依那普利聯(lián)合替米沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠腎臟的保護作用

殷泉忠，王加虹，崔俊友，鄭若龍，馬根山

(1東南大學醫(yī)學院附屬江陰醫(yī)院，江蘇 江陰 214400;2東南大學附屬中大醫(yī)院)

近年來，高血壓導致的終末腎病的發(fā)生率呈逐年上升趨勢，約28%的終末腎病與高血壓有關［1］。因此在抗高血壓藥物研究中，除評價其降壓療效外，是否具有腎臟保護作用亦越來越受到關注。2009年1月～2010年12月，我們觀察了依那普利聯(lián)合替米沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠(SHRs)腎臟的保護作用。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 12周齡的SHRs 40只，雌雄各半，體質(zhì)量250～300 g，隨機分成4組:依那普利組、替米沙坦組、依那普利+替米沙坦組以及SHRs空白對照組各10只;12周齡的正常血壓大鼠(WKYs)10只，雌雄各半，體質(zhì)量250～300 g;所有動物購自江蘇省實驗動物中心。KN-210大鼠尾動脈血壓測定儀(上海華巖儀器公司)，HITACHI7150型全自動生化分析儀(日本HITACHI公司)，ZEISS Axiovert 40 CFL顯微鏡(美國ZEISS公司)。血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)放免試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所)。依那普利購自江蘇常州制藥廠。替米沙坦購自上海勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 給藥方法 依那普利組給予依那普利10 mg/(kg·d)，替米沙坦組給予替米沙坦30 mg/(kg·d)，依那普利+替米沙坦組給予依那普利10 mg/(kg·d)+替米沙坦30 mg/(kg·d)，SHRs空白對照組及WKYs正常對照組以同樣給藥方式予以10 ml/(kg·d)的蒸餾水，連續(xù)灌胃給藥12周。

1.2.2 血壓、尿蛋白含量的測定 治療期間每周用無創(chuàng)性套尾法測定清醒狀態(tài)下大鼠的收縮壓，每次測量3次，取平均值即為血壓值。治療期間每2周將大鼠置于代謝籠中，收集24 h尿量，取其中1 ml尿液，8000 r/min離心10 min后，用考馬斯亮藍法測定尿蛋白濃度。

1.2.3 AngⅡ和 TGF-β1水平的測定 治療結(jié)束后，3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，胸腹聯(lián)合切口，直視下右心房采集靜脈血，6000 r/min離心10 min得到血漿;取腎臟皮質(zhì)少量，加入適當蒸餾水制備成組織勻漿。分別檢查血漿和組織 AngⅡ、TGF-β1水平。其中，AngⅡ水平測定采用放射免疫分析法、TGF-β1水平測定采用酶聯(lián)免疫吸附法。

1.2.4 腎臟組織形態(tài)學觀察 處死大鼠后，立即將腎臟用10%的甲醛溶液固定24 h以上，將固定好的腎臟經(jīng)酒精梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，HE染色后，光鏡下觀察腎臟組織形態(tài)學改變。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，結(jié)果以表示，結(jié)果比較采用t檢驗、區(qū)組設計方差分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠治療前后血壓、尿蛋白含量比較 見表1。

2.2 各組大鼠治療前后血漿及腎臟的AngⅡ和TGF-β1水平比較 見表2。

表1 各組大鼠血壓與蛋白尿含量比較()

表1 各組大鼠血壓與蛋白尿含量比較()

注:與SHRs空白對照組比較，*P＜0.05;與依那普利+替米沙坦組比較，★P＜0.05

組別 n 血壓(mmHg)治療前 治療12周尿蛋白(mg/ml)治療前 治療12周后依那普利組 10 175.64±23.76 142.84±15.69＊★ 1.26±0.23 1.29±0.25＊★替米沙坦組 10 171.73±25.79 134.39±14.83＊★ 1.24±0.28 1.26±0.30＊★依那普利 +替米沙坦組 10 176.33 ±27.41 124.18 ±10.73* 1.28 ±0.31 1.12 ±0.32*SHRs空白對照組 10 174.88 ±26.25 217.53 ±34.58 1.27 ±0.32 2.13 ±0.56 WKYs正常對照組 10 120.64 ± 9.47 123.53 ±10.78 0.67 ±0.08 0.69 ±0.10

表2 各組大鼠治療后血漿、腎臟的AngⅡ和TGF-β1水平的比較(mmol/L，)

表2 各組大鼠治療后血漿、腎臟的AngⅡ和TGF-β1水平的比較(mmol/L，)

注:與依那普利組、替米沙坦組比較，*P＜0.05

組別 n 血漿AngⅡ TGF-β1腎臟AngⅡ TGF-β1依那普利組10 5.4 ±0.26 4.5 ±0.18 7.4 ±0.22 6.6 ±0.27替米沙坦組 10 8.4 ±0.41 4.1 ±0.24 9.1 ±0.37 6.8 ±0.23依那普利 +替米沙坦組 10 4.1 ±0.17* 2.6 ±0.18* 5.7 ±0.27* 5.9 ±0.28*SHRs空白對照組 10 7.5 ±0.31 6.0 ±0.31 8.5 ±0.31 8.0 ±0.35 WKYs正常對照組10 4.0 ±0.23 2.4 ±0.15 5.5 ±0.25 5.6 ±0.20

2.3 腎臟組織病理改變 在光鏡下觀察腎臟HE染色組織切片，SHRs空白對照組腎小球旁小動脈管壁增厚，管腔明顯狹窄，腎小球體積縮小，組織結(jié)構(gòu)致密;腎間質(zhì)充血、輕度纖維化;經(jīng)過12周的治療后，三個用藥組均可見腎小球旁小動脈管壁增厚及管腔狹窄，程度較SHR空白對照組明顯減輕，而且聯(lián)合用藥組減輕腎臟病理損害的效果明顯優(yōu)于依那普利組和替米沙坦組。

3 討論

高血壓的發(fā)病與腎臟的關系是十分密切的。腎臟既是血壓調(diào)節(jié)的重要器官，同時又是高血壓損害的主要靶器官之一。AngⅡ參與高血壓的病理生理過程，循環(huán)和組織中AngⅡ水平過高是高血壓、心肌肥厚、腎硬化的主要因素。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)和血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)都有較好的降壓效果，已成為臨床一線的降壓藥物。依那普利是ACEI類藥物，通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性、降低血漿和組織中的AngⅡ水平起到抗高血壓、減輕心肌肥厚、減少尿蛋白含量、減輕腎臟硬化的作用［2］，但體內(nèi)催化AngⅠ產(chǎn)生 AngⅡ過程中尚有糜酶、組織蛋白酶等參與，其結(jié)果是長期應用可能導致反饋性激活AngⅡ產(chǎn)生的旁路途徑而致腎素—血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的抑制不完全。替米沙坦是ARB類藥物，能選擇性地阻斷AngⅡ與AT1受體的結(jié)合，從而有效地抑制RAS系統(tǒng)［3］。從理論上說，ACEI與ARB聯(lián)合應用于高血壓疾病的治療，就能更好地阻斷RAS，保護腎臟免受損傷。

阻斷RAS可延緩或阻止疾病進程，抵消AngⅡ的血流動力學效應，抑制依賴于AngⅡ的促生長細胞因子、氧自由基和組織纖維化介導物質(zhì)的生成［4］，可產(chǎn)生以下生物學效應:血壓下降，尿蛋白減少等。研究表明，單獨使用ACEI或ARB均有利于保護高血壓引起的心腦腎血管損傷［5，6］。但由于兩者作用于不同的位點，聯(lián)合應用ACEI和ARB可能互相增強彼此的作用。最近的研究表明［7～9］，兩者聯(lián)合使用能達到更佳治療效果。本實驗中，我們比較了單獨使用依那普利或替米沙坦以及兩者聯(lián)用對SHRs血漿和腎臟各個指標的影響程度，結(jié)果表明依那普利和替米沙坦聯(lián)合應用，對于降低SHRs的血壓有很好的協(xié)同作用，并且對腎臟有很好的保護作用。

［1］Porush JG.Hypertension and chronic renal failure:the use of ACE inhibitors［J］.Am J Kidney Dis，1998，31(1):177-184.

［2］Bertrand ME.Provision of cardiovascular protection by ACE inhibitors:a review of recent trials［J］.Curr Med Res Opin，2004，20(10):1559-1569.

［3］Wienen W，Entzeroth M，Meel JCA，et al.A review on telmisartan:a novel，long-acting angiotensin II-receptor antagonist［J］.Cardiovasc Drug Rev，2006，18(2):127-154.

［4］Dzau VJ.Tissue Angiotensin and pathobiology of vascular disease:a unifying hypothesis［J］.Hypertension，2001，37(4):1047-1052.

［5］Rizzoni D，Rodella L，Porteri E，et al.Effects of losartan and enalapril atdifferentdoses on cardiac and renal interstitialmatrix in spontaneously hypertensive rats［J］.Clin Exp Hypertens，2003，25(7):427-441.

［6］劉雪平，沈彥明，祝瑋偉，等.氯沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠糖基化終末產(chǎn)物及其受體誘導的血管損傷的影響［J］.中華高血壓雜志，2008，16(5):435-440.

［7］李波平，高治平，秦旭平，等.氯沙坦對腎血管性高血壓大鼠心肌細胞腫瘤壞死因子α表達的影響［J］.中華高血壓雜志，2006，14(10):802-805.

［8］Struthers AD，MacDonald TM.Review of aldosterone and angiotensin Ⅱ-induced targetorgan damage and prevention［J］.Cardiovasc Res，2004，61(4):663-670.

［9］Ke YS，Tao YY，Yang H，et al.Effect of valsartan with orwithoutbenazepril on blood pressure，angiotensinⅡ，and endoxin in patients with essential hypertension［J］.Acta Pharmacol Sin，2003，24(4):337-341.