原發性肝細胞癌患者組織中瘦素及其受體表達與臨床病理特征的關系

蔡 俊，王宏升

(北華大學附屬醫院，吉林吉林132011)

近年研究發現，瘦素(leptin)及其特異性瘦素受體(OB-R)在多種腫瘤中均有異常表達，提示其表達可能與腫瘤的發生、發展關系密切［1，2］。關于 leptin及其受體在原發性肝細胞癌(HCC)中表達情況的研究不多，并且結果報道不一［3～6］。2010年 11月～2011年4月，我們通過RT-PCR和Western blot方法檢測HCC及癌旁組織中leptin及OB-R mRNA和蛋白的表達，并分析其與臨床病理特征之間的關系，旨在為進一步研究leptin及其受體與HCC的關系奠定基礎。

1 材料與方法

1．1 材料 HCC標本33例，癌組織及癌旁組織標本均取自術中，先切取癌旁組織(距腫瘤邊緣5 cm)，再切取癌組織。將取下的標本迅速切成0．3 cm×0．3 cm×0．3 cm大小裝入凍存管中，經液氮速凍后保存于液氮罐中。標本均經病理證實，并記錄臨床資料，包括年齡、性別、HBV感染、血清AFP水平、腫瘤大小、TNM分期等。其中男30例、女3例，年齡22 ～70(48．5 ±12．9)歲。

1．2 方法

1．2．1 RT-PCR檢測mRNA表達 取肝癌及癌旁組織 30 mg，用 RNeasy Mini kit(Qiagen，Valencia，CA)提取組織總RNA并用紫外分光光度計方法定量，用High Capacity RNA-to-cDNA Kit進行cDNA合成(Applied Biosystems，USA)。取 cDNA 200 ng，用AmpliTaq Gold DNA聚合酶(Applied Biosystems，USA)進行目的基因的PCR擴增。引物序列及產物大小如下:leptin上游引物5'-TTCTTGTGGCTTTGGCCCTA-3'，下游引物 5'-GGAGACTGACTGCGTGTGTGAAA-3'，132 bp;OB-R上游引物 5'-TGTTGTGAATGTCTTGTGCC-3'，下游引物 5'-TACTCCAGTCACTCCAGATTCC-3'，394 bp。β-actin 為內參照檢測cDNA合成質量。

1．2．2 Western blot檢測蛋白表達 肝癌及癌旁組織勻漿，裂解液裂解后蛋白定量。取50 μg總蛋白進行SDS-PAGE電泳分離，用電轉儀將蛋白電轉至硝酸纖維素膜上，5%脫脂奶粉封閉1 h，一抗4℃孵育過夜，二抗孵育1 h，ECL化學發光法顯色，壓片曝光、顯影。leptin、OB-R和 β-actin抗體均購自Santa Cruz公司，通過預實驗確定一抗濃度。

1．2．3 統計學方法 應用SPSS13．0軟件包進行統計學處理，采用χ2檢驗，以P≤0．05為有統計學差異。

2 結果

2．1 leptin及 OB-R mRNA表達 見圖 1。leptin mRNA在癌和癌旁組織中的陽性率分別為66．7%(22/33)和87．9%(29/33);OB-R mRNA 在癌和癌旁組織中的陽性率分別為57．6%(19/33)和84．8%(28/33)。leptin及OB-R mRNA在癌旁組織中的陽性表達率均高于癌組織(P＜0．05)。

圖1 leptin和OB-R mRNA在HCC中的表達

2．2 leptin及OB-R蛋白表達 見圖2。leptin蛋白在癌和癌旁組織中的陽性率分別為63．6%(21/33)和81．8%(27/33);OB-R蛋白在癌和癌旁組織中的陽性率分別為 48．5%(16/33)和 75．8%(25/33)。leptin和OB-R蛋白在癌旁組織中的陽性表達率均高于癌組織(P ＜0．05)。

圖2 leptin和OB-R蛋白在HCC中的表達

2．3 與臨床病理特征的關系 對leptin和OB-R在肝癌中的表達與臨床病理參數，包括年齡、性別、HBV感染、血清AFP水平、腫瘤大小、臨床分期等進行了統計學分析，結果顯示leptin和OB-R的表達與臨床病理特征無顯著相關性(P＞0．05)。

3 討論

leptin主要通過與外周組織器官表達的OB-R相結合發揮其生物學效應。以往研究顯示，leptin與腫瘤的發生和發展相關，但是其作用是促進還是抑制腫瘤仍然存在分歧。有研究認為leptin、OB-R可促進細胞增殖與分化，可能在腫瘤的發生發展過程中起促進作用;也有研究者認為，leptin、OB-R在腫瘤免疫中發揮抗腫瘤效應。因此，leptin可能對于不同組織類型的腫瘤細胞具有不同的生物學作用。

leptin和OB-R在生物學功能方面的雙重作用已經越來越多的引起學者們的關注，對于leptin和OB-R在HCC中的表達情況報道不一。為明確leptin和OB-R在HCC患者癌和癌旁組織中的表達情況，我們采用更為靈敏的RT-PCR和Western blot方法分別檢測leptin和OB-R mRNA和蛋白的表達，研究結果發現，leptin和OB-R在癌旁組織中表達率均高于癌組織，兩者有顯著性差異，這與Wang等［3］應用免疫組化方法對leptin和OB-R在HCC癌和癌旁組織中的表達研究結果一致。我們還對leptin和OB-R的表達與患者年齡、性別、HBV感染、血清AFP水平、腫瘤大小和TNM分期等臨床病理參數的關系進行了分析，統計學分析結果未見顯著性差異。

綜上所述，HCC及癌旁組織中均存在著leptin以及OB-R的雙重表達。其對于肝癌發生發展過程中可能的機制還需要我們在未來的研究中繼續深入探討。

［1］Somasundar P，Yu AK，Vona-Davis L，et al．Differential effects of leptin on cancer in vitro［J］．J Surg Res，2003，113(1):50-55．

［2］Hardwick JC，Van Den Brink GR，Offerhaus GJ，et al．Leptin is a growth factor for colonic epithelial cells［J］．Gastroenterology，2001，121(1):79-90．

［3］Wang XJ，Yuan SL，Lu Q，et al．Potential involvement of leptin in carcinogenesis of hepatocellular carcinoma［J］．World J Gastroenterol，2004，10(17):2478-2481．

［4］Wang SN，Yeh YT，Yang SF，et al．Potential role of leptin expression in hepatocellular carcinoma［J］．J Clin Pathol，2006，59(9):930-934．

［5］沈磊，周晶，雷偉，等．瘦素及其受體與原發性肝癌關系的初步研究［J］．中華肝臟病雜志，2006，14(10):777-779．

［6］陳麗，石燕，蔣成英，等．瘦素和瘦素受體在肝癌中的表達與臨床意義［J］．南方醫科大學學報，2011，31(5):830-833．