列腺素、緩激肽等。這些物質在體內產生過多，通過刺激局部感受神經末梢外周感受器產生很強的致痛效應。本實驗顯示造模后受試關節周圍軟組織中K＋、DA、5-HT濃度均明顯升高，而應用痛風舒浸膏粉能明顯降低K＋、DA、5-HT的濃度，說明痛風舒浸膏粉對急性痛風性關節炎具有鎮痛的作用。

[1]Coderre TJ,Wall PD.Ankle joint urate arthritis(AJUA)in rats:an alternative animal model of arthritis to that produced by Freund's adjuvant[J].Pain,1987,28(12):379-393.

[2]時樂,徐立.痛風性關節炎動物模型的研究現狀與展望[J].中國實驗動物學報,2006,14(1):71-74.

[3]徐權毅,管云楓,徐添穎,等.痛風性關節炎大鼠的制備及三種關節腫脹度檢測方法的比較[J].第二軍醫大學學報,2007,28(8):906-908.

[4]張莉梅,李佩臣.痛風性關節炎中醫治療新進展[J].中醫藥信息,2000,17(5):16-17.

[5]楊保林,丁崗.痛風性關節炎中醫論治淺析[J].中國中醫藥現代遠程教育,2010,8(8):201-202.