血漿E-選擇素和白介素-6水平與動脈粥樣硬化臨床病理參數關系的研究

馮娜 付衛國 張凡 常永霞 張素貞

動脈粥樣硬化(AS)是冠心病發病率不斷升高的主要原因，粥樣斑塊的穩定性決定患者的療效和預后，而炎性細胞因子已經成為影響AS患者粥樣斑塊不穩定性的主要因素。白介素-6(IL-6)由單核和巨噬細胞產生，具有多種生物學效應，既有促炎作用又有抗炎作用，高濃度時增加內皮細胞表達細胞間粘附分子，使白細胞與內皮細胞的粘附性增強，導致微血管阻塞和內皮細胞損傷。E-選擇素(E-selectin)與配體P-選擇素(P-selectin)的結合對于中性粒細胞與血管內皮最初的粘附發揮重要作用。而粥樣斑塊中炎性細胞浸潤促進了粥樣硬化的進展，因此本實驗利用酶聯免疫法檢測AS患者血漿中E-selectin、IL-6的表達，為臨床治療AS提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2008年1月至2009年10月河北玉田縣醫院、河北河間市人民醫院以及河北北方學院附屬第一醫院收治的AS患者50例，其中男26例，女24例;年齡46～63歲，平均年齡52.4歲;NYHA心功能分級:Ⅰ級3例，Ⅱ級17例，Ⅲ級24例，Ⅳ級6例。右冠狀動脈病變13例，左冠狀動脈病變25例，左右冠狀動脈均存在病變12例。冠狀動脈病變程度Ⅰ型14例，Ⅱ型3例，Ⅲ型26例，Ⅳ型7例。參與本實驗研究的患者或家屬事先均知情同意并簽字，每例患者具備詳實的預后資料。

1.2 方法

1.2.1 左心功能測定:應用HPI500心臟彩色多普勒超聲診斷儀由同一測定者在不知情情況下測定:二維超聲心動圖Simpson法計算左心室射血分數(LVEF)。用血流脈沖多譜勒法(PWD)在二尖瓣口測舒張期血流E峰、A峰、E/A比值。

1.2.2 E-selectin、IL-6 及常規生化測定:E-selectin、IL-6 購自北京北方生物技術研究所，患者分別入院后生命體征平穩后抽取4 ml靜脈血，加入 EDTA(1.5 mg/ml)，4℃ 離心 15 min(3500 r/min)，取血漿－70℃保存待測。操作嚴格按照說明書，采用ELISA方法測定。同時檢測CK、CK-MB、TnT、肝腎功能、血脂、血糖及電解質測定。

2 結果

2.1 E-selectin、IL-6在不同分組的CHF患者中表達 E-selectin在LVEF≤50%者表達水平明顯高于LVEF＞50%者、E/A≤1者明顯高于E/A＞1者、冠狀動脈病變Ⅲ、Ⅳ型明顯高于冠狀動脈病變Ⅰ、Ⅱ型，在不同年齡、NYHA分型和血脂中差異無統計學意義(P＞0.05);IL-6在LVEF≤50%表達水平明顯高于LVEF＞50%、E/A≤1者明顯高于E/A＞1者、冠狀動脈病變Ⅲ、Ⅳ型明顯高于冠狀動脈病變Ⅰ、Ⅱ型，血脂異常者明顯高于正常者(P＜0.05)。見表1。

表1 血漿水平E-selectin、IL-6在不同組間的比較結果

表1 血漿水平E-selectin、IL-6在不同組間的比較結果

注:表中tE表示E-selectin，t6表示IL-6

項目 E-selectin(ng/ml) IL-6(ng/L) t值 P值年齡53 歲以下(n=26) 114±8 24.0±1.3 tE=1.3589 ＞0.0553 歲以上(n=24) 117±6 22.0±1.4 t6=1.5286 ＞0.05 NYHA分級Ⅰ、Ⅱ級(n=20) 106.6±13 25.0±1.9 tE=2.3008 ＞0.05Ⅲ、Ⅳ級(n=30) 108.7±3 24.2±1.7 t6=1.5687 ＞0.05 LVEF水平≤50%(n=21) 183±5 46.3±3.1 tE=6.2288 ＜0.05＞50%(n=29) 121±14 29.1± 2.4 t6=7.5006 ＜0.05 E/A水平≤1(n=25) 115±12 51.0±3.9 tE=5.6589 ＜0.05＞1(n=25) 199±13 23.2± 6.4 t6=8.3586 ＜0.05冠狀動脈病變分型Ⅰ、Ⅱ型(n=17) 125±6 26.0±4.1 tE=5.6689 ＜0.05Ⅲ、Ⅳ型(n=33) 204±16 46.4±1.8 t6=9.3589 ＜0.05三酰甘油正常(n=26) 139±4 24.2±6.3 tE=2.6389 ＞0.05異常(n=24) 121±6 49.3±6.3 t6=5.3246＜0.05

2.2 E-selectin、IL-6與心功能指標的相關性 E-selectin水平與患者冠狀動脈病變支數(r=0.6965，P＜0.05)、冠狀動脈病變程度(r=0.5867，P＜0.01)、左心室舒張末期內徑(r=0.7368，P＜0.01)、射血分數(r=0.8004，P＜0.01)之間存在相關;IL-6水平與冠狀動脈病變程度(r=0.6599，P＜0.01)、LVEF(r=0.8981，P＜0.01)之間存在相關。

2.3 E-selectin、IL-6水平變化的相關性 E-selectin、IL-6之間存在正相關(r=0.8874，P＜0.01)。

3 討論

動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥狀態，是分子和細胞間的一系列炎性反應，內皮通透性改變，受損內皮細胞表達粘附分子及循環中單核細胞向內皮細胞聚集是血管炎癥的標志。動脈粥樣硬化早期，斑塊內就有單核細胞和淋巴細胞浸潤，淋巴細胞分泌的各種淋巴因子可調節單核細胞、內皮細胞和血管平滑肌細胞的功能。單核細胞參與斑塊內脂質的氧化修飾，吸收和沉積，并分泌各種生長因子，促進血管平滑肌細胞增生，因此慢性炎癥反應促進了動脈粥樣硬化的進展。而細胞免疫占優勢的急性炎癥可導致動脈粥樣硬化斑塊的破裂，因此研究影響粥樣斑塊穩定的各種因子對動脈粥樣硬化的治療和預后評估意義重大，循環中白細胞的粘附和跨膜移動是動脈硬化發病機制中早期的關鍵事件，單核細胞在內膜聚集并粘附到血管內皮是動脈粥樣硬化病灶發生早期的特征和關鍵性步驟。斑塊的穩定性決定破裂、出血、血栓形成，炎癥反應不僅是粥樣硬化的觸發原因，而且是造成斑塊活化的重要因素［1－3］。E-selectin也稱內皮性白細胞粘附分子-1，屬選擇素家族，在體內分布非常局限，只表達在活化的血管內皮細胞，從胞膜脫落后成為sE-選擇素。在急性心肌梗死發病72 h、7 d時檢測sE-選擇素的表達量，72 hs E-選擇素顯著高于對照組，發病7 d時較72 h表達有所下降，但仍顯著高于對照組。研究發現急性心肌梗死卒中后sE-選擇素表達高峰在24～36 h內，5 d內呈明顯升高趨勢，5 d后呈下降趨勢［4，5］，高血壓、糖尿病和高脂血癥中也均有增高。流行病學調查顯示E-selectin的基因多態性與冠心病和動脈粥樣硬化有關，Arg128.98T和phe554等位基因可能增加了AS的危險性［6］。E-selectin水平與患者冠狀動脈病變支數、冠狀動脈病變程度、左心室舒張末期內徑、射血分數之間存在相關，說明E-selectin介導的內皮細胞與炎性細胞的粘附以及炎性細胞因子的作用在本實驗促進了動脈粥樣硬化斑塊的炎性反應加劇，導致動脈粥樣硬化的發展和心臟功能的下降。

IL-6是機體炎性反應的標志物之一，在炎癥和免疫反應中均起主要作用，在人冠狀動脈粥樣硬化斑塊處，IL-6表達增加，血清IL-6也有不同程度升高。炎癥過程中大量的炎性細胞浸潤和激活，引起強烈的免疫應答過程，致使單核巨噬細胞、T細胞、B細胞被激活，產生大量的IL-6，進一步誘導肝細胞產生C-反應蛋白，IL-6可促進心肌細胞表達粘附分子，增強白細胞和心肌細胞的粘附作用，加重心肌細胞的損傷。IL-6在斑塊中的濃度為血清濃度的200倍，可以反映隱藏的斑塊炎癥和破裂可能性大小。IL-6在冠心病患者循環中水平顯著高于正常人群，而且血清IL-6水平的改變對日后發生的冠狀動脈事件具有預測價值。可能機制為IL-6介導的白細胞粘附增加促進斑塊不穩定性，消弱斑塊處纖維帽，加速斑塊裂隙，最終促進斑塊破裂，血栓形成。另外研究顯示IL-6是一種具有多種效能的前炎性細胞因子，可促進血小板增多，使血液粘稠度增加而促使凝血及血栓形成，還可強烈刺激平滑肌細胞分泌生長因子、血小板源生長因子等而促使平滑肌細胞增生，從而加劇炎癥介質的產生［7，8］。我們的研究顯示血漿IL-6在LVEF≤50%表達水平明顯高于LVEF＞50%、E/A≤1明顯高于E/A＞1者、冠狀動脈病變Ⅲ、Ⅳ型明顯高于冠狀動脈病變Ⅰ、Ⅱ型，血脂異常者明顯高于正常者。IL-6水平升高幅度與冠狀動脈病變程度(r=0.6359，P＜0.01)、LVEF(r=0.8351，P＜0.01)、血脂水平之間(r=0.5342，P＜0.01)之間存在相關。說明IL-6介導的白細胞粘附進一步增加的粥樣斑塊的不穩定性，促進了病變程度加重和心功能的下降。

同時我們實驗顯示E-selectin、IL-6水平變化之間存在正相關，說明兩者之間在AS患者疾病進展方面存在協同作用，而且IL-6還可作為評估預后的關鍵指標，我們實驗尚需對患者的預后進行更加深入的研究，篩選更加科學的預后指標。

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