激素劑量重復超排和季節對利木贊牛超數排卵的影響

王 軍,張嘉保,呂文發

(1.遼寧醫學院畜牧獸醫學院,遼寧 錦州 121001;2.吉林大學農學部實驗動物中心,吉林 長春 130062;3.吉林農業大學動物科學技術學院,吉林長春130118)

利木贊牛自從1974年引入中國后,其以難產率低、后期生長快和產肉量大等優點備受歡迎。近年來通過雜交改良當地黃牛獲得了很大的效益,但是所引進的母牛絕大多數通過自然繁殖擴大純種群,純繁效率低,使得利木贊種牛存留的數量少,并且分布也很分散[1]。因此,快速擴大純種利木贊牛數量是當前肉牛業發展亟待解決的問題之一。胚胎移植技術是目前加快良種繁育的最有效手段。超數排卵技術是胚胎移植的關鍵技術之一,超數排卵效果的好壞直接影響著獲得胚胎的質量和數量。目前,有關利木贊牛超數排卵的報道較少,本試驗研究了激素劑量和季節對利木贊牛超數排卵效果的影響,為獲得高效穩定的利木贊牛超數排卵技術奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 選擇體質健康、發情周期正常的利木贊母牛。

1.2 主要藥品 Folltropin-v:加拿大生產的FSH產品,400 mg/支,20 mL配比液;氯前列烯醇(PGF2α):上海計劃生育科學研究所生產;杜氏磷酸鹽緩沖溶液(本實驗室自制)。

1.3 超數排卵方案 在母牛發情周期第8天通過直腸檢查法確定供體牛卵巢上確有黃體存在,在母牛發情周期的第9天開始分別肌肉注射總劑量為340 mg(n=9)、300 mg(n=9)和 260 mg(n=7)的Folltropin-v,每天上午、下午各注射 1次,連續4 d采用劑量遞減法注射,注射FSH的第3天(第5、6次)同時注射 PGF2α,上午、下午各注射 0.4 mg,發情10～12 h后給母牛進行第一次人工授精,間隔12 h進行第2次人工授精。

第1次超數排卵43 d后,用總劑量為300 mg的Folltropin-v對所有的供體牛進行第2次超數排卵,超數排卵程序與第1次相同。

1.4 胚胎采集 以發情當天為第0天,在發情AI后第7天用非手術法進行采卵,利用德式兩通沖卵管插入一側子宮角并固定氣囊開始沖洗,每次用25～35 mL,分多次沖洗子宮角,同時手通過直腸按摩子宮角,每側子宮角總用量為250 mL,沖完一側后換到另一側沖洗,兩側沖洗完畢后,向子宮內投入一定量的抗生素和PGF2α。

1.5 胚胎質量評定 將回收的沖卵液放到培養皿中,在體視顯微鏡下找到胚胎后,轉移到小培養皿中,并根據形態學標準評定胚胎質量。將胚胎分為A、B、C、D級,其中A 、B、C 級為可用胚胎 。

1.6 統計分析 試驗結果采用SPSS 16.0進行統計分析。

2 結果

2.1 激素劑量對超數排卵效果的影響 挑選25頭利木贊供體母牛,隨機分為A、B、C三組,分別注射總劑量為340 mg(n=9)、300 mg(n=9)和260 mg(n=7)的Folltropin-v進行超數排卵,第1次超數排卵結束43 d后采用300 mg的總劑量對所有供體牛進行第2次超數排卵,超數排卵結果見表1。從表1可以看出,對于第1次超數排卵的結果,A組和B組獲得的可用胚數顯著高于C組(P＜0.05),而A組和B組之間差異不顯著,說明340 mg和300 mg的Folltropin-v能獲得相同的超數排卵效果,且明顯比300 mg效果好。對于兩次超數排卵,A組第2次超數排卵獲得的可用胚數明顯低于第1次(P＜0.05),B組兩次超數排卵之間差異不顯著,C組第2次超數排卵獲得的可用胚數顯著高于第1次(P＜0.05)。對于A、B組和C三組,兩次超數排卵獲得可用胚總數,A組與B組差異不顯著,C組顯著低于A組和B組(P＜0.05)。

2.2 季節對超數排卵效果的影響 對75頭供體牛在春季、秋季和冬季以總劑量為300 mg的 Folltropin-v進行超數排卵,超數排卵結果見表2。從表2可以看出,春季超數排卵效果明顯低于秋季和冬季(P＜0.05),而秋季和冬季之間差異不顯著。

3 討論

3.1 激素劑量對利木贊牛超數排卵效果的影響激素的劑量對于超數排卵效果具有很大的影響,激素劑量過高會對胚胎和卵子有毒害作用,反之,劑量過低,不能有效地促進較多量的卵母細胞同時發育,也就達不到好的超數排卵效果。因此想要獲得良好的超數排卵效果,必須選擇合適的激素劑量。本試驗對A、B組和C三組供體牛的第1次超數排卵研究表明,340 mg和300 mg的Folltropin-v能獲得相同的超數排卵效果,且明顯比260 mg效果好,這說明260 mg的劑量偏低,不能充分發揮超數排卵的優越性。而43 d后,用總劑量為300 mg的Folltropin-v對A、B、C三組供體牛進行第2次超數排卵時,發現兩次超數排卵獲得可用胚胎總數,A組和B組差異不顯著,但明顯高于C組。這表明300 mg的Folltropin-v是利木贊牛超數排卵的最佳劑量,且這個劑量不影響重復超數排卵(第2次)的效果;而A組的供體牛用340 mg超數排卵后,再用300 mg的劑量進行超數排卵,反而降低了超數排卵效果,這說明340 mg的劑量雖然不影響第1次超數排卵的效果,但是可能會影響緊接著的下一次超數排卵效果,其原因還有待于深入研究。對于本研究,雖然A組(340 mg)和B組(300 mg)兩次超數排卵獲得的可用胚胎總數差異不顯著,但從實際應用角度來講,在不影響超數排卵效果的情況下,減少用藥量對于降低胚胎成本是有益的,有利于胚胎移植的推廣和應用。國外學者的一些研究也表明適當降低激素劑量不會影響超數排卵效果,Martens等報道適當減少 FSH產品的劑量,不影響超數排卵效果[2],Sugano等的研究也發現注射16 mg和24 mg的FSH產品獲得的可用胚數差異不顯著[3]。

表1 激素劑量對利木贊牛超數排卵效果的影響

表2 季節對利木贊牛超數排卵效果的影響

3.2 季節對利木贊牛超數排卵效果的影響 關于季節對牛超數排卵效果影響的研究,目前結果不一。和占星認為季節對可用胚數的影響不顯著[4],王木等研究表明季節對南陽牛超數排卵效果無明顯影響[5]。Barati等研究也發現不同季節對牛超數排卵獲得的可用胚胎數差異不顯著[6]。而吳亦方等報道季節對超數排卵效果有顯著影響,且春季獲得的可用胚數明顯低于秋季和冬季[7]。徐照學等也認為秋、冬季超數排卵效果好于春季[8]。本試驗研究發現季節對利木贊牛超數排卵效果有顯著影響,春季超數排卵效果顯著低于秋季和冬季,這些研究結果的差異可能是由品種、飼養管理條件和超數排卵方案等因素造成的。

4 結語

4.1 激素劑量對利木贊牛超數排卵效果有顯著影響,劑量過高可能會影響下次超數排卵效果,使用Folltropin-v對利木贊牛超數排卵的最佳劑量為300 mg。

4.2 季節對利木贊牛超數排卵效果有顯著影響,且春季獲得的可用胚數顯著低于秋季和冬季,秋季和冬季之間差異不顯著。

[1]張國坪,何志軍,王統一,等.建立中國西部利木贊肉牛擴繁育肥基地及產業開發的可行性分析[J].中國牛業科學,2007,33(4):42-45.

[2]Martens G,Nohner H,Leiding C,et al.Optimizing frequency of FSH application for superovulatory treatment in cattle[J].Reproduction,Fertility and Development,2005,17(2):313-314.

[3]Sugano M,Watanabe S.Use of highly purified porcine FSH preparation for superovulation in Japanese black cattle[J].T he Journal of Veterinary Medical Science,1997,59(3):223-225.

[4]和占星,松崎伸生.不同超排處理的效果及可用胚數的影響因素分析[J].黃牛雜志,2000,26(5):12-15.

[5]王木,王新莊,牛暉,等.南陽牛超數排卵研究[J].中國農學通報,2006,22(8):47-49.

[6]Barati F,Niasari-Naslaji A,Bolourchi M,et al.Superovulatory response of Sistani cattle to three different doses of FSH during winter and summer[J].Theriogenology,2006,66(5):1149-1155.

[7]吳亦方,高紅梅,王海,等.多種因素對奶牛超數排卵效果影響的研究[J].中國畜牧雜志,2007,43(7):10-12.

[8]徐照學,李峰,王二耀,等.牛超數排卵技術的研究[J].黃牛雜志,1999,25(3):17-18.