血管內皮生長因子及其受體對妊娠肝內膽汁淤積癥發病的影響

陳 忠，張 婷，印永祥，許建娟，許 飛，趙 華，馮一中

(1無錫市婦幼保健院，江蘇無錫214002;2蘇州大學醫學院)

妊娠肝內膽汁淤積癥(ICP)是妊娠期特有的并發癥，孕婦預后較好，但可致圍生兒早產、胎兒窘迫、胎死宮內等，使圍生兒患病率及病死率升高［1］。其發病原因和病變機制目前仍未完全清楚。本研究將探討血管內皮生長因子(VEGF)及其受體(Flt-1)在ICP發病中的作用。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 選擇2009年6月～2010年5月在我院住院分娩的30例 ICP患者(ICP組)，年齡(26．5 ±2．4)歲，孕周(37．3 ±2．6)周。隨機選擇同期住院分娩的30例正常晚期妊娠婦女為對照組，均因頭盆不稱、胎位不正或社會因素等原因行選擇性剖宮產，年齡(26．3 ±3．1)歲，孕周(38．0 ±2．3)周。兩組產婦均無內外科合并癥，均為單胎、剖宮產分娩。

1．2 研究方法

1．2．1 標本采集及處理 術前分別抽取肘靜脈血5 ml，3 000 r/min離心5 min，分離血清，－70 ℃保存待檢。胎盤娩出后，立即從胎盤中央帶無明顯出血鈣化處取材，取胎盤組織約1 cm×1 cm×1 cm，10%甲醛固定，常規石蠟包埋，連續切片(4 μm)。

1．2．2 檢測方法 血清VEGF測定采用ELISA法，人VEGF ELISA試劑盒購自北京四正柏生物科技有限公司。胎盤VEGF及Flt-1測定采用免疫組織化學PV法。PV-6001試劑盒和兔抗人VEGF單克隆抗體(克隆號SP28)購自北京中杉金橋生物技術有限公司。兔抗人Flt-1多克隆抗體(克隆號BS1606)購自美國Bioworld Technology公司。操作步驟均嚴格按試劑盒說明進行。

1．2．3 免疫組織化學結果判定 VEGF與Flt-1陽性染色位于胞質或胞膜。以胞質或胞膜出現淺黃色至棕褐色顆粒為陽性細胞，無著色或與背景相一致為陰性細胞。結果判定采用4級半定量積分法，即依據每張切片陽性細胞比例及著色深淺計分［2］:鏡下未見陽性細胞為0分，陽性細胞＜10%為1分，10% ～50%為2分，50%以上為3分;無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。依據二者乘積判斷陽性等級:0分為陰性(－)，1～3分為弱陽性(+)，4～6分為陽性(++)，7～9分為強陽性(+++)。所有免疫組化切片經雙盲法分別觀察評估，對少數不易判定切片的多次閱片確定。

1．3 統計學方法 采用SPSS10．0統計軟件進行數據處理，采用t檢驗和秩和檢驗，以P≤0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 血清VEGF水平 ICP組血清VEGF為(40．27 ±11．35)ng/L，對照組為(78．21 ± 14．69)ng/L，兩組比較 P ＜0．01。

2．2 VEGF及Flt-1表達定位 VEGF及 Flt-1在ICP組和對照組胎盤中的分布基本一致，主要分布在合體滋養細胞、細胞滋養細胞、血管內皮細胞和絨毛間質細胞。

2．3 VEGF及Flt-1表達強度 ICP組胎盤 VEGF及Flt-1表達強度與對照組相比均明顯降低(P＜0．01)，見表 1。

表1 VEGF及Flt-1在ICP組和對照組胎盤表達強度的比較［例(%)］

3 討論

VEGF是一種高效特異內皮細胞有絲分裂原，主要由血管內皮細胞產生。Flt-1是VEGF的高親和力受體。兩者結合可誘導內皮細胞增殖，調節內皮細胞間及內皮細胞與基質間相互作用，促進血管形成和增加血管通透性［3］。

VEGF是促進胎盤血管網絡形成和構建的最主要的細胞因子。整個孕期均能檢測到VEGF及其受體的表達，VEGF在受精、著床、胎盤血管形成及胎兒生長發育中起重要作用［4］。在孕早期，胎盤滋養細胞產生VEGF，促進胎盤毛細血管網絡發育;在孕晚期，隨著胎盤功能成熟，毛細血管生成減少，VEGF發揮調節血管通透性的作用，維持母胎間營養物質交換［3］。進一步研究發現，血管生長是胎盤形成過程中的關鍵因素，血管機能不全是導致產科并發癥的重要因素之一［5］。血清或組織VEGF及Flt-1的表達異常，必然引起血管生成和滋養細胞浸潤異常，導致各種異常妊娠和妊娠并發癥的發生［2，3，6～8］。

本研究發現，ICP組血清VEGF水平與對照組相比明顯降低，提示胎兒在子宮內的生長發育主要受胎盤血液供應的影響，而這與其表達的VEGF水平關系密切，通過VEGF濃度的變化，來調節胎盤毛細血管密度及通透性。VEGF濃度降低可致胎盤毛細血管密度降低和血液灌注減少。因此，我們認為通過檢測血VEGF水平對臨床監測ICP有一定實際意義。本組研究還發現，VEGF及Flt-1在ICP組和對照組胎盤中的分布基本一致，主要分布在合體滋養細胞、細胞滋養細胞、血管內皮細胞和絨毛間質細胞;但是表達強度明顯不同，ICP組胎盤VEGF及Flt-1表達強度與對照組相比明顯降低，差異有統計學意義。結果提示，VEGF和Flt-1在胎盤的表達定位說明VEGF以自分泌形式調節滋養細胞的浸潤分化和代謝，以旁分泌形式促進胎盤的血管形成和增加血管的通透性，參與子宮血管重鑄，以利于母胎物質交換和妊娠維持。ICP組胎盤VEGF及Flt-1表達降低引起滋養細胞的分化與增殖異常，滋養細胞侵入障礙，影響子宮血管重鑄;同時，VEGF及Flt-1表達減少使胎盤血管生成減少，胎盤血流灌注減少，進一步損傷血管內皮細胞的功能，導致胎盤毛細血管密度降低和血管通透性下降，影響了胎盤屏障的物質交換功能和胎盤血液供應，發生胎盤缺血缺氧和胎盤功能不全。一旦發生應激刺激(如感染、宮縮等)，可致臨床常見的胎兒窘迫、死胎、死產和圍生兒死亡等妊娠不良結局。由此推斷，VEGF在ICP發病中占有一定地位，有必要進一步深入研究其作用機制，為ICP防治提供理論依據。

綜上所述，血清VEGF水平下降及胎盤VEGF、Flt-1表達降低可能與ICP發病機理有關。

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