CCR7-PI3K/Akt信號傳導通路與結腸癌發生發展及浸潤轉移的關系

王懷志，趙國強，石獻洲，張 建

(武警河南總隊醫院，鄭州450052)

趨化因子受體CCR7是一種可以特異地結合趨化因子的G蛋白偶聯受體，目前已有多項研究證實其在多種實體瘤中存在過表達［1，2］。磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信號途徑，是與腫瘤細胞生長、增殖及分化等密切相關的信號轉導途徑，在促進腫瘤細胞生長、抑制腫瘤細胞凋亡及維持細胞生存等機制中具有重要作用［3］。為了初步研究CCR7促進結腸癌侵襲轉移可能存在的分子機制，2003年5月～2008年2月我們檢測了40例結腸癌組織及15例正常結腸黏膜組織中CCR7與PI3K、Akt的表達，觀察CCR7與PI3K/Akt信號轉導通路中關鍵靶酶的相關性，以期探討PI3K/Akt信號轉導途徑與結腸癌之間的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 40例結腸癌手術切除標本取自武警河南總隊醫院。其中男23例、女17例，年齡32～77歲，所有病例術前無化療、放療及免疫治療史。

1.2 檢測方法 40例標本分別取自無明顯壞死癌灶及＞5cm的遠端正常黏膜組織，均經40 g/L多聚甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋，連續切片，切片厚度4～6 μm，分別用于HE及免疫組化染色。40例標本經兩位病理學醫師同時診斷并證實為腺癌。其中TNM分期Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期14例，Ⅳ期9例;伴淋巴結轉移者18例，無淋巴結轉移者22例。鼠抗人CCR7單克隆抗體購自美國Santa cruz公司，PI3K(P85α亞型，sc-423)為兔抗人濃縮型多克隆抗體;Akt1/2(sc-1619)為羊抗人濃縮型多克隆抗體;PI3K、Akt及SP免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組織化學采用S-P法，CCR7、PI3K、Akt單抗稀釋，稀釋倍數均為 1∶100，DAB顯色，蘇木素復染。染色步驟嚴格按說明書進行，以PBS液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷標準 每例標本均于高倍鏡下隨機選取10個視野。評分方法:①按切片中細胞著色深淺評分:0分為細胞無顯色;1分為淺黃色;2分為棕黃色;3分為棕褐色。②按陽性細胞數占同類細胞數的百分比評分:＜30%為1分，30% ～70%為2分，＞70%為3分。取①、②兩項評分的乘積作為總積分，0～1分為陰性(－)，＞1分為陽性(+)。

1.4 統計學方法 應用SPSS11.0軟件進行統計學處理，行χ2檢驗。以P≤0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 CCR7及PI3K、Akt蛋白表達 CCR7蛋白陽性表達主要位于腫瘤細胞的胞膜及胞質中，呈淺黃色至深黃色，PI3K、Akt蛋白陽性表達均主要位于腫瘤細胞的胞質中，為淺黃色或深黃色顆粒。正常黏膜組織中CCR7及PI3K、Akt的蛋白表達分別為2例(13.3%)、3 例(20.0%)和 2 例(13.3%)，結腸癌組織中分別為26例(65.0%)、25例(62.5%)和22 例(55.0%)，χ2值分別為9.677、6.276 和6.100，P 值分別為 0.002、0.012 和 0.014。不同組織中CCR7及PI3K、Akt蛋白表達見表1。

2.2 與臨床病理因素的關系 CCR7及PI3K、Akt蛋白表達與結腸癌臨床病理因素的關系見表1。

表1 CCR7及PI3K、Akt蛋白表達與結腸癌臨床病理因素的關系［例(%)］

2.3 相關性分析 CCR7與PI3K、Akt蛋白表達均呈正相關關系(r分別為 0.406、0.390，P 值分別為0.009、0.013)。

3 討論

CCR7是CC類趨化因子受體家族成員之一，新近的研究結果顯示，CCR7主要高表達于某些腫瘤細胞，其配體CCL21、CCL19主要表達在淋巴結、非淋巴組織的內皮淋巴導管、T細胞區等。配體對受體的吸引可以促進CCR7表達陽性的腫瘤細胞循配體濃度梯度定向轉移［3］，而且配體與受體結合后可引起細胞內肌動蛋白的聚合，促進腫瘤細胞的偽足形成，進而導致腫瘤細胞浸潤轉移［4］。

PI3K/Akt信號傳導通路與包括腫瘤細胞的生長、增殖、分化、黏附及遷移等密切相關。各種癌基因酪氨酸激酶受體，例如 Src、Ras、Rac、Abl、v-Crk 等均可活化 PI3K［5］。PI3K/Akt通路是 PI3K主要介導的下游信號傳導通路，而Akt是PI3K下游最直接的靶蛋白之一。PI3K的活化底物PIP3作為第二信使，與Akt的PH區結合并可使之激活。活化的Akt即磷酸化Akt可以通過磷酸化作用激活其諸多的下游分子，如GSK-3、p70S6k、Bad、caspase-9 等，從而調節細胞的分裂、分化、黏附、遷移以及凋亡等生物學行為［6］。

在本研究中我們發現，結腸癌中CCR7、PI3K及Akt蛋白表達均顯著高于正常黏膜對照組，CCR7、PI3K蛋白表達與結腸癌的TNM分期及淋巴結轉移密切相關，Akt蛋白表達與淋巴結轉移密切相關，有淋巴結轉移者表達增高，這就提示其過表達可能與結腸癌的發生、發展有關。同時，經相關分析，CCR7與PI3K、Akt蛋白表達均呈正相關關系，提示CCR7、PI3K、Akt對結腸癌的發生起正調控作用，CCR7可能上調PI3K、Akt的表達并參與腫瘤進展中Akt的激活。

綜上所述，在結腸腺癌侵襲及轉移過程中，CCR7的表達調控有可能與PI3K/Akt信號途徑有相關性，可能是與Akt磷酸化活性相關。PI3K/Akt信號通路的激活可能參與了CCR7介導的結腸癌的浸潤、轉移過程。因此，對CCR7和PI3K/Akt通路的深入研究有可能為結腸腺癌新治療靶點提供一定的理論依據。

［1］Wang J，Seethala RR，Zhang Q，et al.Autocrine and paracrine chemokine receptor 7 activation in head and neck cancer:implications for therapy［J］.J Natl Cancer Inst，2008，100(7):502-512.

［2］Kabashima K，Shiraishi N，Sugita K，et al.CXCL12-CXCR4 engagement is required for migration of cutaneous dendritic cells［J］.Am J Pathol，2007，171(4):1249-1257.

［3］Anis MM，Fulton SA，Reba SM，et al.Modulation of pulmonary dendritic cell function during mycobacterial infection［J］.Infect Immun，2008，76(2):671-677.

［4］Yan C，Zhu ZG，Yu YY，et al.Expression of vascular endothelial growth factor C and chemokine receptor CCR7 in gastric carcinoma and their values in predicting lymnodemetastasis［J］.World J Gastroenterol，2004，10(6):783-790.

［5］Dong Z，Huang C，Ma WY.PI-3 kinase in signal transduction，cell transformation，and as a target for chemoprevention of cancer［J］.Anticancer Res，2001，19(5A):3743-3747.

［6］Chang F，Lee JT，Navolanic PM，et al.Involvement of PI3K/Akt pathway in cell cycle progression，apoptosis，and neoplastic transformation:a target for cancer chemotherapy［J］.Leukemia，2003，17(3):590-603.