不同種屬細菌感染患者機體免疫功能變化的實驗研究

鄒自英，朱 冰，吳麗娟，陳雪芹

(成都軍區總醫院檢驗科，四川 成都 610083)

臨床感染性疾病中最主要的感染類型是細菌感染,伴隨抗生素的廣泛應用,各種多重耐藥菌株得以產生和傳播[1-2]，給臨床病原確定和疾病治療帶來困擾。致病菌入侵后，在建立感染的同時，能激發宿主免疫系統產生一系列免疫應答與之對抗，淋巴細胞是機體執行免疫防御的主要細胞，淋巴細胞及其亞群的改變在很大程度上反映了機體的免疫功能狀況，在抗細菌感染中發揮極其重要的作用。為了探討不同細菌感染患者的免疫功能狀態，對2009年5月至2011年4月期間我院53例細菌感染患者的外周血淋巴細胞亞群檢測情況進行了回顧性調查，期望獲得不同細菌感染患者淋巴細胞亞群變化的一些規律，使流式細胞檢查技術和細菌培養技術有效的結合，給臨床提供更有意義的檢測信息，更好的服務于臨床和患者。

1 材料與方法

1.1 一般資料 研究對象選擇2009年5月至2011年4月我院已明確病原菌感染的患者53例，其中，男42例，女11例。年齡1～85歲，平均39.28歲±22.19歲。對照組為同期本院459例健康體檢者，其中，男341例，女118例。年齡36～60歲，平均44.59歲。病例分組方法：所有53例患者均已采用細菌培養方法明確病原菌，歸類總感染組；其中，采用PCR方法檢測出病毒感染的患者，歸類細菌病毒混合感染組；僅檢測出病原菌而未檢測出病毒的患者，歸類單純細菌感染組。

1.2 主要試劑 革蘭陰性菌鑒定卡GN及革蘭陽性菌鑒定卡GP均為法國梅里埃公司產品；各類病毒DNA及RNA測定試劑盒均為中山大學達安基因股份有限公司產品；同型對照抗體IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-PC5，測定抗體CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5、CD3-FITC/CD19-PE 和 CD3-FITC/CD16/56-PC5，Flow-Count標準熒光微球，標本預處理試劑(包括溶液A、溶液B和溶液C)等均為美國BECKMAN-COULTER公司產品。

1.3 主要儀器 法國梅里埃公司的VETEK 2 COMPACT型全自動微生物鑒定儀，美國BECKMANCOULTER公司XL4-MCL型流式細胞儀。

1.4 實驗方法 取細菌感染患者靜脈血2mL，EDTA-K2抗凝。具體操作參見文獻[3]。

1.5 統計學方法 應用SPSS 13.0軟件進行統計學處理和分析，數據以均數±標準差(s)表示。多組樣本均數的兩兩比較采用方差分析，以P＜0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 細菌感染患者初次診斷淋巴細胞亞群測定結果，設健康對照組為A；總感染組為B；單純細菌感染組為C；細菌病毒混合感染組為D。(1)總感染組T4細胞、DN-T細胞、T4/T8比值顯著低于健康對照組 (P＜0.05)，T8細胞顯著高于健康對照組且差異有統計學意義(P＜0.01)，而總T細胞、B細胞、NK細胞與健康對照組比較(P＞0.05)差異無統計學意義。(2)單純細菌感染組T4細胞、DN-T細胞、DP-T細胞顯著低于健康對照組 (P＜0.05)，T8細胞顯著高于健康對照組且差異有統計學意義(P＜0.01)，而總T細胞、B細胞、NK細胞、T4/T8比值與健康對照組比較 (P＞0.05)差異無統計學意義。(3)細菌病毒混合感染組T4細胞、T4/T8比值、NK細胞顯著低于健康對照組(P＜0.05)，B細胞和T8細胞顯著高于健康對照組且差異有統計學意義 (P＜0.01)，而總T細胞、DN-T細胞、DP-T細胞與健康對照組比較(P＞0.05)差異無統計學意義。(4)單純細菌感染組DN-T細胞、DP-T細胞、B細胞顯著低于細菌病毒混合感染組 (P＜0.05)，NK細胞顯著高于細菌病毒感染組(P＜0.01)，而總T細胞、T4細胞、T8細胞、T4/T8比值差異無統計學意義(P＞0.05)。結果見表1。

表1 淋巴細胞亞群測定結果(s，%)

表1 淋巴細胞亞群測定結果(s，%)

注 aP：A與B比較；bP:A與C比較；cP：A與D比較；dP：C與D比較

分組 n 總T細胞 T4細胞 T8細胞 T4/T8值 DN-T細胞 DP-T細胞 B細胞 NK細胞A B C D a 459 53 40 13 P bP cP dP 69.98±5.79 66.48±13.91 66.83±11.84 66.26±19.93＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05 35.25±5.16 28.46±12.26 29.61±12.24 25.25±12.21＜0.01＜0.01＜0.01＞0.05 25.08±4.34 32.17±14.10 31.64±13.10 34.44±17.74＜0.01＜0.01＜0.01＞0.05 1.45±0.28 1.15±0.83 1.18±0.86 1.04±0.77＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05 6.17±3.08 4.89±3.94 4.28±2.44 6.51±6.52＜0.05＜0.01＞0.05＜0.01 0.71±0.36 0.59±0.57 0.54±0.46 0.72±0.82＞0.05＜0.05＞0.05＜0.05 10.74±3.00 13.48±15.52 10.218.19 25.75±27.88＞0.05＞0.05＜0.01＜0.01 11.56±2.54 11.25±7.19 12.28±7.39 7.24±4.34＞0.05＞0.05＜0.05＜0.01

2.2 不同種屬細菌感染患者淋巴細胞亞群測定結果

設對照組為A，葡萄球菌感染組為B，鏈球菌感染組為C，銅綠假單胞菌感染組為D，不動桿菌感染組為E，克雷伯菌感染組為F，腸桿菌感染組為G，結核菌感染組為H。銅綠假單胞菌感染組T4細胞和T4/T8比值顯著低于對照組，而T8細胞和B細胞顯著高于對照組(P＜0.05)；不動桿菌感染組T8細胞顯著高于對照組，而T4/T8比值、DN-T細胞、DPT細胞和NK細胞顯著低于對照組(P＜0.05)；克雷伯菌感染組和腸桿菌感染組T4細胞和T4/T8比值顯著低于對照組，而T8細胞顯著高于對照組(P＜0.05)；結核桿菌感染組T4細胞和T4/T8比值顯著低于對照組，NK細胞顯著高于對照組(P＜0.05)；葡萄球菌和鏈球菌感染組與對照組比較，各種淋巴細胞的變化均無統計學差異(P＞0.05)，結果見表2。

3 討論

表2 不同種屬細菌感染患者淋巴細胞亞群測定結果(s，%)

表2 不同種屬細菌感染患者淋巴細胞亞群測定結果(s，%)

注 aP：A與B比較；bP A與C比較；cP A與D比較；dP A與E比較；eP A與F比較；fP A與G比較；gP A與H比較

分組 n 總T細胞 T4細胞 T8細胞 T4/T8值 DN-T細胞 DP-T細胞 B細胞 NK細胞A B C D E F G H a 459 6 5 7 5 1 2 8 1 0 P bP cP dP eP fP gP 69.98±5.79 69.00±10.17 67.75±13.03 66.49±2.56 70.74±5.81 68.01±12.71 69.56±10.81 65.97±14.09＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05 35.25±5.16 35.49±11.68 32.86±12.14 24.30±7.68 33.06±9.30 25.22±4.85 24.51±12.17 20.33±14.80＞0.05＞0.05＜0.01＞0.05＜0.01＜0.01＜0.01 25.08±4.34 28.70±10.85 26.55±6.05 31.06±3.58 33.90±7.81 35.08±7.88 39.02±16.14 21.13±6.05＞0.05＞0.05＜0.05＜0.05＜0.01＜0.01＞0.05 1.45±0.28 1.41±0.68 1.55±0.64 1.00±0.66 1.16±0.72 0.86±0.64 0.81±0.55 0.86±0.64＞0.05＞0.05＜0.05＜0.05＜0.01＜0.01＜0.01 6.17±3.08 4.10±2.94 4.40±2.09 7.22±1.55 3.64±1.26 4.90±2.93 5.36±1.77 4.90±0.54＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＞0.05＞0.05＞0.05 0.71±0.36 0.63±0.42 0.59±0.26 0.92±0.16 0.16±0.10 0.55±0.21 0.63±0.37 0.56±0.26＞0.05＞0.05＞0.05＜0.01＞0.05＞0.05＞0.05 10.74±3.00 11.37±7.77 10.26±9.06 38.78±5.96 8.40±3.26 12.66±7.96 8.12±3.25 13.93±11.42＞0.05＞0.05＜0.01＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05 11.56±2.54 9.23±3.66 14.67±7.76 8.85±3.94 4.75±2.00 13.14±6.41 10.07±4.17 18.40±9.58＞0.05＞0.05＞0.05＜0.01＞0.05＞0.05＜0.05

淋巴細胞是機體免疫系統功能最重要的細胞群。在機體正常情況下，各種淋巴細胞亞群保持一定的數量和比例，相互作用，穩定調節，維持著機體正常的免疫功能。當不同的淋巴細胞亞群的量及功能發生異常改變時，機體就會產生一系列的病理變化及免疫功能失調，使細菌、病毒等病原物質容易侵入機體引起疾病。

各感染組T4細胞比健康對照組均顯著下降，而T8細胞均顯著升高，表示細菌感染患者輔助B細胞產生的免疫球蛋白減少及細胞免疫減弱。CD8+是抑制性細胞(Ts)/細胞毒性細胞(Tc)亞群，能抑制TH細胞產生IL-2，又有抑制B細胞產生抗體的功能，也是細胞毒性T細胞介導反應的效應細胞。CD8+細胞被認為是免疫調控的關鍵。一般認為，其增多表示免疫抑制。CD4+/CD8+細胞比值，表示Th與Ts之間功能平衡狀態，是人體免疫系統內環境穩定最重要的指標。如比值降低，則提示機體免疫功能降低。細胞免疫功能改變往往敏感地表現在Th/Ts比值改變上，Th/Ts比值的下降被認為是疾病嚴重和預后不良的重要指標之一[4]。表1中各感染組T4/T8細胞與健康對照組比均下降，表示機體免疫功能降低。DN-T細胞和DP-T細胞的改變表示細菌感染引起T細胞分化發育紊亂及細胞功能障礙。B細胞產生抗體介導體液免疫，為抗胞外細菌感染比較有效的應答，提呈抗原以及分泌細胞因子參與免疫調節。表1中各感染組B細胞比健康對照組均有所升高表示機體體液免疫功能有所增強。NK細胞屬于固有免疫細胞,是抗腫瘤免疫的第一道防線[5]，是人體非特異性免疫的組成部分，是機體抗多種微生物病原體感染的重要免疫因素[6]，NK細胞異常在病毒感染時尤其突出[3]。表1中總感染組和細菌病毒混合感染組NK細胞均下降，單純細菌感染組NK細胞增加，可能是病毒感染時NK細胞殺滅病毒本身消耗增加，說明NK細胞抗病毒感染比抗細菌感染作用更突出。有研究提示菌血癥患者感染不同類型病原菌后，淋巴細胞亞群的變化呈現不同的表型[7]。表2結果提示，銅綠假單胞菌感染、不動桿菌感染、克雷伯菌感染、腸桿菌感染和結核菌感染患者T4和T4/T8降低，提示感染者細胞免疫功能均受到抑制，患者免疫功能降低。而不動桿菌感染DN-T細胞、DP-T細胞降低提示T細胞分化發育紊亂和細胞功能障礙突出。銅綠假單胞菌感染、不動桿菌感染、克雷伯菌感染和腸桿菌感染T8細胞升高，抑制B細胞產生抗體從而使得患者體液免疫功能受到抑制。而銅綠假單胞菌感染B細胞升高提示患者機體調動體液免疫的功能有所增強。不動桿菌感染NK細胞降低提示感染者非特異性免疫功能也有所降低。結核桿菌感染患者淋巴細胞亞群的變化呈現T4、T8[8]、iNK 細胞[9]降低，而 NK 細胞升高的特點[8]，與我們的結果一致，可能與結核桿菌為胞內寄生菌，細胞免疫和體液免疫功能均有所降低，而非特異性免疫功能相對增強。葡萄球菌和鏈球菌感染組與對照組比較差異無統計學差異，提示需要增加樣本統計量從而獲得感染者機體免疫功能變化的一些規律性的信息，我們在今后的工作中會注意相關數據的收集。

總之，淋巴細胞是機體執行免疫防御的主要細胞，淋巴細胞亞群的改變在很大程度上反映了機體的免疫功能狀況，因此淋巴細胞亞群的測定對細菌感染的診斷及臨床治療有一定指導意義。

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