乙醛脫氫酶1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義

黃 華，章建國，仇曉軍

(南通大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇南通226001)

乙醛脫氫酶1(ALDH1)是乙醛脫氫酶家族成員之一，在人體的各種組織中廣泛分布，是細(xì)胞內(nèi)乙醛氧化的解毒酶，通過氧化視黃醛為視黃酸參與組織的分化和基因的表達(dá)。研究表明，ALDH1陽性的乳腺癌患者預(yù)后較差，但ALDH1在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的表達(dá)尚不明確。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化方法研究ALDH1在NSCLC中的表達(dá)及其臨床意義。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 選擇南通大學(xué)附屬醫(yī)院2008年1月～2009年12月80例NSCLC手術(shù)患者的癌組織標(biāo)本，男55例、女25例，平均年齡59歲。其中鱗癌39例，腺癌41例;低分化癌28例，中分化癌39例，高分化癌13例;TNM分期Ⅰ期40例，Ⅱ期11例，Ⅲ期29例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例。另取20例良性病變組織作為對(duì)照組。隨訪時(shí)間截至2010年1月，失訪4例。

1．2 方法

1．2．1 免疫組化方法檢測(cè)組織ALDH1含量 采用即用型非生物素免疫組化Elivision TM plus檢測(cè)試劑盒，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，已知的陽性標(biāo)本作為陽性對(duì)照。石蠟標(biāo)本切片，脫蠟至水。每張切片加50 μl 3%H2O2，室溫孵育 10 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗;檸檬酸鹽修復(fù)液微波修復(fù)10 min，自然冷卻，PBS沖洗;甩去PBS，一次加入鼠抗人單克隆抗體ALDH1、聚合物增強(qiáng)劑、抗鼠/兔聚合物，室溫孵育，PBS沖洗。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1．2．2 結(jié)果判定 以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)1 000個(gè)瘤細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)百分比。按陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計(jì)分，≤10%為1分，10% ～25%為2分，26% ～50%為3分，＞50%為4分;按著色細(xì)胞染色強(qiáng)度分，無著色為0分，淡黃色顆粒為1分，棕黃色顆粒為2分，棕褐色顆粒為3分。兩項(xiàng)計(jì)分相乘，總計(jì)分0～2分為陰性(－)，3～4分為弱陽性(+)，5～8分為陽性(++)，9～12分為強(qiáng)陽性(+++)。

1．2．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件，率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P≤0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 兩組ALDH1陽性表達(dá)情況比較 NSCLC組ALDH1陽性表達(dá)率為63．8%(51/80)，對(duì)照組為10．0%(2/20)，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＜0．05)。

2．2 ALDH1表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

2．3 ALDH1陽性組與陰性組的2 a生存率比較ALDH1陽性組與陰性組的2 a生存率分別為24%和37%，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0．01)。生存曲線見圖1。

3 討論

ALDH1是乙醛脫氫酶家族成員之一，位于人類9號(hào)染色體，包含13個(gè)外顯子，共編碼501個(gè)氨基酸殘基。ALDH1表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，催化細(xì)胞內(nèi)醛類物質(zhì)脫氫，使輔酶Ⅰ成為還原性輔酶Ⅰ，主要存在于肝臟等器官當(dāng)中［1］。Chute 等［2］報(bào)道，ALDH1 可以氧化視黃醛為視黃酸，因此在干細(xì)胞的早期分化中可能具有重要的作用。Ginestier等［3］證實(shí)，ALDH1是一種新的乳腺癌干細(xì)胞標(biāo)記物，另外ALDH1在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、白血病等多種腫瘤干細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)有表達(dá)［4，5］。ALDH1通過氧化環(huán)磷酰胺的中間代謝產(chǎn)物醛磷酰胺，成為無毒的羧基磷酰胺，進(jìn)而形成對(duì)CTX的解毒作用，并且細(xì)胞當(dāng)中的ALDH1水平可以預(yù)測(cè)環(huán)磷酰胺治療的效果，因?yàn)锳LDH1解毒的作用從而導(dǎo)致腫瘤對(duì)環(huán)磷酰胺的耐藥［6，7］。另有研究表明，ALDH1在結(jié)腸癌、前列腺癌、乳癌、膀胱癌等多種臟器腫瘤中均有高表達(dá)［8］。

表1 ALDH1表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系

圖1 ALDH1在NSCLC中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法研究ALDH1在NSCLC中的表達(dá)，結(jié)果顯示，肺正常組織中ALDH1的表達(dá)顯著低于癌組織中的表達(dá)，說明ALDH1的表達(dá)與肺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。隨著臨床分期及病理分級(jí)增加，ALDH1的表達(dá)陽性程度增加，表明隨著腫瘤的發(fā)展，肺癌組織中ALDH1的表達(dá)是逐漸增高的，ALDH1的表達(dá)與肺癌的分化程度及惡性程度有關(guān)。通過對(duì)患者隨訪的生存時(shí)間分析顯示，ALDH1蛋白表達(dá)陽性組與陰性組的生存率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明ALDH1在肺癌組織中的表達(dá)與患者預(yù)后有關(guān)，可以作為判斷臨床預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。

綜上所述，NSCLC中ALDH1有高表達(dá)，且其表達(dá)與患者的臨床預(yù)后密切相關(guān)，提示ALDH1在惡性腫瘤當(dāng)中的高表達(dá)有望成為腫瘤診斷及治療的靶點(diǎn)，并且有可能通過抑制ALDH1的表達(dá)降低肺癌的生長、轉(zhuǎn)移的能力，從而提高肺癌患者生存率，為NSCLC的早期診斷、臨床病理分期、預(yù)后評(píng)估提供新的依據(jù)和指標(biāo)。

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