組織中PCNA、PTEN的表達與非小細胞肺癌生物學行為的關系

孫道芳

(山東省胸科醫(yī)院，濟南250013)

近年研究發(fā)現(xiàn)，增殖細胞核抗原(PCNA)與細胞DNA的合成關系密切，是反映細胞增殖狀態(tài)的良好指標;人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因(PTEN)是迄今發(fā)現(xiàn)的第一個具有雙重特異性磷酸酶活性的抑癌基因，其基因突變、缺失或蛋白低表達與多種腫瘤的發(fā)生關系密切［1］。2000～2007年，我們觀察了非小細胞肺癌(NSCLC)患者腫瘤組織中 PCNA、PTEN的表達情況，以探討其在NSCLC發(fā)生、發(fā)展及轉移中的意義。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院收治的NSCLC患者128例(NSCLC組)，均經病理確診且術前未接受任何放、化療。其中，男 89例、女 39例，年齡34～83(53.0±11.2)歲;鱗癌 67 例，腺癌 61 例;腫瘤直徑＜3cm者78例，≥3cm者50例;高分化型58例，低分化型70例;無淋巴結轉移51例，伴淋巴結轉移77例;TNMⅠ+Ⅱ期21例，Ⅲ+Ⅳ期107例。同期選擇95例健康者作為對照組，且無肺癌等腫瘤和自身免疫性疾病的臨床及實驗室診斷證據，男68例、女27例，年齡32～78(55.0±9.7)歲。兩組性別、年齡等具有可比性。

1.2 方法 所有研究對象的組織標本經10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。采用免疫組織化學染色SP法檢測兩組標本中PCNA、PTEN的表達，其中兔抗人PCNA單克隆抗體、鼠抗人PTEN單克隆抗體為美國ZYMED公司產品。結果判定:PCNA蛋白染色結果判定:細胞核內顆粒型或彌漫型染色為陽性;PTEN蛋白染色結果判定:陽性為細胞質內出現(xiàn)棕黃色顆粒。在10個高倍視野(×400)，每個視野計數(shù)100個細胞，采用半定量積分法判斷結果:①陽性著色:無色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分;②陽性細胞數(shù):5個高倍視野在每切片上計算1 000個以上癌細胞，陽性細胞數(shù)＜5%為0分，6% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51%～100%為3分。兩積分乘積，0分為陰性(－)，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為陽性(++)，9～12分為強陽性(+++)。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SAS6.12統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 PCNA、PTEN在NSCLC組織中的表達 見表1。

表1 PCNA及PTEN在NSCLC組織中的表達

2.2 PCNA、PTEN表達與NSCLC臨床病理特征的關系 見表2。

3 討論

PCNA又稱周期素，直接參與DNA復制，是反映細胞增殖的主要生物學指標。近年來，PCNA作為原位檢測腫瘤細胞增殖狀態(tài)的新探針，用于腫瘤的動力學研究。目前研究表明，PCNA與食管癌、肝癌、結腸癌、腎細胞癌及卵巢腫瘤等發(fā)生、發(fā)展及轉移方面有重要影響，而與NSCLC關系的研究甚少。本研究結果表明，NSCLC組織中PCNA陽性表達率顯著高于對照組，其表達水平與NSCLC的生物學行為密切相關，分化程度越低、伴淋巴結轉移、TNM分期越晚，其表達率越高，與文獻報道基本一致［2］。這可能與PCNA作為DNA聚合酶的輔助因子，在細胞增殖的啟動上起重要作用，在靜止期細胞中含量很少，G1晚期開始增加，S期達到高峰，G2、M期明顯下降［3］，提示PCNA陽性表達可作為評價細胞增殖狀態(tài)的指標，對NSCLC的發(fā)生、發(fā)展等有重要影響作用。

表2 PCNA、PTEN表達與NSCLC臨床病理特征的關系

PTEN作為抑癌基因，其蛋白主要功能區(qū)與細胞骨架蛋白tensin和輔助蛋白auxilin具有同源序列，在錨著點與肌動蛋白結合，并與該位點的復合物共同調節(jié)細胞生長，提示PTEN在維持細胞結構和信號轉導中起一定作用。本研究結果表明，NSCLC組織中PTEN陽性表達率顯著低于對照組，即PTEN的表達與NSCLC的發(fā)生相關，且分化越低、伴淋巴結轉移或是TNM分期越晚PTEN表達率更低，與Sano等［4］對腦膠質瘤的研究一致。其可能機制為PTEN蛋白對酪氨酸和絲氨酸/蘇氨酸殘基脫磷酸化、使信號分子PIP3去磷酸化，對細胞增生和細胞周期起調控作用。當PTEN蛋白表達下調時，可能構成一個新的信號轉導途徑，促進腫瘤進行性生長和腫瘤細胞增殖活性增加，即PTEN表達率越低，細胞分化程度越低，腫瘤的惡性程度越高，認為PTEN基因在誘導腫瘤細胞分化過程中起重要作用。

總之，PCNA、PTEN蛋白表達異常均與NSCLC的生物學行為密切相關，在誘導腫瘤細胞發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。兩者在臨床中可作為NSCLC定期隨訪、手術治療及評估預后的重要參考指標。

［1］Maehama T，Dixon JE.The tumor suppressor，PTEN/MMAC，dephosphorylates the lipid second messenger，phosphatidylinositol 3，4，5-trisphosphate［J］.J Biol Chem，1998，273(22):13375-13378.

［2］Dworakowska D.Clinical significance of PCNA expression in nonsmall cell lung cancer［J］.Pneumonol Alergol Pol，2005，73(3):292-296.

［3］Tachibana KE，Gonzalez MA，Coleman N.Cell-cycle-dependent regulation of DNA replication and its relevance to cancer pathology［J］.J Pathol，2005，205(2):123-129.

［4］Sano T，Lin H，Chen X，et al.Differential expression of MMAC/PTEN in glioblastoma multiforme:relationship to localization and prognosis［J］.Cancer Res，1999，59(8):1820-1824.