慢性乙型肝炎患者的e抗原、前S1抗原與HBV-DNA檢測及相關性分析

劉吉純 張艷菊

我國是乙型肝炎病毒高流行地區，在乙型肝炎的診斷中，習慣用以HBeAg是否陽性來判斷乙型肝炎患者體內乙型肝炎病毒[1]，但由于HBeAg變異株的出現，僅僅依靠檢測乙肝五項標志物中的HbeAg來判斷HBV)的復制及傳染性的強弱顯然是不可靠的，HBV-DNA是被認為診斷乙肝病毒是否復制和有無傳染性的“金標準”[2]，HBV前S1抗原(Pre-S1)也是近年來公認的HBV感染、復制和乙肝患者診斷、治療和預后的一個重要標志[3]，為此，本文觀察分析了慢性乙型患者的e抗原、前S1抗原與HBV-DNA含量在反映乙肝病毒復制方面的相關性及臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 598份血清標本均來自我院內科門診和病房e抗原為陰性的慢性乙型肝炎患者，其中男328例，年齡28～71歲，平均年齡(52.5±10.2)歲;女270例，年齡26～77歲，平均年齡(56.5±12.5)歲。所選患者均有肝病史5年以上，符合慢性肝病的診斷標準。

1.2 儀器與試劑 乙肝五項檢測試劑盒有上海科華生物技術有限公司生產，Pre-S1Ag試劑盒由上海阿爾法生物技術有限公司提供，兩種試劑酶標儀器均為芬蘭Multiskan MK3酶標檢測儀;HBV-DNA檢測儀器為SLAN熒光定量PCR儀，試驗盒由上海申友生物技術有限責任公司提供。所用試劑盒均通過衛生部批檢，并貼有防偽標簽，均在有效期內，加樣所用移液器均為上海求精生化試劑儀器有限公司生產，均經過市計量局校正。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法 早晨抽取患者空腹靜脈血3～5 ml加入無抗凝劑的干燥試管或含促凝分離膠真空管，放置37℃水浴箱，待凝固后離心分離血清，1～2 h內開始檢測。血清乙肝五項和前S1抗原檢測應用ELISA方法，HBV-DNA采用聚合酶鏈反應(PCR)方法定量檢測，上述檢測均嚴格按照試劑盒和儀器操作說明書進行加樣、洗板以及比色，乙肝五項和前S1抗原按酶標儀結果判讀陰陽性，HBV-DNA以大于106copies/ml為陽性。

1.3.2 分組分析 按照乙肝五項常見模式分組，將e抗原為陰性的慢性乙型肝炎患者分為3組:小三陽組248例(“HB-sAg+，抗-HBe+，抗-HBc+”)，1、4 陽性組(HBsAg+、抗-HBe+組)220例;1、5陽性組(HBsAg+、抗-HBc+組)130例，將以上3組血清Pre-S1、HBV-DNA陽性率進行統計并比較分析。

1.3.3 統計學方法 采用SPSS 17.0統計分析軟件對檢測結果進行分析，計量資料以均數±標準差()表示，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05差異有統計學意義。

2 結果

598例e抗原為陰性的慢性乙型肝炎患者中，小三陽組Pre-S1Ag陽性率為77.1%(191/248)，HBV DNA平均含量為5.26±1.32(×106copies/ml)、陽性率為70.7%(175/248)，均分別高于1、4陽性組和1、5陽性組，差異有統計學意義(P＜0.05)，1、4陽性組和1、5陽性組的 Pre-S1Ag陽性率、HBV DNA平均含量以及陽性率比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，結果見表1。

表1 慢性乙肝Pre-S1陽性率、HBV-DNA平均含量、陽性率的比較

3 討論

乙型肝炎病毒(HBV)附著于肝細胞上，最重要的介導部位是前S1蛋白的氨基酸(AA)21-47片段，變異的病毒只要在這一區段完好就有傳染性，因此，前S1蛋白(抗原)在病毒侵入肝細胞過程中起重要作用，近年來越來越多的研究[4～5]表明，前S1抗原作為HBV血清學新的標志物能夠充分反應機體的體液免疫狀況，對乙肝病毒感染的早期診斷和判斷預后顯現出了較高的臨床應用價值，HBV-DNA檢測是判斷病毒復制活躍和具有傳染性的直接可靠依據，能夠直接檢測患者血清中病毒的拷貝數量，從而反映患者機體內病毒血癥的水平。本文檢測結果和分組統計顯示，無論是小三陽組還是其他兩組，Pre-S1Ag的陽性率和HBV DNA陽性率有很好的正相關性，也進一步表明Pre-S1Ag是判斷病毒復制活躍和具有傳染性的一項重要指標。

乙肝五項指標做為乙肝病毒血清標志物在臨床應用已經有二十多年，其臨床意義已經被人們所熟悉，臨床上判斷HBV的復制和傳染性過去常常以HBeAg作為一個重要指標，HBeAg陽性被認為乙肝病毒在機體內有較強的復制和傳染性，而乙肝患者HBeAg轉陰提示傳染性降低，但隨著Pre-S1Ag和HBV DNA在臨床的應用，人們發現HBeAg陰性患者也并不表示乙肝病毒在機體被清除，仍有病毒復制[6]，本文通過對598例e抗原為陰性的慢性乙型肝炎患者進Pre-S1Ag和HBV DNA的檢測，結果顯示仍有一定的陽性率，特別是小三陽患者Pre-S1Ag和HBV DNA陽性率都達到了70%以上，表明這部分患者機體內仍有病毒復制，其HBeAg陰性可能是由于HBV變異造成，HBV常見的變異是前核心區和核心啟動子區的變異，即前核心區G 1896 A突變使前核心區出現終止密碼，導致E抗原不能合成，核心啟動子區A 1762 T+G 1764 A突變造成信號RNA轉錄降低，導致HBeAg不能分泌，在患者血清中檢測不到HbeAg。

本文結果還顯示598例患者中，小三陽組Pre-S1Ag陽性率、HBV DNA平均含量和陽性率，均分別高于1、4陽性組和1、5 陽性組，差異有統計學意義(P ＜0.05)，1、4 陽性組和 1、5陽性組的Pre-S1Ag陽性率、HBV DNA平均含量以及陽性率比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，產生上述原因我們認為，小三陽是傳染性最強的大三陽(HbeAg陽性)的過渡期，其HbeAg轉陰并非表示乙肝病毒在機體被清除，可能是由于HBV變異造成，而1、4陽性組和1、5陽性組的Pre-S1Ag陽性率、HBV DNA平均含量以及陽性率比較接近，且明顯低于小三陽組，可能是HbeAg被機體清除的幾率大于小三陽患者，病情趨于好轉，盡管如此本文結果還是顯示這兩組仍然有50%以上Pre-S1Ag和HBV DNA陽性率，總之，本文研究表明了部分HBeAg轉陰的慢性乙型肝炎患者仍存在病毒高復制，而PreS1則可避免這種因HBeAg變異而產生的陰性誤導[7]，且有文獻報道[8]這些患者發生肝硬化和肝癌可能性大，因此，對于e抗原為陰性的慢性乙型肝炎患者進行聯合乙肝標志物以及前S1抗原和PCR檢測HBVDNA臨床意義重大。

[1]段梅.乙型肝炎病毒前S1抗原檢測的臨床意義.國際檢驗醫學雜志，2008，29(10):936-937.

[2]韓雪，劉婉婧，賀烽.HBV包膜大蛋白、中蛋白和HBsAg疫苗免疫原性的比較.江漢大學學報:自然科學版，2010，38(3):98-103.

[3]竇亞玲，李永哲，劉志肖，等.乙型肝炎病毒等前S1抗原檢測的臨床價值.中華醫學檢驗學雜志，2006，8:714-716.

[4]袁慶，邵彩霞，焦震華.乙肝兩對半、前S抗原抗體及HBVDNA的相關探討.國外醫學臨床生物化學與檢驗分冊，2005，26(10):752-753.

[5]劉添翼，謝志賢，許宏濤.乙肝病毒前S1抗原與其病毒復制的關系探討.現代檢驗醫學雜志，2007，22(1):39-40.

[6]顧曉東，趙韌，姚琦，等，HBeAg陰性慢性乙肝患者血清前S1抗原檢測的臨床價值.中國衛生檢驗雜志，2008，18(09):1810-1811.

[7]焦炳欣，謝堯，趙輝，等.HBeAg陰性乙肝患者血清前S1抗原檢測分析.中國公共衛生，2006，22(7):852.

[8]李琴，孫桂珍，魏玉香.Pre-S1蛋白與乙肝病毒DNA和e抗原在診斷乙肝病毒復制時對比研究.中華肝臟病雜志，2004，12:134-136.